漆酶检测方法

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1、酶活力检测方法(愈创木酚法)1酶活力定义于30C, pH=4.5条件下,1分钟催化氧化1 umol愈创木酚所需酶量即为1个酶活力单 位,以U表示。2试剂和溶液2.1愈创木酚基础反应液:2.1.1取137.4 L愈创木酚用蒸馏水溶解,2.1.2再称取4.5gT二酸,2.1.3然后用0.1mol/L的NaOH溶液调pH至4.5,最后定容至1000mL3仪器和设备3.1分光光度计,1cm比色皿3.2恒温水浴30士0.2 C3.3秒表3.4试管4分析步骤4.1将待测酶液稀释到吸光度值在0.20.8范围内4.2取稀释后酶液0.6mL加入到试管中,再加入2.4mL愈创木酚基础反应液;4.3将加完酶液和反应

2、液的试管放置在30C水浴锅中,水浴30min;4.4水浴完毕,用分光光度计在465nm下测其吸光度5计算酶活(U/L) =nXAX 13.89,式中:A吸光度n稀释倍数13.89换算系数酶活力检测方法(ABTS 法)1酶活力定义于30C, pH=4.0条件下,1分钟催化氧化lumolABTS所需酶量即为1个酶活力单位, 以U表示。2试剂和溶液2.1 ABTS溶液:0.25gABTS溶于30ml超纯水中,装于棕色试剂瓶中待用。2.2酒石酸钠缓冲溶液(0.1M, pH=4.0): 2.3g酒石酸钠溶用超纯水溶解(用1mol/L 的丁二酸将pH调至4.0)定容至100ml容量瓶,放试剂瓶中待用3仪器和设备3.1分光光度计,1cm比色皿3.2恒温水浴30士0.2 C3.3秒表3.4试管4分析步骤4.1将待测酶液稀释到吸光度值在0.20.8范围内4.2取酒石酸钠缓冲溶液2.85ml+ABTS溶液0.1ml+稀释后的酶液0.05ml于试管内;4.3将加完酶液和反应液的试管放置在30C水浴锅中,水浴30min;4.4水浴完毕,用分光光度计在420nm下测其吸光度5计算酶活(U/L)二nXAX55.56,式中:A吸光度n稀释倍数55.56换算系数

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