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1、分散液液液微萃取取高效液液相色谱谱法测定定食品中中农药的的含量张良温指指导教师师:翦英英红(吉林化化工学院院 环境境与生物物工程学学院 环环境科学学05001班，吉吉林 吉吉林13320222）摘摘要：本实验验采一种种较新的的提取分分析食品品中农药药（以阿阿特拉津津为例）残残留的方方法分散液液液微萃萃取高效液液相色谱谱法。分分散液液液微萃取取条件优优化后为为：水样样体积：6mL；萃取剂剂：氯苯苯，30.0L；分分散剂：丙酮，1.00mL；离心时时间：44minn，盐度度为4.5%，pH=5.5。最最佳条件件下，富富集因子子(EFF)和萃萃取回收收率(EER)分分别介于于1055.711-129
2、9.199和45.81% - 58.28%。阿特特拉津的的最低检检出限为为1g/LL。 水水样中阿阿特拉津津在加标标浓度为为40、60、80 g/L的相相对回收收率分别别为500.722%- 522.955%，455.811%- 522.166%和511.688%- 588.288%。此此种方法法测定食食品浸出出液中阿特拉拉津方便便，快速速。关键词：分散液液液微萃萃取；阿阿特拉津津；高效效液相色色谱法；萃取回回收率阿特拉津津(attrazzinee)又名名莠去津津，化学学名：为为2-氯4-乙氨氨基-66一异丙丙氨基1，3，5-三嗪嗪，系均均三氮苯苯类农药药，常温温下，阿阿特拉津津的纯品品是无色
3、色、无臭臭晶体，分分式：CC18HH14CClN55，熔点点17331755 ，在在25时，蒸蒸汽压为为385 Pa，水水中溶解解度为333 mmgL。在微微酸及微微碱介质质中稳定定，但在在高温下下，碱和和无机盐盐可将其其水解为为无除草草活性的的羟基衍衍生物23。阿特拉津津是种种在世界界范围内内广泛使使用的中中等偏低低毒性除除草剂，曾曾被认为为是生态态安全的的除草剂剂，但由由于使用用量大、残残留期长长，农田田施用后后随着地地表径流流、淋溶溶、沉降降等多种种途径进进入地表表水和地地下水，阿阿特拉津津的残留留物在世世界许多多国家和和地区的的地表水水和地下下水中已已有检出出。近来来不断有有阿特拉拉津
4、污染染事件的的报道，已已有的研研究证明明阿特拉拉津对动动物的生生殖功能能有极大大的影响响，被世世界野生生动物基基金会列列为环境境荷尔蒙蒙(内分泌泌干扰剂剂)的可疑疑物质，有有扰乱内内分泌的的作用，是是人类潜潜在的致致癌物。由由于阿特特拉津被被认为是是一种最最具污染染力的农农药，目目前，包包括德国国、法国国、瑞典典在内的的欧洲77个圈家家禁止使使用。分散液液液微萃取取(DLLLMEE)技术术由于其其萃取时时间短、操操作简便便，是水水样分析析的前处处理方法法之一，它它建立于于三相溶溶剂体系系。在分分散剂的的作用下下，萃取取剂以微微小液滴滴的形式式分散在在样品溶溶液中，形形成乳浊浊液，从从而对溶溶液
5、中的的分析物物进行微微萃取。采采用离心心，可将将萃取剂剂沉积于于溶液底底部，与与溶液分分离。本本文将分分散液液液微萃取取技术应应用于食食品水样样中痕量量阿特拉拉津的萃萃取、富富集，确确定了水水样中阿阿特拉津津的最佳佳DLLLME条条件，并并最终建建立了阿阿特拉津津的分散散液液微微萃取一一高效液液相色谱谱测定方方法。1 实验验部分11 试剂阿特拉津津，丙酮酮、乙腈腈、甲醇醇、氯苯苯、四氯氯乙烯、四四氯化碳碳，均为为色谱纯纯。氯化化钠(分分析纯)，氢氧氧化钠（分析纯），盐酸（优级纯）。12 仪器LC一220ATT高效液液相色谱谱仪：手手动进样样器、柱柱加热器器、PrrimooPrrimooR多用用
6、途台式式高速离离心机，110 mmL戴帽帽锥形玻玻璃离心心管，550 LL微型注注射器，22000 mLL注射器器，1mmL移液液管，22mL试试样瓶，00.222纤维维滤膜，吸吸耳球，1L大烧杯， 250mL量筒便携式pH计。1.3 水样中中阿特拉拉津的DDLLMME技术术60 mL水水样加入入锥形玻玻璃离心心管中。110 mL分分散剂和和30L萃取取剂混合合均匀后后，用22000 mLL注射器器快速注注入离心心管中。轻轻轻摇晃晃后，离离心管内内的溶液液马上乳乳化、混混浊，并并最终产产生乳浊浊状溶液液。这主主要是溶溶液内形形成了萃萃取剂小小液滴，阿阿特拉津津萃取到到小液滴滴中。在在40000
7、 rrpm转转速下离离心100minn，萃取取剂液滴滴沉积到到离心管管底部，形形成内含含阿特拉拉津的沉沉积相。移移取100L沉沉积相，注注入HPPLC系系统中进进行分析析。1.4 色谱条条件流动相：甲醇：水(880220，vvv)，流量量100mL/minn；色谱谱柱：DDiammonssil C188，柱温温30；检测波长长：2225nmm；进样样量：110 L。1.5 实验水水样制备备购买于早早市的黄黄瓜，西西红柿，小小白菜，分分别取以以上三种种蔬菜各各2500g分别别放置于于三个11L大烧烧杯中，加加水5000mLL浸泡，分分别在110miin，330miin，660miin，1120m
8、min，取取水样进进行萃取取分析。2 结果果与讨论论2.1 DLLLMEE萃取条条件的优优化2.11 萃萃取剂及及体积的的确定DLLMME技术术所需要要的萃取取剂一般般需要满满足以下下几点要要求：(1)有有机溶剂剂的密度度大于水水。(22)萃取取剂在水水中的溶溶解度要要尽可能能小。(3)萃萃取剂对对分析物物有一定定的萃取取行为。(4)萃萃取剂能能与分散散剂混溶溶。(55)溶剂剂峰与目目标峰在在适合的的色谱条条件下可可以完全全分离。依依据这些些原则，本本实验考考察了氯氯苯、四四氯乙烯烯、四氯氯化碳三三种萃取取剂对阿阿特拉津津的萃取取效率(图1)。结果果表明：无论是是富集倍倍数，还还是萃取取回收率
9、率，氯苯苯的萃取取效率比比其他萃萃取剂均均高。萃取剂体体积的大大小对萃萃取效率率的影响响很大。较较大的萃萃取剂液液滴有利利于增加加灵敏度度，为了了检验萃萃取剂体体积对阿阿特拉津津萃取的的影响，本环节以氯苯作为萃取剂，在离心管中加入6mL浓度为50g/mL的样品溶液，用2mL玻璃注射器分别向水溶液中注入1.0mL丙酮和不同体积（15、20、25、30、35、40L）氯苯的混合溶液，萃取一定时间后，放入离心机中离心十分钟，然后记录离心所得液滴体积并进行色谱分析，结果如图2表明：当萃取剂体积为30L的时候富集倍数和回收率达到最优。2.12 分分散剂及及体积的的确定分散剂应应是既溶溶于水，又又能溶于于
10、萃取剂剂的有机机溶剂。本本实验考考察了丙丙酮、乙乙腈、甲甲醇作为为分散剂剂的情况况，实验验结果如如图3所所示用丙丙酮，乙乙腈 甲甲醇作为为分散剂剂富集倍倍数和回回收率变变化变并并不明显显，因此此，选择择低毒和和低成本本的丙酮酮做为分分散剂。分别在丙丙酮体积积为0.25、00.5、00.755、1.0、11.255、1.5、11.755mL时时进行了了实验，得得到分散散剂体积积对萃取取效果的的影响图图(图44)。可可以看出出，当分分散剂体体积为11 mLL时，阿阿特拉津津萃取效效率最高高。所以以本实验验最终选选取的分分散剂体体系为110mmL的丙丙酮溶液液。2.1.3 其其他条件件的确定定主要对
11、溶溶液的ppH、离离子强度度，萃取取时间和和离心时时间进行行了优化化，结果果分别为为图5、66、7、88。结果果显示：当溶液液的pHH值为55.5时时，溶液液的NaaCI质质量分数数为4.5时时，离心心时间为为4miin时萃萃取效果果均较佳佳。而萃萃取时间间对阿特特拉津的的萃取效效果影响响不明显显。所以以，本实实验最终终选取ppH为55.5、44.5NaCC1和44 miin为最最佳的ppH值、离离子强度度和离心心时间。2.2 分析方方法考察察2.2.1 萃取取沉积相相标准曲曲线的绘绘制为了进行行定量分分析，通通过流动动相对标标准储备备液进行行不同梯梯度的稀稀释，配配制一些些列不同同浓度的的阿
12、特拉拉津标准准溶液用用以优化化萃取条条件进行行萃取，然然后用HHPICC分离检检测。用用色谱峰峰面积与与对应浓浓度作萃萃取标准准曲线，求求出它们们的线性性关系和和相关系系数，经经线性回回归分析析，阿特特拉津在在20.00-1400.000g/L浓度度范围内内获得良良好的线线性关系系如图（110）。可可知线性性方程为为y=667.3334xx+5220.001、决决定系数数R2 ：0099925图9阿特特拉津标标准系列列萃取沉沉积相与与峰面积积的关系系曲线2.2.2 加标标回收率率为考察本本实验方方法的准准确度，对对3个水水样加入入不同浓浓度的标标准溶液液进行连连续测定定，所得得萃取回回收率见见
13、表1中中所示。表 1 阿特拉拉津加标标回收率率测量结结果水样名称称原始浓度度（g/LL）加标浓度度（g/LL）富集倍数数回收率（%）水样1ND*406080122.04122.18121.7150.88552.99550.772水样2ND406080113.37105.71115.9251.00245.88152.116水样3ND406080129.19124.88126.4551.66858.22854.779*ND：低于检检出限，未未检出。2.2.4 检检出限的的确定采用稀释释倍数法法将纯样样品的标标准溶液液稀释为为不同梯梯度，经经HPLLC系统统检测，获获得不同同高度的的色谱峰峰，由检检
14、出限的的定义分分析物的的色谱信信号三倍倍于噪声声时溶液液中分析析物的含含量（SS/N=3）可可知，阿阿特拉津津的检出出限为11g/L2.3 实际水水样测定定 将将购买自自早市的的西红柿柿，黄瓜瓜，小白白菜各称称取2550g，分分别放置置于三个个1L大烧烧杯中，各各加蒸馏馏水5000mLL。浸泡泡10mmin，330miin，660miin，1120mmin时时取水样样，在最最优条件件下利用用分散液液液微萃萃取液相色色谱法测测量水样样中阿特特拉津含含量。结结果如表表2 所所示。3结论本文采用用分散液液液微萃萃取液液相色谱谱法测定定食品中中阿特拉拉津的含含量，在在优化表2蔬菜菜浸泡水水样中阿阿特拉
15、津津浓度浸泡时间间（miin）103060120西红柿峰面积水样浓度度（g/LL）41744.254.22726066.330.99834688.85543.77926099.35531.003白菜峰面积水样浓度度（g/LL）23277.926.88519300.520.995ND-16566.816.888黄瓜峰面积水样浓度度（g/LL）ND-ND-ND-ND-*ND：低于检检出限，未未检出。实验条件件下，得得出本方方法的线线性范围围、相关关系数、检检出限和和回收率率。实验验可知，线线性关系系良好，阿阿特拉津津在2-10mmg/LL浓度范范围内得得出标准准曲线yy = 5855.855 + 7440.332，相相关系数数R2=0.9999，基于于信号与与噪声比比（S/N）为为3，通通过稀释释倍数法法获得阿阿特拉津津的检出出限为11g/L，以以20-140
