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1、白芍微粉细胞破壁率的测定Determination of wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowderLI Ya, CAI Guangxian, YANG Yonghua, YANG Ying, WEN Junda(Research Center of Ultra-micro Engineering， Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha*, China)Abstract Objective: To establish a method to determ
2、ine wall- broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder. Methods: Cytometry was used to investigate the influence of ultra-pulverization on Raidix Paeoniae Alba, and wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder was also determined. Results: The regression analysis result of the weight of R
3、aidix Paeoniae Alba powder and the number of complete cell indicated that both correlated significantly. Wall-broken rate on Raidix Paeoniae Alba micropowder was 97.01%. Conclusion: Cell counting method on the powder of Raidix Paeoniae Alba is convenient, stable and reliable.Key words Wall-broken Ra
4、te; Cell counting method; Micropowder; Parenchyma cell; Microscopy; Raidix Paeoniae Alba白芍为毛莨科植物芍药(Paeonia lactiflora Pall)的干燥根，主 产于湖南、四川等地，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗之功效， 其主要有效成分为芍药苷。白芍超微饮片系我院研制开发的一种微米 级新型饮片，主要通过机械粉碎使细胞壁破裂，促使有效成分快速释 放。细胞壁的破裂程度直接影响超微饮片中有效成分的溶出，关系到 临床药效的强弱，因此，细胞破壁率常被认为是评价中药粉末质量的 重要指标之一，但目前仅见关于花
5、粉与孢子类中药破壁率测定的研究 报道。不同中药细胞的破壁率测定是中药超细粉碎技术的关键所在， 本文拟针对白芍的显微特征，选择评价指标，对细胞破壁率的测定进 行探索。不同中药具有不同的显微特征，每一种显微特征具有固定的常数 根据这一原理，本课题借鉴显微定量法，采用目视法，以白芍细粉为 参照物，通过对白芍粉末的完整细胞计数，进行细胞破壁率的测定， 考察超细粉碎工艺对白芍药材细胞破壁率的影响。白芍的显微特征包括薄壁细胞、草酸钙簇晶、草酸钙方晶、导管、 淀粉粒、木纤维及管胞。其中薄壁细胞呈类方形、椭圆形或类长方形， 壁稍厚，或呈连珠状，显微镜下易于观察，适合于作为检测指标进行 破壁率的测定。1 材料、
6、仪器及样品制备1.1 材料白芍药材购自湖南省药材公司，经鉴定符合中国药典2005年 版一部有关规定。1.2 仪器FFI-15型柴日式粉碎机（湖南雪峰机械厂），BFM-T6BI型振动研 磨混炼机（济南贝利公司），微量吸管，*9 显微颗粒图像分析仪 （包括三目显微镜、CCD图像采集系统、计算机图像处理软件）。甘 油、水合氯醛均为分析纯。1.3 样品的制备细粉制备：取白芍药材干燥至水分约为6，粉碎成细粉（过 100 目），备用。微粉制备：称取白芍细粉加入料斗中，进行超细粉碎，收集微粉 （过 300 目），备用。2 方法与结果2.1 白芍细粉细胞计数及其标准曲线绘制6-7精密称取 0.089 6、0.
7、100 5、0.121 5、0.126 6、0.151 2 g 细粉， 分别置于25 ml容量瓶中，加稀甘油适量，超声处理5 min，使粉末 分散均匀，定容至刻度。精密吸取药液30 M装片（装片时，使混悬 液布满整个盖玻片，以不溢出，无气泡为度） ，分别置*9显微图象 分析仪（40x）观察。参照资料，从白芍粉末显微特征图（图1、2） 可以看出，除草酸钙、淀粉等后含物外，木纤维、导管等细胞均已截 断，未见完整细胞。故考察白芍微粉的细胞破壁率宜选择其薄壁细胞 破壁率的测定。因此，以白芍细粉中完整的薄壁细胞为显微特征计数 物指标，显微观察示其为完整的不规则圆形，此特征具有代表性，故 进行计数（以 1
8、 个视野为 1 个计数单位，每个浓度的药液取 8 个计数 单位的平均值），结果见表 1。表1不同称样量中完整薄壁细胞的个数（n = 8） 以细粉的称样量为横坐标，每个计数中完整的薄壁细胞平均数为纵坐标，绘制标准曲线，得回归曲线方程Y=97.392X-3.0556, r=0.991 4,说明白芍细粉中完整薄壁细胞在0.089 60.151 2 g范围内线性 关系良好，可用来作为显微特征计数。2.2 白芍细粉细胞计数方法学考察2.2.1 精密度试验精密称取 0.125 4 g 细粉，同“2.1”项下方法制 片，分别观察6个视野，相对标准偏差（RSD）为8.42%，表明本方 法精密度较好。2.2.2
9、 稳定性试验取“2.2.1”项下样品，室温放置，分别于 0、 3、6、9、12 h于显微镜下观察，相对标准偏差（RSD）为10.07%，表 明混悬液在 12 h 内较为稳定。2.2.3 重复性试验取同一白芍细粉 6 份，同法制片，于显微镜下 观察，相对标准偏差（RSD）为9.27%，表明本方法重复性较好。2.3 白芍微粉细胞破壁率的检测 分别取白芍细粉与微粉，精密称取，按2.1 项下制片，于显微镜下观察，分别观察 25 个视野（图 3、 4），根据两者完整薄壁细胞个 数、混悬液体积、称样量，按下列公式计算白芍细粉和微粉的显微特 征个数：白芍粉末显微特征个数 /mg=式中:X为每个盖玻片下的特征
10、数;V为药材混悬液总体积（ml）；V为盖玻片下混悬液体积（ml）； W为药材称取量（mg）。再根据白芍细粉和微粉的显微特征个数，按下列公式计算细胞破壁率：Y= (A-B) /AxlOO%Y：细胞破壁率；A：白芍细粉显微特征个数；B：白芍微粉的显 微特征个数。各项参数见表 2。3 结论超细粉碎可使白芍药材的细胞破壁率达 97.01，以薄壁细胞为 计数指标的细胞破壁率测定方法简便、可行。4 讨论本文首次对白芍微粉进行细胞破壁率的测定，以白芍粉末完整的 薄壁细胞作为特征计数物，采用细胞计数法考察超细粉碎对白芍药材 细胞破壁率的影响，该方法简单、可靠，对于测定中药粉末的细胞破 壁率具有借鉴作用，也为中
11、药超细粉末的质量研究提供了细胞破壁率 测定新的思路。通过对稀甘油、水合氯醛等分散溶媒的对比分析，发现采用稀甘 油试液处理后观察的白芍细粉显微图像较为清晰，因此，选择稀甘油 作为分散介质。影响破壁率检测精确度的主要因素是回归方程的精确性和未破 壁细胞计数的精确性。对于回归方程，由于称样量的误差可以忽略， 每个计数单位内细胞平均数的精确性是最主要的影响因素。通过直观 分析法得出，混悬液浓度为主要因素，观察倍数和展开面积次之，最 佳条件是混悬液浓度为6.168 mg/ml,目镜10x，物镜10xo超细粉碎工艺对于不同质地的中药材，粉碎效果不同；关于细胞破壁率与粒径的相关性正在研究中，其内在的规律有待考察。
