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1、SOD,POD,CAT,MDA可溶性蛋白用同一提取液。磷酸缓冲液配制：A 液(Na2HPO4 0.2M) :Na2HPO4.2H2O=35.61g(或 Na2HPO4.12H2O=71.64g)定容 1000MLB 液(NaH2PO4 0.2M) :NaH2PO4.H2O=27.6g(或 NaH2PO4.2H2O=31.21g)定容到 1000ml浓度mol/lPH值A液体积mlB液体积ml定容体积ml0.057.891.58.54000.17.584162000.17.061392000.16.012.387.72001/157.06139300130mmol/l甲硫氨酸（Met）溶液：称1
2、.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml0.75mmol/l氮蓝四唑（NBT）溶液：称0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml避光保存0.1mmol/LEDTA-N电溶液：取0.03721gEDTA-N程用磷酸缓冲液定容至1000ml0.02mmol/l核黄素溶液：取0.00753g核黄素定容至1000ml避光保存反应液组成 水：磷酸： Met： NBT： EDTA-Na2： FD=5： 30： 6： 6： 6： 6150ml 反 应 液 的 组 成 是 水 12.7ml+ 磷 酸 （0.05M,PH=7.8）76.3ml+Met15.25ml+NBT15.25ml+EDTA=
3、Na215.25ml+FD15.25mlSOD：称取0.5g鲜样，加1ml磷酸缓冲液（0.05mol/L PH=7.8）,冰浴研磨，研磨后再加入1ml缓 冲液倒入离心管，再用2ml缓冲液冲洗研钵，倒入离心管中，平衡后低温（0-4D 10000rpm离心 后10min冷藏保存。取相同型号的试管，加入20卩1上清液（2支对照管加缓冲液），分别加3ml反应 液，其中一支对照放于暗处，其余在4000lux下反应20-30min （温度高时时间短，温度低时时间长） 后再560nm下进行比色。计算公式：SOD 总活性（units.gFW） =（Ack-A）*V/Ack*0.5*W*a（V 酶液总体积 4m
4、l, w 样品重=0.5g, a测定是的酶液体积=0.02ml）POD：取上清液20卩1加入比色杯中（对照加磷酸），加3ml反应液，马上读470nm下的OD值并计 时，每个1min读1次（读0， 1，2， 3min）的OD值。反应液：0.1mol/L，PH=6.0的磷酸50ml,加入愈创木酚28卩1，于磁力搅拌器加热溶解，加入30%的 H2O219g1存于冰箱内。计算公式：POD 总活性（ OD470/Min.gFW） -OD470*V/a*W（V=4ml,a=0.02ml,W=0.5g）CAT：取上清液100卩1加入比色杯中(对照加磷酸)，加3ml反应液，马上读240nm下的OD值并计 时，
5、每个lmin再读一次(读第0， lmin的OD值)。反应液：O.lmol/L PH=7.0 磷酸缓冲液 20ml,加入 0.1mol/LH2O2(5.68ml30%H2O2 定容至 1000ml)5ml。 计算公式：CAT总活性( OD /Min.gFW) =AOD *V/a*W(V=4ml,a=0.1ml,W=0.5g) 数值下降。MDA:取上清液1ml(对照加1ml水)，加2mlTBA (硫代巴比妥酸)，封口沸水浴15min，迅速冷却 (用冷水冲泡)，倒入指形管中，4000转下离心20min,取上清液于600nm,532nm,450nm下比色。0.67%TBA：称0.67gTBA加少量1m
6、ol/LNAOH溶解，再用10%三氯乙酸定容100ml。MDA(卩g/gFW)=C*V/W=0.1548(D -D600)+0.013D450(V=0.012L,W=0.5g)可溶性蛋白：取上清液20卩1 (对照加水)，加3ml考马斯亮蓝放置2min,立即于595nm比色。G-250：称取100mgG-250溶于50ml90%乙醇中，加入85% (v/v)磷酸100ml，定容至1000ml,常 温可保存一个月。计算公式：蛋白质含量(mg/gFW) =3*Y*V/5*1000*a*W标准曲线Y=143.15OD+3.6 (生理组)或Y=143.56OD+1.28 (园艺系)V酶液总体积=4ml,
7、a=0.02ml,W=0.5g, 3/5由于标线是5ml中的含量，而本方法用3ml，1000将聘 变为 mg)可滴定酸：1.取一彩椒，称重，放入高速组织捣碎机内，加入等量水，捣碎12min。每2g 匀浆折算为 1g 试样。2.称取25-50g，用无CO2水100ml，洗入250ml容量瓶，在80度水浴中30min，取出冷却，用无 CO2 水定容过滤。3取滤液50ml或100ml加入三角瓶中。加酚酞5-10d，用NaOH标液滴定，呈微红色，当滴定接近 终点时，若溶液仍呈橙黄色，可再加2d酚酞，CK空白滴定。记下所消耗的体积。结果计算(1) 试样的可滴定酸度以每 100g 或 100mL 中氢离子
8、毫摩尔数表示，按下式计算：可滴定酸度mmol/100g(mL)= (cxV/ /VQx250/m(V)x100式中：c氢氧化钠标准溶液摩尔浓度V滴定时所消耗的氢氧化钠标准溶液体积(mL)V0吸取滴定用的样液体积(mL)m(V)试样质量(g)或体积(mL)250试样浸提后定容体积(mL)(2) 试样的可滴定酸度以某种酸的百分含量表示，按下式计算：可滴定酸度()=(cxVXk)/V0x250/m(V)x100式中：k换算为某种酸克数的系数，O.lMol/LNaOH标液：50gNaOH加入500ml蒸馏水，溶解贮于塑料瓶中，吸取5.4ml加入1000ml容 量瓶中，用刚煮沸冷却的蒸馏水稀释至刻度。0
9、.5%酚酞：0.5g酚酞加入100ml90%乙醇。 本试验用水应是不含二氧化碳的或中性蒸馏水,可在使用前将蒸馏水煮沸、放冷,或 加入酚酞指示剂用0.1mol/L氢氧化钠溶液中和至出现微红色。植物组织中游离氨基酸总量的测定：（茚三酮溶液显色法）水合茚三酮试剂：称取0.6g再结晶的茚三酮置烧杯中，加入15ml正丙醇，搅拌使其溶解。再加入 30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9mlPH5.4的乙酸-乙酸钠缓冲液，混匀，贮于棕色瓶中，置4C 下保存备用， 10d 内有效。乙酸-乙酸钠缓冲液（PH5.4）：称取乙酸钠54.4g加入100ml无氨蒸馏水，在电炉上加热至沸，使体 积蒸发至60ml左右。冷
10、却后转入100ml容量瓶中加30ml冰醋酸，再用无氨蒸馏水稀释至100ml。标准氨基酸:称取80C下烘干的亮氨酸46.8mg,溶于少量10%异丙醇中，用10%异丙醇定容至100ml。 取此液5ml,用蒸馏水稀释至50ml,即为含5卩g/ml氨基酸之标准液。0.1%抗坏血酸：称取50mg抗坏血酸，溶于50ml无氨蒸馏水中，随配随用。1.样品制备：取干样，混匀后，迅速称取0.05-0.1g,于研钵中加入5ml10%乙酸，研磨匀浆后，用蒸 馏水稀释至100m l。混匀，并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。2制作标准曲线：取6支20ml刻度试管，按下表操作：试剂123456标准氨基酸/ml00.20.40.
11、60.81.0无氨蒸馏水/ml2.01.81.61.41.21.0水合茚三酮/ml3.03.03.03.03.03.0抗坏血酸/ml0.10.10.10.10.10.1每管含氮量/ml012345加完试剂后混匀，盖上大小适中的玻璃球，置沸水中加热15min，取出后用冷水迅速冷却并不时摇 动，使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去，进而呈现蓝紫色，用60%乙醇定容至20ml。混匀 后再 570nm 下测定吸光度。3.样品测定：吸取样品滤液1.0ml,放入20ml干燥试管中，加无氨蒸馏水1.0ml，向每管中加入3.0ml 水合茚三酮，0.1ml抗坏血酸。加完试剂后混匀，封口，置沸水中加热15m i
12、n,取出后用冷水迅速冷却并不时摇动，使加热形成的 红色被逐渐氧化而褪去，进而呈现蓝紫色，用60%乙醇定容至20ml。混匀后再570nm下测吸光度。根据标准曲线查得含氮量。计算公式：100g样品中氨基态氮含量=（C*Vt/Vs*W） *100 （C为从标准曲线查得的氨基态氮含量, yg； Vt为样品稀释总体积，ml; Vs为测定时样品体积，ml； W为样品干重，g）注意：（1）因为茚三酮与氨基酸反应所生成的Ruhemans自在1h内摆出稳定，故稀释后尽快比色;（2）严格掌握加入抗坏血酸的量；（3）在80C水浴中加热，应该适当延长反应时间，效果良好。 可溶性糖：0.3g鲜样品（或0.03g干样）加
13、入10ml蒸馏水，封口沸水浴30min （2次），滤纸漏斗过 滤入50ml容量瓶中，冲洗残渣，定容。吸提取液1ml加入蒸馏水1ml （对照加2ml蒸馏水），加蔥 酮乙酸乙酯0.5ml,加浓硫酸5ml,振荡，沸水浴1min,自然冷却后与630nm下比色。计算公式：可溶性糖（） =100*Y*V/（a*n*W*106） （Y 由 Y 糖（卩g）=322.58OD-0.96774 查得 V 提取 液体积=50ml a测定时吸取的体积=1mln为稀释倍数W鲜样品重=0.3）叶绿素测定：取新鲜叶片，擦净表面污物，去掉中脉，用打孔器取叶圆片，混匀，称取叶圆片0.2g， 加20ml 80%的丙酮（80ml丙
14、酮定容于 100ml），封口，置于暗处 24-36h，到叶片变白，于 663nm,646nm,470nm下比色（对照是80%丙酮）。公式： Ca（mg/L）=12.21D663-2.81D646Cb=20.13D646-5.03D663Cx.c=（1000D470-3.27Ca-104Cb）/229叶绿体色素含量（mg/gFW） =C*V*n/W（V=0.02L,n=1,W=0.2g）根系TTC活力：根系去掉根尖和上部老根，取根0.4-0.5g,剪成2cm长的段，放入试管中，对照先加 入1mol/LH2SO4,其余试管中加入0.4%TTC和磷酸缓冲液（1/15mol/L,PH=7.0）等体积混
15、合液10ml, 封口，放入37C恒温箱4h,取出，除对照外其余加1mol/L H2SO42ml中止反应，放置15min后取出 根，吸干，再放回原试管，各试管中加入10ml 95%乙醇，封口，提取24h至根变白，根据颜色稀释 3-5倍后，于485nm下比色。40个样用量：0.4%TTC称1gTTC，溶于250ml蒸馏水中。1/15mol/L PH=7.0 取 A=61ml+B 液=39ml 稀释到 300ml1mol/L H2SO4:先在烧杯中加入100ml水，再加入浓硫酸11ml,冷却后定容200ml。计算公式：四氮唑还原强度（卩g/gFW.h） =（0D+0.0035）/4*h*W*0.0022 （h=4 W=0.4-0.5g）茎粗（为第一叶痕茎基部的粗度，用游标卡尺测量，每处理随机取5株，取其平均数）; 测定方法 茎粗为用游标卡尺测量地上部第三节间的直径。分3次对茎粗进行观测（5-6片叶之间）。株高（茎基部到生长点的长度，卷尺测量，每处理测5次，取其平均数）; 节间长度（为最终一次采收时，测分枝以上五个节间的长度之和除以5）。辣椒：叶面积、冠幅、株高
