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1、大肠杆菌生理生化鉴定路线：氧化酶 （-）f苯丙氨酸脱氨酶（-）h2s（-）dna酶（-）f乳糖（+）f柠檬酸盐（-） D-阿东醇（-）赖氨酸脱羧酶（+）-纤维二糖（-）1、氧化酶巴氏杆菌1、原理：氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色 素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。2、试剂盐酸二甲基对苯撑二胺（或四甲基对苯撑二胺）1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中贮存。3、方法在干净培养皿里放一张滤纸，滴上二甲基对苯撑二胺的1%水溶液，仅使滤纸湿润即 可，不可过湿，用金丝接种环（不可用镍铬丝）取1824 h的菌苔，涂沫在湿润的滤纸上，在 10
2、s内涂抹的菌苔现红色者为阳性，（四甲基对苯撑二胺为蓝色）1060 s现红色者为延迟 反应，60 s以上现红色者不计，按阴性处理。4、注意事项：a. 盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变 为红褐色，即不宜使用。b. 铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳 性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。c. 在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延 长了反应时间，造成假阴性。2、苯丙氨酸脱氨酶变形杆菌1、原理：某些细菌（如变形杆菌）具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨，形成
3、苯丙酮酸， 苯丙酮酸遇到三氯化铁呈蓝绿色。本试验用于肠肝菌科和某些芽孢杆菌属的鉴定。2、培养基酵母膏3gNaCl5gNa2HPO41gDL-苯丙氨酸2g（或L-苯丙氨酸）1g蒸馏水1000 mlpH为7.0，分装试管，121 C蒸气灭菌10min，摆成长斜面。3、试剂10%（W/V）的 FeCl3 溶液4、方法适当浓度接种，37C培养4h或824h测定。将试剂45滴滴到生长菌的斜面上，当斜 面上和冷凝水中产生绿色时为阳性反应，即表明己形成了苯丙酮酸，不变则为阴性。3、HSCTSI）变形杆菌鸡白痢沙门氏1、原理：有些细菌可分解培养基中含硫氨基酸或含硫化合物，而产生硫化氢气体，硫化氢遇铅盐 或低铁
4、盐可生成黑色沉淀物。2、培养基：牛肉膏7.5g蛋白胨10gNaCl5g明胶100120g（或琼脂15g）10%FeCl2 （培养基灭菌后无菌加入）5 ml蒸馏水1000 mlpH 7.0，112C灭菌 20min在明胶培养基尚未凝固时，加入新制备的过滤灭菌的FeCl2,用无菌试管分装，培养基 高度约为45 cm，立即置冷水冷却凝固。3、方法用穿刺法接种，30C培养，1、3、7天，观察，变黑者为阳性，不变为阴性。4、注意事项 此方法适用于肠杆菌科细菌鉴定 在实验过程中可用硫酸亚铁代替氯化亚铁 可同时测定明胶液化，20C培养4、DNA酶金黄色葡萄球菌1、培养基酪朊水解物15g大豆蛋白胨5gNaCl
5、5gDNA2g甲苯胺蓝0.1g琼脂15g蒸馏水1000 ml除DNA和甲苯胺蓝之外，加热熔化后调pH至7.2,加入DNA和甲苯胺蓝，混匀后分装，121C灭菌30 min2、方法 将培养基倒平板，点接幼龄种于培养皿上，适温培养2天 结果观察：在接种部位周围出现粉红色晕圈为阳性，沙雷氏菌可作阳性对照5、糖、醇发酵实验乳糖、纤维二糖、D-阿东醇1、培养基：蛋白胨水（pH7.6）100ml需要的糖（醇）类1g1.6%漠甲酚紫酒精溶液0.1ml （或0.2%漠麝香草酚蓝酒精溶液1.2ml）制法：1、将所需糖（醇、苷）1克，加入100ml蛋白胨水中，并按比例加入0.5%0.7% 琼脂制成半固体培养基，加热
6、溶解。2、加入1.6%漠甲酚紫酒精溶液0.1ml （或0.2%漠麝香草酚蓝酒精溶液1.2ml）， 摇匀。3、分装于试管内，10磅高压灭菌20分钟，检验备用。附：蛋白胨水培养基蛋白胨1克 氯化钠0.5克蒸馏水100ml1、将以上成份混合，加热溶解，校正pH至7.47.6。2、过滤、分装试管，每管约3ml。2、方法：以1824h幼龄菌种作种子，穿刺接种，每株2支。同时还要有标准株和不按种管 作对照37C培养1、3、5天后观察，如指示剂变黄，表示产酸，为阳性；不变或变蓝 （紫）则为阴性。6、柠檬酸盐利用试验枯草芽孢杆菌1、原理：某些细菌能够利用柠檬酸钠作为碳的唯一来源和无机磷酸铵作为氨的来源，因此能
7、够 在含有上述成分的合成培养基上生长，并且分解柠檬酸盐最后生成碳酸盐，使培养基变 为碱性。在指示剂漠麝香草酚蓝溶液的存在下，培养基由绿色变为深蓝色。2、培养基：Simmons培养基氯化钠5g硫酸镁0.2g磷酸二氢铵1glg磷酸氢二钾柠檬酸钠lg蒸馏水1000ml1 %漠麝香草酚蓝10ml琼脂20g将除琼脂和漠麝香草酚蓝溶液处的各成分溶解后，调pH值为6.87.0,加入琼脂融化， 再加入漠麝香草酚蓝溶液，分装试管，经121 灭菌15 min,制成斜面备用。3、方法 取待检菌在培养基上先划线再穿刺，37培养观察24d 结果判定：阳性者在培养基斜面上生长，并且Simmons培养基由草绿色变为蓝色7、赖氨酸脱羧酶1、培养基蛋白胨5g酵母膏浸3g葡萄糖1g蒸馏水1000ml0.2%漠麝香草酚蓝 12 ml待测氨基酸5g将以上氨基酸和漠麝香草酚蓝溶液外的各种成分加入蒸馏水中，加热溶解，调pH值 至6.8,加入0.2%漠麝香草酚蓝溶液和待测氨基酸。氨基酸应先溶解于NaOH溶液中，比例为0.5g L-a-赖氨酸+1.5% NaOH溶液0.5ml，再 调pH至6.8，分装于小试管内，每管1ml，121 C灭菌10min.2、方法用幼龄培养物作为种菌，直针接种于培养基中，上面加一层灭菌的液状石蜡。将试 管放在37C培养4d，每天观察结果。培养液先变黄后又变为蓝色为阳性，黄色者为阴 性。
