分子生物学cgqe

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1、1、基因因的概念念基因是合合成一种种有功能能的多肽肽链或者者RNAA分子所所必需的的一段完完整的DDNA序序列。(不不仅包括括编码肽肽链或RRNA的的核苷酸酸顺序,还还包括表表达所需需的调控控等顺序序)2、现代代基因概念念的发展展断裂基因因 基因因的结构构是断裂裂的。原原核生物物的基因因结构大大多数是是连续的的,即基基因编码码蛋白质质的序列列是不中中断的。而而真核生生物基因因的编码码序列是是不连贯贯的,即即在两个个编码序序列之间间有一段段不编码码蛋白质质的非编编码序列列。编码码序列称称为外显显子,非非编码序序列称为为内含子子。重叠基因因-两个个基因共共有一段段重叠的的核苷酸酸序列,这这就是重重

2、叠基因因。基因因重叠有有两种情情况:一一是一个个基因的的密码子子完全包包含在另另一个基基因内;二是两两个基因因只有一一个或几几个核苷苷酸的重重叠。假基因-具具有与功功能基因因相似的的序列,但但由于有有许多突突变以致致失去了了原有的的功能,所所以假基基因是没没有功能能的基因因,常用用 表示示。1、通常常散布于于有活性性的功能能基因之之间。22、一般般认为假假基因是是由mRRNA反反转录成成cDNNA,然然后整合合到基因因组上。3、没有生物学功能,不再受到进化的选择压力,因此可以积累很多突变。3、基因因的本质质:4、基因因的发展展历史:5、DNNA复性性:热变变性的DDNA如如缓缓冷冷却,已已分开

3、的的互补链链又可能能重新缔缔合成双双螺旋,这这叫复性性。6、DNNA的变性性:当双双螺旋DDNA加加热至生生理温度度以上(接接近10000CC)时,它它就失去去生理活活性,这这时DNNA双股股链间的的氢键断断裂,最最后双股股链完全全分开成成为无规规则线团团,这个个过程叫叫DNAA的变性性。7、DNNA双螺螺旋:BB-DNNA双螺螺旋结构构模型要要点:(1) 两条反平平行的多多核苷酸酸链围绕绕同一中中心轴盘盘绕成右右手双螺螺旋(2)脱脱氧核糖糖与磷酸酸在外侧侧形成螺螺旋的轨轨迹,核核苷酸间间彼此通通过3,5-磷酸酸二酯键键相连;碱基伸伸向内部部,其平平面与螺螺旋轴垂垂直;糖糖环平面面与中轴轴平行

4、。(3)两两条核苷苷酸链依依靠彼此此碱基之之间形成成的氢键键相连系系而结合合在一起起,且总总是A=T,GC。(4)双双螺旋的的平均直直径为22 nmm,每个个螺旋圈圈上升110对核核苷酸,螺螺距为33.4 nm。(5)螺螺旋表面面有一条条大沟和和一条小小沟。8、DNNA损伤伤的修复复:指DDNA受受到损伤伤后,细细胞内发发生的使使DNAA的化学学组成和和核苷酸酸序列重重新恢复复或使细细胞对DDNA损损伤产生生耐受的的一系列列反应。9、第一一个重组组DNAA的酶是是ecoori。10、DDNA复复制与转转录(相相同与不不同):11、DDNA分分子标记记技术有有哪些:分子标记记的类型型:第一类为为

5、基于DDNA-DNAA杂交的的DNAA标记。该该标记技技术是利利用限制制性内切切酶酶解解及凝胶胶电泳分分离不同同生物体体的DNNA分子子,然后后用经标标记的特特异DNNA探针针与之进进行杂交交,通过过放射自自显影或或非同位位素显色色技术来来揭示DDNA的的多态性性。其中中最具代代表性的的是发现现最早和和应用广广泛的RRFLPP标记。第二类为为基于PPCR的的DNAA标记。这这类DNNA标记记可分为为随机引引物PCCR标记记和特异异引物PPCR标标记。随随机引物物PCRR标记包包括RAAPD标标记、IISSRR标记等等,其中中RAPPD标记记使用较较为广泛泛。特异异引物PPCR标标记包括括SSR

6、R标记、SSTS标标记等,其其中SSSR标记记已广泛泛地应用用于遗传传图谱构构建、基基因定位位等领域域。 第三类为为基于PPCR与与限制性性酶切技技术结合合的DNNA标记记。这类类DNAA标记可可分为二二种类型型,一种种是通过过对限制制性酶切切片段的的选择性性扩增来来显示限限制性片片段长度度的多态态性,如如AFLLP标记记。另一一种是通通过对PPCR扩扩增片段段的限制制性酶切切来揭示示被扩增增区段的的多态性性,如CCAPSS标记。第四类为为基于单单核苷酸酸多态性性的DNNA标记记。如:SNPP标记。它它是由DDNA序序列中因因单个碱碱基的变变异而引引起的遗遗传多态态性。目目前SNNP标记记一般

7、通通过DNNA芯片片技术进进行分析析。RFLPP标记:限制性性酶切片片段长度度多样性性,是用用限制性性内切酶酶处理不不同个体体基因组组DNAA所产生生的大分分子片段段的大小小的多样样性。RAPDD标记:以随机机引物通通过PCCR反应应非定点点扩增DDNA片片段,然然后用凝凝胶电泳泳分离扩扩增片段段,经染染色来显显示扩增增DNAA片段的的多样性性。SSR标标记:以以1-66个核苷苷酸为基基本单元元,串联联重复次次数一般般为100-500,经聚聚丙烯酰酰胺凝胶胶电泳后后,比较较扩增段段的迁移移距离,就就可知在在不同个个体间某某SSRR作为上上的长度度多样性性。AELPP标记:扩增片片段长度度多样性

8、性,设计计对某种种限制性性内切酶酶的通用用接头及及可与接接头序列列的限制制性酶切切位点的的序列配配对的专专用引物物,通过过PCRR进行的的限制性性片段扩扩增,分分析其长长度多态态性。12、DDNA复复制具有有哪些特特点:1. DDNA复复制是半半保留复复制,在在半保留留复制方方式中两两条亲代代链分开开,分开开后的每每一条链链都可作作为模板板用于合合成互补补的、反反平行的的子链。2. DDNA合合成需要要DNAA聚合酶酶, DDNA聚聚合酶需需要一个个游离的的3羟基作作为引物物(可以以由RNNA或DNAA提供),以以脱氧核核苷三磷磷酸作为为底物,催催化 33羟基与与脱氧核核苷三磷磷酸的55-磷酸

9、基基团形成成磷酸二二酯键,释释放出焦焦磷酸(随随后水解解为无机机磷酸),使使核苷酸酸整合到到延伸的的聚核苷苷酸链中中。新链链按53方向生生长。 3. 原原核生物物中存在在3种聚合合酶(ppol I、II和IIII)。而而真核生生物中存存在5种聚合合酶(ppol、和)。在在E. colli中,pool 是主要要的复制制酶,而而poll I既既有复制制功能,又又有修复复功能。所所有三种种原核生生物的DDNA聚聚合酶都都具有335外切酶酶的活性性。DNNA ppol I和IIII还具有有53外切酶酶活性。 4.复复制起始始发生在在复制起起点,EE. ccolii中存在在唯一的的复制起起点(OOriC

10、C),从从一个复复制起点点沿着相相反方向向双向进进行;真真核生物物染色体体含有许许多复制制起点。真真核生物物DNAA的复制制也是双双向进行行的,但但与E. cooli不不同,可可以在许许多复制制起点同同时双向向进行复复制。 5. DNAA复制需需要双链链解旋形形成复制制叉,解解旋需要要解旋酶酶,ATTP驱动动的解旋旋酶使复复制起点点(OrriC)区区解旋,制制造复制制叉,单单链结合合蛋白与与两条模模板链结结合防止止他们重重新形成成双螺旋旋。在复复制叉处处,亲代代DNAA的两条条链作为为模板用用于合成成新的DDNA。6. 由由于DNNA聚合合酶催化化的链的的延伸是是53方向,以以及双螺螺旋DNN

11、A中的的两条链链是反平平行的。一一条链(前前导链)的的合成是是连续的的,合成成方向与与复制叉叉移动方方向一致致;另一一条链(后后随链)的的合成是是不连续续的,合合成方向向与复制制叉移动动方向相相反。 7. 复制起起始是借借助于引引发酶合合成的RRNA引引物开始始的,前前导链合合成需要要一个RRNA引引物,而而后随链链合成需需要多个个RNAA引物。8.复制制的忠实实性非常常高,主主要是由由于DNNA聚合合酶具有有35外切酶酶的活性性。但在在复制过过程中由由于碱基基配对错错误、以以及碱基基共价修修饰、碱碱基缺失失和插入入等都会会产生突突变,并并造成DDNA损损伤。复复制后的的修复主主要包括括5种修

12、复复机制:直接修修复、切切除修复复、错配配修复、重重组修复复和SOOS修复复等。 13、启启动子:是指RRNA聚聚合酶识识别、特特异结合合和开始始转录的的一段DDNA序序列。启启动子是是位于结结构基因因5端上游游的一段段DNAA序列,能能够指导导全酶同同模板正正确结合合,活化化RNAA聚合酶酶,启动动基因转转录。14、反反式作用用因子:能直接接或间接接识别和和结合在在顺式作作用元件件上,调调控靶基基因表达达的蛋白白质因子子,也称称为转录录因子。15、熔熔解温度度(Tm):熔解解曲线的的中点,即即一半的的DNAA双螺旋旋解为单单链所对对应的温温度称为为熔解温温度。16、错错义突变变:碱基基替换使

13、使编码某某种氨基基酸的密密码子变变成编码码另一种种氨基酸酸的密码码子,从从而使多多肽链的的氨基酸酸种类和和序列发发生改变变。17、蛋蛋白质组组: 一种基基因组所所表达的的全套蛋蛋白质; 一个个细胞或或一个机机体的基基因所表表达的全全部蛋白白质。18、蛋蛋白质翻翻译后,新新生态链链的加工工过程: 新生态链链的折叠叠 至至少有两两类蛋白白质参与与体内新新生态链链的折叠叠,即酶酶和分子子伴侣。 蛋白质合合成的加加工与修修饰 某些蛋蛋白质在在其肽链链合成结结束后,还还需进一一步加工工转变为为具有正正常生理理功能的的蛋白质质,有些些蛋白质质还需经经过一定定修饰才才能成为为成品而而参与正正常的生生理活动动

14、。 亚单位的的聚合 由多多肽及其其辅助成成分(脂脂类、核核酸、血血红素等等)构成成的蛋白白质,在在多肽链链合成后后,还需需经过多多肽链及及肽链与与辅助成成分之间间聚合过过程,才才能成为为有活性性的蛋白白。19、锌锌指结构构(3001):指的是是在很多多蛋白中中存在的的一类具具有指状状结构的的结构域域,这些些具有锌锌指结构构的蛋白白大多都都是与基基因表达达调控有有关的功功能蛋白白。锌指指结构都都是一个个螺旋与与一个反反向平行行片层的的基部以以锌原子子为中心心,通过过与一对对半胱氨氨酸和一一对组氨氨酸之间间形成配配位键相相连接,锌锌指环上上突出的的赖氨酸酸、精氨氨酸参与与DNAA的结合合。20、遗

15、遗传密码码子的特特性:1.连续续性:编编码蛋白白质氨基基酸序列列的各个个三联体体密码连连续阅读读,密码码间既无无间断也也无交叉叉。 2. 简简并性:遗传密密码中,除除色氨酸酸和甲硫硫氨酸仅仅有一个个密码子子外,其余余氨基酸酸有2、3、4个或多多至6个三联联体为其其编码。3. 通通用性:蛋白质质生物合合成的整整套密码码,从原原核生物物到人类类都通用用。 已发现少少数例外外,如动动物细胞胞的线粒粒体、植植物细胞胞的叶绿绿体。 密码的通通用性进进一步证证明各种种生物进进化自同同一祖先先。 4. 摆摆动性(wobbblee)转运氨基基酸的ttRNAA的反密密码需要要通过碱碱基互补补与mRRNA上上的遗传传密码反反向配对对结合,但但反密码码与密码码间不严严格遵守守常见的的碱基配配对规律律,称为为摆动配配对。21、OOD值与与吸光度度的换算算:22、SSD序列列 :mRNNA上的的AGGGAGGGU区域域作为翻翻译起始始信号,被被称为SShinne-DDalggarnno顺序序或SDD序列。核酸的化化学组成成:碱基、核核苷、核核苷酸23、mmRNAA的可变变剪接:许多真真核生物物基因的的mRNNA前体体可以经经过不同同的剪接接方式产产生多种种mRNNA分子子,从而而编码出出多种不不同功能能的异形形体蛋白白质,这这种特殊殊的mRRNA前

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