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1、微量肉汤稀释法1.2.1. 抗菌药物和培养基制备同常量肉汤稀释法。1.2.2. MIC 板制备无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭 菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10山，第12孔不加药作 为生长对照，冰冻干燥后密封，-20C以下保存备用。1.2.3. 接种物制备将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度相当于0.5麦氏比浊标准的菌悬液，经MH肉汤1 : 1000稀释后，向每孔中加 100山，密封后置35C普通空气孵箱中，孵育1620h判断结果。当试验嗜血杆 菌属，链球菌属时，孵育时间为2024h，试验葡萄球菌和肠球菌对苯唑西林和 万古霉素的药敏试验时孵育时间必须满
2、24h。此时，第1孔至第11孔药物浓度 分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125口g/ml。1.2.4结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对 照孔（即不含抗生素）内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出 现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则 不应报告结果，需重复试验。通常对革兰阴性杆菌而言，微量肉汤稀释法测得 的 MIC 与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度（1 孔或 2 倍）。2琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50C左右的定量 MH 琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药
3、物的平板，接种受试菌，孵育后观察细 菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点 是可在一个平板上同时作多株菌 MIC 测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是 制备含药琼脂平板费时费力。2.1 培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.27.4。淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5% （V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。2.2 含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物 分别加入已加热溶解，并在4550C水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭 菌平皿，琼脂厚度34mm。通常按1: 9比例配制
4、药物琼脂平板，根据需要来 选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置28C冰箱 可贮存 5 天。2.3. 接种物制备与接种制备浓度相当于0.5 麦氏标准比浊管的菌悬液，再 1: 10 稀释，以多点接种器吸取制备好菌 液（约12山）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为 58mm的菌斑。接种好后置35C孵育1620h （甲氧西林耐药葡萄球菌、万古 霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。奈瑟菌属、链球菌属细菌置 5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。2.4. 结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细 菌生长的最低药物浓度为MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓 度。如果出现有 2 个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或 低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养 物纯度或重复试验。
