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1、 Agilent 1200 LC现场培训教材安捷伦科技有限公司 化学分析仪器部1 培训目的 :基本了解1100LC硬件操作 掌握化学工作站的开机关机参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作二 培训准备1 仪器设备 Agilent 1100LC G1310A :(单元泵) G1312A(二元泵) G1311A(四元泵) G1313A 自动进样器 G1316A 柱温箱 G1314A VWD检测器 G1362A 示差检测器 G1315A/B (DAD检测器) G1321A (FLD检测器) 色谱柱:Zorbax eclipse XDB C8,150mm 4.6mm i.d 2 溶剂准备 色谱级纯或
2、优级纯乙腈ACN 或甲醇二次蒸馏水基本操作步骤: (一) 开机 1、 打开计算机,进入Windows NT 或Windows 2000 画面,并运行Bootp Server程序 2、 打开 1200 LC 各模块电源 3、 待各模块自检完成后双击Instrument 1 Online 图标化学工作站自动与1200LC通讯进入的工作站画面如下所示: 4、从“视图” 菜单中选择“方法和运行控制” 画面, 单击“视图”菜单中的Show Top Toolbar Show status toolbar System diagram ,”Sampling diagram” 使其命令前有标志来调用所需的界面
3、 5、把流动相放入溶剂瓶中 6、打开Purge 阀 7、单击“泵” 图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。 8、设“流量” 3ml/min 单击“确定”。 9、 单击“泵” 图标出现参数设定菜单单击Pump control选项选中On 单击OK 则系统开始Purge 直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止, 切换通道继续Purge 直到所有要用通道无气泡为止。 10、单击Pump图标出现参数设定菜单单击Pump Control选项选中Off 单击Ok关泵 关闭Purge valve 11、单击Pump 图标出现参数设定菜单单击Setup pump选项进入Pump编辑画面设Flow
4、 1.0ml/min 12、 单击泵下面的瓶图标如图所示以四元泵为例输入溶剂的实际体积和瓶体积也可输入停泵的体积单击Ok二、数据采集方法编辑 1、开始编辑完整方法: 从”方法” 菜单中选择“编辑完整方法” 项.如上图所示选中除Data analysis 外的三项单击Ok 进入下一画面 2、方法信息: 在Method Comments 中加入方法的信息如方法的用途等单击“确定” 进入下一画面:3、 泵参数设定以四元泵为例: 在“流速” 处输入流量,如1ml/min 在“容剂” 处输入70.0,(A=100-B) ,也可“插入 ”一行“时间表” 编辑梯度,在“压力限” 处输入柱子的最大耐高压以保护
5、柱子 ,单击“确定”进入下一画面 4、自动进样器参数设定:选择合适的进样方式, 如图所示进样体积 1.0ul ,洗瓶位置为6号,“标准进针 ”- 只能输入进样体积此方式无洗针功能“”洗针进样” - 可以输入进样体积和洗瓶位置此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针.“使用进样器程序”-可以点击“编辑”键进行进样程序编辑. 点击“确定”进入下一画面:5、柱温箱参数编辑: 在“温度”下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击“更多信息” 键,如图所示:选中“与左侧相同”-使柱温箱的温度左右一致 ,点击“确定”进入下一画面6、 VWD检测器参数设定:在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254n
6、m, 在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如0.1min (2s) 在“时间表” 中可以“插入” 一行输入随时间切换的波长如1min 波长=300nm 点击“确定”进入下一画面.7、 DAD检测器参数设定: 色谱条件: 流动相: 75%ACN,25%水 进样量: 5ul; 检测波长:254nm,BW=30nm参比波长=350nm,BW=100nm; 柱温: 30 ; 流量: 1ml/min; 停止时间: 出峰完毕 样品波长-一般选择最大吸收处的波长样品带宽BW 一般选择最大吸收值一半处的整个宽度BW Noise 参比波长 一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域
7、 参比带宽BW 至少要与样品信号的带宽相等许多情况下用100nm作为缺省值Peak ,width Response time 其值尽可能接近要测的窄峰峰宽Slit 狭缝窄光谱分辨率高宽时噪音低同时可以输入采集光谱方式步长范围阈值选中所用的灯 点击Ok进入下一画面8、 RID检测器参数设定:色谱条件: 进样体积: 20ul 光学单元温度: Off 极性: 正 峰宽(响应时间) : 4s 如图所示: “光学部件温度”-若环境温度控制在2度 ,设定为Off, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀“峰宽” -大多数分析设为4S 只有在高速分析下设为更短“分析后自动
8、循环”- 在不进行分析时可以让流动相循环节省流动相检测器连续运行可随时投入使用 * 点击RID图标选择RID Control Heater 设为On 若要循环流动相必须将Recycling Valve 设为ON 手动purge 参比池将其设为On 并输入Purge 时间 点击Ok,进入下一FLD画面9、 FLD检测器参数设定: 色谱条件 样品P/N 01018-68704 用甲醇稀释为1:10 进样体积5ul 柱温箱: 30 EX=246nm, EM=317nm ,PMT=10 响应时间=4s. 停止时间 出峰完毕 Excitation A: 激发波长:200-700nm,步长为1nm,或Ze
9、ro Order Emission : 发射波长: 280-900nm, 步长为1nm,或Zero Order PMT : 大多数应用适当的设定值为10,若高浓度样品峰被切平头,则减少 PMT 值 Peak width 大多数应用设为4s 只有快速分析采用小的设定值 Multi Ex 多波长及光谱激发 Multi Em 多波长及光谱发射 同时可以输入范围Range 步长step 采集光谱10、 在 “运行时选项表” 中选中“数据采集” 单击“确定”. 11、 单击“方法” 菜单选中“方法另存为”输入一方法名如test 单击“确定”. 12、 从菜单 “视图”中选中“在线信号” ,选中“窗口 1
10、”,然后单击“改变”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”.(如同时检测二个信号,则重复12,选中“窗口 2”) 13、从“运行控制” 菜单中选择“样品信息”选项如图所示:输入“操作者名称”“数据文件” 中选择“手动” 或“前缀/计数器” 区别: “手动”-每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉.“前缀/计数器” 在“前缀”框中输入前缀,在“计数器” 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名如vwd0001 vwd0002如下图: 14、 从Instrument 菜单选择System on 15、 等仪器Ready 基线平稳从Method菜单中选择Run method 进样三、数据分析方法编辑: 1、 从“视图” 菜单中单击“数据分析” 进入数据分析画面如下图所示:
