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1、单元过关 梯度训练（十五） 生物技术实践1下列是有关大肠杆菌的培养实验，请回答：(1)配制培养大肠杆菌的培养基时，通常在培养基中加入蛋白胨和_作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的_。 (2)大肠杆菌培养和分离的实验中，在_中进行扩大培养，培养液经_后，在LB固体培养基上进行_，并将培养皿_放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及_，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。 (3)通常对获得的纯菌种可以依据_的形状、大小等特征进行初步的鉴定。 (4)关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是_。A高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压
2、力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种工具经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上解析：(1)细菌培养基通常加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质，并加入一定量的NaCl维持渗透压。(2)大肠杆菌培养和分离实验中，采用LB液体培养基对大肠杆菌进行扩大培养，将培养液稀释后，在LB固体培养基上进行涂布分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可以获得单菌落。培养过程中，为检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，通常会将未接种的培养基放入恒温培养箱培养作为对照，若是出现菌落，说明上述操作存在问
3、题。(3)可以通过菌落的形态、大小等特征进行初步的鉴定。(4)高压灭菌加热结束时，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，开启锅盖；倒平板时，打开一条稍大于锥形瓶口的缝隙倒入；接种工具过热会杀死菌种，应等其冷却后挑取菌落；由于培养皿需倒置培养，因此用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上。答案：(1)酵母提取物NaCl(2)LB液体培养基稀释涂布分离倒置无菌操作是否规范(3)菌落(4)D2(2019宁波质检)如表是用于从土壤中分离纯化细菌的培养基配方。材料牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL请回答：(1)培养基的类型很多，按照“细菌喜_，霉菌喜_
4、”的原则配制上述培养基后，一般还要调节 pH 并对培养基进行_处理。(2)分离纯化微生物最常使用的划线分离法中，接种环在菌液中蘸菌液_次；若用涂布分离法，则制备细菌悬液时，一般需进行_处理，为确保操作过程不被杂菌污染，接种必须在_附近操作。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？_。(列举一项)解析：(1)按照“细菌喜荤，霉菌喜素”的原则配制上述培养基后，一般还要调节 pH 并对培养基进行灭菌处理。(2)分离纯化微生物最常使用的划线分离法中，接种环在菌液中蘸菌液一次；若用涂布分离法，则制备细菌悬液时，为防止菌液中的微生物过多，一般需进行稀释处理，为确保操作过程不被杂菌
5、污染，接种必须在酒精灯火焰附近操作。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是稀释倍数不够，菌液的浓度太高；或划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；或培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染。答案：(1)荤素灭菌(2)一稀释酒精灯火焰(3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染3(2019“七彩阳光”联盟高三联考)回答下列与果酒和果醋的制作的有关问题：(1)葡萄酒是酵母菌在无氧条件下的发酵产物，即将_氧化成乙醇，当培养液中乙醇的浓度超过_时，酵母菌就会死亡。果醋则是醋杆菌在有氧条件下将_氧化而来的。(2)用
6、葡萄汁制葡萄酒：发酵瓶装量不能超过_。开始时，酵母菌的_会使发酵瓶出现负压，原因是_，若这种负压情况持续3天以上，必须加入_，使发酵尽快发生。解析：(1)葡萄酒是酵母菌在无氧条件下的发酵产物，即将葡萄糖氧化成乙醇；当培养液中乙醇的浓度超过16%时，酵母菌就会死亡。果醋则是醋杆菌在有氧条件下将乙醇氧化而来的。(2)用葡萄汁制作葡萄酒时，发酵瓶装量不能超过2/3。开始时，酵母菌的需氧呼吸(或有氧呼吸)会使发酵瓶出现负压，原因是需氧呼吸消耗O2，产生CO2，但CO2在水中溶解度大于O2，使发酵瓶内气体量减少形成负压；若这种负压情况持续3天以上，必须加入酵母，使发酵尽快发生。答案：(1)葡萄糖16%乙
7、醇(2)2/3需氧呼吸(或有氧呼吸)需氧呼吸消耗O2，产生CO2，但CO2在水中溶解度大于O2，使发酵瓶内气体量减少形成负压酵母4在果汁生产中需用到果胶酶，某课题研究小组为了探究果胶酶的某些特性，进行了如下实验：(1)实验方法：请将图1中所示的操作进行排序：_。(2)实验结果：对照组与实验组进行了相同时间的实验，结果如图2中曲线甲所示：图2中自变量是温度，除此之外还可用来表示_。A酶的浓度B苹果泥的量C水的加入量 DpH图2中的纵坐标还可用_来表示。实验步骤中，在果胶酶和苹果泥混合前，将二者分装在不同试管中并进行恒温的目的是_。实验小组改变了实验条件后重复做实验，得到曲线乙，苹果汁的澄清度最高
8、点对应的横坐标是同一位置的原因是_。引起曲线乙下移的原因是_(至少答出两条)。解析：(1)实验顺序：制备苹果泥和配制果胶酶苹果泥和果胶酶分别水浴保温苹果泥和果胶酶混合保温过滤果汁后用量筒计量。(2)果胶酶的活性受温度、pH等条件的影响，而与底物的量、酶的浓度和水的加入量没有关系；每一种酶都有一个最适温度和最适pH，且该值恒定。衡量实验结果的指标有两个：一个是苹果汁的体积，另一个是苹果汁的澄清度。为了保证实验在相应温度下进行，必须使酶和底物分别保温达到要求后再混合。在相同温度条件下，pH、酶的浓度和底物的浓度也会改变反应速率。答案：(1)a、c、d、b(2)D苹果汁的体积保证底物和酶在混合时的温
9、度是相同的同一种酶的最适温度是一定的，不会因酶的浓度、底物量的不同而改变pH、酶的浓度和苹果泥的量等因素不同5(2019稽阳10月联考)海南粗榧是一种濒危植物，其产生的三尖杉碱对急性及慢性粒细胞白血病和恶性淋巴病有较好的疗效。请回答有关问题：(1)测定不同来源海南粗榧植株的三尖杉碱含量：精确称取10 mg三尖杉碱标准品，溶于甲醇并_至5 mL容量瓶中，配制成2 mg/mL的母液，再将母液分别_成一系列浓度的工作液各2 mL，加入显色剂，测定光密度值(OD值)，绘制标准曲线。如果实验中发现OD值太大不利于作图，应该_(填“增大”或“减小”)光程。(2)在对海南粗榧进行组织培养的时候，首先配制MS
10、培养基，其中CuSO4主要用于提供_(A.大量元素B微量元素C有机成分D能源)，在MS培养基的基础上再配制发芽培养基和生根培养基，分装到三角瓶中，加上封口膜后在_压力下灭菌20 min待用。(3)三尖杉碱属于_代谢产物，可以通过二段法进行细胞悬浮培养，即细胞系先在生长培养基中培养一段时间以累积_，再转入生产培养基促使细胞大量合成有效三尖杉碱，从而实现工业化生产。解析：配制溶液时，用容量瓶定容，母液需要稀释后使用。OD值和细胞密度成正比，OD值大，透过比色杯光太少，所以应该减小光程。生物碱属于次生代谢产物，生长培养基主要是让细胞繁殖起来，生产培养基主要让细胞产生生物碱(注意生长和生产区别)。答案
11、：(1)定容稀释减小(2)B1 kg/cm2(3)次生生物量(细胞量)6某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下。请回答：(1)土壤悬液首先经80 处理15 min，其目的是筛选出_。(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行_，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到_，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与_强弱相关。(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是_。液体培养基与固体培养基相比不含有的成分是_。(4)在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子
12、溶液中，使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行_。A吸附B包埋C装柱D洗涤(5)温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是_。A测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60 和45 B测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶C固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽D65 时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点解析：(1)土壤悬液首先经80 处理15 min，目的是使大多数的不耐高温的微生物死亡而筛选出耐高温菌株。(2)土壤悬液在无菌条件下进行梯度稀释，使用涂布分离法接种于含有植酸钠的固体培养基上，经
13、培养后可以观察到单菌落的出现，且出现透明圈，透明圈的直径大小与植酸酶的活性强弱相关。(3)振荡培养的目的是向培养液供氧，同时使微生物与培养液充分接触，有利于微生物的繁殖与生长。液体培养基与固体培养基的区别是液体培养基不含凝固剂琼脂。(4)固定化酶的方法主要有包埋法、吸附法和共价偶联法、交联法等。题干所述方法是将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该过程属于包埋法。(5)植酸酶属于耐高温酶，65 时固定化植酸酶的相对酶活性仍然较高，说明其没有发生蛋白质的变性。答案：(1)耐高温菌株(2)稀释单菌落植酸酶的活性(3)供氧琼脂(凝固剂)(4)B(5)D7(2019杭州教学质量检测)不同浓度还原型谷胱甘肽(GSH)处理对甘蓝泡菜中硝酸还原酶(NR)活性和亚硝酸盐含量的影响如图所示。请回答：(1)甘蓝泡菜的腌制和样品处理：腌制甘蓝泡菜时，所用盐水需煮沸，其目的是_。甘蓝样品处理过程中，加硫酸锌产生沉淀后，水浴加热的目的是_。然后冷却至室温，用滤纸过滤，用水淋洗23次，将_在容量瓶中定容。(2)测定亚硝酸盐含量：取10 mL样品溶液，进行显色处理。用光程为1 cm的_在550 nm处测定光密度值。(3)甘蓝泡菜发酵过程中NR活性和亚硝酸盐含量均呈_
