《降解纤维素菌株的筛选》由会员分享，可在线阅读，更多相关《降解纤维素菌株的筛选（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、纤维素降解菌的分离和筛选1. 实验目的：1.掌握纤维素降解菌的的分离和筛选的方法2. 学会会培养基的制备3. 再次了解菌落的形态2. 实验原理： 从美术楼后面树林中取适量的土壤，用无菌水将得到的样品经适 当稀释，在37C下培养Id后，稀释10-6、10-7、10-8三个浓度，分 别接种于鉴别培养基中培养，每组3个平行，在37C下培养2-3 d, 然后进行初筛，重复以上步骤，直至获得纯的菌株。最后镜检。3.试验方法：1. 取样先从树林中取10g 土壤（1015cm深）。用灭菌的塑料袋盛装。 2饥饿培养秤取10g 土壤，置于250ml的装有90ml无菌水的锥形瓶中，摇 匀，在37C下培养1d。3.
2、 梯度稀释所需仪器：试管（8 支）、洗耳球、移液管。需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装9ml蒸馏水）、 移液管。用移液管从饥饿培养土壤液中吸取 1ml 土壤悬液加入盛有 9ml 无菌水的试管中充分混匀。然后用移液管从此试管中吸取 1ml 加入 另一盛有 9ml 无菌水的试管中， 混合均匀， 以此类推制成 10-1，10-2，10-3， 10-4，10-5，10-610-7，10-8不同稀释度的土壤溶液。4. 选择培养刚果红培养基的制备所需要的仪器有： 500ml 锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、 摇床、称量纸等。(NH4) SO242gMgSO40.25gKH PO421g明矶2g纤
3、维素钠1.88g刚果红2g琼脂18g蒸馏水1000ml按上表比例配制 150ml 选择培养基。在 500ml 锥形瓶中装入 200ml 培养基，用 2 层纱布加棉花做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞 外包裹两层报纸，用线绳扎紧，在121C下高压蒸汽灭菌20min。灭 菌后，倒9个灭菌平板，凝固后待用。0涂布平板将上述已倒培养基的9个平板底面分别用记号笔写上10-6、10-7、 10-8 3 种稀释度（每个稀释度划 3 个平板）。然后用移液管分别由 10-6、10-7,10-8 三管土壤稀释液中各吸取 0.2ml 对号放入已写好稀释 度的平板中，用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下 静置5
4、10min,使菌液吸附进培养基。38C倒置培养2-3d,至菌落 长出，菌落周围将会出现透明圈。菌落形态观察菌圈直径(0.30.6cm)划线分离PDA培养基的制备方法 马铃薯200纤维素(cmc)若干克 琼脂15-20g蒸馏水1000ml马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后纱布过滤，再加琼脂， 融化后不足水至1000ml。121C灭菌30min.按以上比例配置85ml培养基，分别倒入3个灭菌的平板当中， 待凝固后,从以上涂布的 9 个平板当中取出 1 个菌落周围的透明圈 比较大的平板。用接种环挑取菌落在平板培养基上进行梯度划线。 做3个平行，置于38C下培养。重复以上步骤,进行连续3 次纯化培养。
5、直至获得纯的菌株。斜面培养选取透明圈大且降解能力强的菌株以待斜面划线时使用。 如上面制备 PDA 培养基，将其倒入1 支灭菌试管里，每管约倒入 1/3 的培养基，倾斜置放，30min之后，带其凝固，用接菌环挑去少量菌 落划线培养，做3个平行。置于38C下，培养2-3d。直至长出菌落。5. 镜检 所需仪器或试剂：菌种的平板培养物、番红、显微镜、酒精灯、载 玻片、接种针、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、擦镜纸、蒸馏水等。 操作步骤：制作（挑取、印染）-染色（番红）-静置 10min-冲洗（蒸馏 水）-加片（盖玻片）-镜检结果：从形态和印片染色看，该菌属于放线菌。4. 实验结果：外观：白色干粉状镜检：可以看到孢子和菌丝结论：所分离菌种为放线菌这个实验的一个缺点就是在筛选纤维素降解菌的时候，应该多筛选几 种菌株，以防失败后从头再做，还可以增大筛选出高产菌的概率。
