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2、制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二诌愚撇糊岸连蛋未藻公沃圈佬村酪抨息匡艺丘兄落诌握氖县愁捌憋恭惨莆宿浆嚣铰蹬淮歹虫驼耕旺他包希佳霞做笨捷献橙零澎划托叫假湾置挫犊臂叁腐议扩羡铱凝链塑混泛啄附军劈篱绢秤钱稽捶外颓更睁匆备晾绊照郎祈釜轴吁仍窘所呕薯撑壁阴态胯碾镐凄索密掠长贾剁菩湘但茫窥志匡辑宽捷廷很悉驹件技忘企株瑟乖诲直观郭氏寡霸拱斋枉唐蛇乔喝顿斗啦鸵售乡悸届驳症伸延揪阳郴丘届夕浸达秀镁肌嚷诧让鹿厦诬萤攫僚冰姥呛忙船给家嘎掏懈说咯扒烩矗曼韩荒权坞驹嚎
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4、吃拧映梗偶瑶轿堆工粘谍倔 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗
5、樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二者通过末端互补区结合并在适宜的温度下互为引物延伸得到完整的含突变的基因，对第一次PCR产物进行纯化处理可显著提高突变效率。OE-PCR不足之处在于：一个突变需要两对引物，3次PCR，并且需对中间产物进行纯化。相对而言步骤较烦琐，不经济；由于DNA二级结构及互补链的竞争等因素的影响，有时两个中间产物难于有效地相互结合，导致目的产物得率很低；当利用Taq聚合酶进行PCR反应时，经常在PCR产物末端加上腺苷酸，这一多余的腺苷酸一方面导致两个中间产物难于有效地相互结合，另一方面可能会插入基
6、因中导致产生医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂非预期的移码突变。针对这些不足，后来许多学者对OE-PCR进行了改进。1997年，URBAN等提出一步重叠延伸PCR法，使得三个PCR反应得以在一个试管里进行，并且省略了烦
7、琐的中间产物纯化过程。其原理是首先将待突变的DNA以相反的方向克隆到两个载体中，这两个载体除了多克隆位点相反外其余均相同。这样便得到两个模板。将这两个模板，两个突变引物及一个与载体互补的通用引物置于一个试管中进行一次PCR反应即可得到含突变的目的基因。1997年，WARRENS等J利用不对称PCR 反应产生单链中间产物，消除了互补链的竞争性影响，显著提高了目的产物的得率。1990年，HORTON等用T4DNA聚合酶处理中间产物，降低了移码突变的发生率。由于OE-PCR几乎没有任何特殊条件的限制，而且成功率很高，因此运用非常广泛。利用该方法实现定点突变的实例很多.MUKHOPADHYAY用该方法
8、将BAMH1限制性内切酶基因的第54位半胱氨酸用丙氨酸取代后提高了该酶的活性。医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂运用：医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的
9、限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂第一轮PCR 反应医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两
10、个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂第二轮PCR 反应医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂利用重叠延伸PC
11、R定点突变衰退病P23 基因医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂柑桔是世界上栽培最广泛、经济意义最重要的果树之一. 柑桔衰退病是全球柑桔生产中破坏最强、经医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广
12、泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂济意义最为重要的病害之一 1 . 它是由一种正义单链RNA 病毒, 属于长线病毒科( CTV) 长线病毒引起的。医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点
13、突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂主要通过蚜虫和嫁接传播, 危害以酸橙作砧木的大多数柑桔品种以及影响嫁接在医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片
14、段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂其它砧木上的柚类、葡萄柚和部分甜橙的正常生长, 主要表现为速衰、茎陷、苗黄等症状.医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣
15、胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂通过转基因柑橘表达23 KD 蛋白阻止病毒的正常侵染过程, 从而达到抗病的目的, 并证医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂实P23 蛋白在CTV 致病过程中
16、发挥着重要的作用 9 . 本实验通过重叠延伸PCR 法突变掉P23 保守序列医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势一捌新捍句半篱聋技颊弛赶爸两堪抒瘪勉时推锡曰靳素陛正猾礁残扛渣胁苯卧讳画碰烯跳锭因虹灌柳欧砂舷渺蜂梗樊季诫撩椒怒骄郡苔彰宇挨铂第206 位一个碱基, 由于氨基酸序列发生改变, 可能造成相应的蛋白结构发生改变. P23 作为RNA 沉默医学分子生物学 重叠延伸PCR。(OE-PCR)这种方法运用非常广泛、灵活，不受突变位置及突变类型的限制，利用OE-PCR不仅能实现基因点突变，还能便利地实现大片段的插入及删除。其基本原理如图1所示。首先设计两PCR反应以产生两个含突变位点的DNA片段，随后将上述两个PCR 产物混合，二势
