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1、金 华 职 业 技 术 学 院JIN HUA COLLEGE OF PROFESSION AND TECHNOLOGY毕业教学环节成果(2012届)题 目川桐皮中总黄酮的提取工艺研究学 院 制药与材料工程学院 专 业 生物制药技术 班 级 制药 093 学 号 200931100380346 姓 名 罗超超 指导教师 郑柏勤 2012年5月22日金华职业技术学院毕业教学环节成果目录摘要11 材料与设备21.1 材料 2 1.1.1实验药材2 1.1.2 化学试剂21.2 仪器与设备 2 2 方法与结果3 2.1总黄酮含量的测定1032.1.1标准曲线的制备32.1.2 样品液制备与样品总黄酮含
2、量的测定32.2 提取工艺研究4 2.2.1 提取溶剂对提取率的影响4 2.2.2 粉碎度对提取率的影响42.2.3 乙醇浓度对提取率的影响5 2.2.4 浸提时间对提取率的影响6 2.2.5 浸提温度对提取率的影响 6 2.2.6 液料比对川桐皮黄酮类化合物提取的影响72.2.7 正交试验83结果与讨论9 参考文献 10 谢辞11 川桐皮中总黄酮的提取工艺研究制药与材料工程学院生物制药技术专业 罗超超摘要：为充分利用川桐皮资源，对川桐皮中总黄酮的提取工艺进行研究 ，对乙醇浓度、温度、时间、料液比分别进行了单因素试验和正交试验。结果表明，乙醇提取法的最佳工艺条件为：提取温度 70 ，乙醇浓度
3、70，提取时间 120min，料液比1:25(g/mL)，该工艺条件下提取总黄酮含量为54.12 mg/g。关键词：川桐皮 正交试验 总黄酮 提取Study on Extraction Technology of Total Flavonoids from CortexKalopanacisLUO Chao-chao( Major of Biopharmaceutical Technology, School of Pharmaceutical Science and Materials Engineering)Abstract：To make full use of CortexKalopa
4、nacis resources, the extraction technology of total flavonoids from CortexKalopanacis was studied by single factor tests and orthogonal experiment design method. The optimized extraction technology was that the CortexKalopanacis were extracted by 70% ethanol at 70 with a material- liquid ratio of 1:
5、25(g/mL) for 120 min. With this technological conditions, the concentration 54.12 mg/g of the total flavonoids extraction was obtained.Key words：CortexKalopanacis Orthogonal experiment Total flavonoids Extraction川桐皮为五加科植物刺楸 Kalopanaxsepteml- obus (Thunb.) Koidz.或毛刺楸 K. septem lobus var. margni cus(Z
6、abel) Hand-Mazz. 的干燥树皮。刺楸为落叶乔木，枝有粗刺。生于山地疏林中。产于安徽、湖北、湖南、广西。全年可采，以春季为好，晒干1。依照现行的四川省中药材标准（1987 年版）收载了川桐皮的性状、鉴别、炮制、性味、功能与主治、用法用量和贮藏的内容。性状为质脆，断面纤维性，略呈层片状。性味为气微，味微辛，略有麻舌感。功能与主治为具有祛风湿，通络，止痛作用。用于类风湿性关节炎、腰膝疼痛、外用跌打损伤2。树皮含黄酮、香豆素、树酯、精油及少量生物碱;根皮含刺楸毒甙（kalotoxin）、刺楸皂甙3。生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物。黄酮类化合物是指具有C6-C3-C6基本结构
7、的天然产物，大部分是色原酮的衍生物，根据两端苯环与中间三碳的连接方式、位置、直连或环及其氧化水平，衍生而成的一大类化合物。黄酮类化合物具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、保肝、止咳祛痰、抗氧化和雌激素样的作用4-8。黄酮类化合物广泛存在于植物中，主要有黄酮和黄酮醇、二氢黄酮和二氢黄酮醇、异黄酮和二氢异黄酮、查耳酮和二氢查耳酮类、橙酮类、花色素和黄烷醇类、其他黄酮类七大类9。由于人工合成的总黄酮存在着副作用大及价格昂贵等多方面缺陷，人们逐渐把注意力转向从植物中提取总黄酮，从天然物质中提取的总黄酮具有较好的药理作用，且毒副作用小。总黄酮的主要提取方法是有机溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波提取法、超临
8、界 CO2萃取法、酶浸渍萃取法、超高压辅助提取法等等。比较各提取方法的优缺点和考虑到当前的实验室条件，本研究采用有机溶剂提取法。目前对于川桐皮的有关研究国内报导的比较少。鉴于此，笔者探讨川桐皮中的总黄酮提取工艺参数，旨在寻找一种提高川桐皮中总黄酮提取量的方法，也为全面开发利用川桐皮资源提供科学依据。1 材料与设备1.1 材料1.1.1实验药材 川桐皮采自四川省成都市山区，经成都中医药大学中药鉴定和药用植物教研室李敏教授鉴定，为五加科植物刺楸KaIopanax septemIobus(Thunb)Koidz或毛刺楸尼septem-lobus vatmargni，icus(Zabel)Hand-M
9、azz的干燥树皮。1.1.2 化学试剂乙醇 甲醇 石油醚（3060）乙醚：广东汕头市西陇化工厂；乙酸乙酯：天津市北方化玻采购销售中心；丙酮：成都市联合化工试剂研究所；浓盐酸：德阳市孝泉师范化学试剂厂；氢氧化钠：重庆北碚精细化工厂；三氯化铝 亚硝酸钠：天津市科密化学试剂开发中心；硝酸铝：天津市福晨化学试剂厂；以上试剂均为分析纯。标准芦丁（98.5 ）：成都超人植化有限责任公司。1.2 仪器与设备DFT一200型手提式高速中药粉碎机：温岭市大德中药机械有限公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生华仪器有限公司；SHB-B95型循环水式多用真空泵：郑州市长城科工贸有限公司；HH-S4数显恒温水浴锅
10、：金坛医疗器械厂；UV-8紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；BPl21S电子天平：德国赛多利斯股份公司。2 方法与结果2.1总黄酮含量的测定102.1.1标准曲线的制备准确称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥（60 ，0.09 MPa）至恒重的芦丁标准品0.077g，用60 %乙醇溶解，定容至250 mL，摇匀，得浓度为0.292 6 mg/mL的标准液，放置于低温暗箱内，及时检测分别吸取标准应用液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于25 mL容量瓶中，用60 %乙醇添至10 mL，加入5 %亚硝酸钠溶液1.0 mL，摇匀，放置6 min，再加入10 %硝酸铝溶液1.
11、0 mL，6 min后加入4 % NaOH10 mL，混匀，再用60 %的乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min后，在波长510 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，见图1。图1 芦丁与吸光度的线性关系2.1.2 样品液制备与样品总黄酮含量的测定准确称取1.0 g川桐皮粉，放入索氏抽提器中，用40mL95%的乙醇，回流浸提至回流液呈无色,用乙醇洗涤接收瓶2次3次。合并提取液与洗涤液，定容为适当浓度的样品液30 mL。准确吸取1.0 mL 样品液置于25 mL 容量瓶中，用60 %乙醇添至10 mL，其它操作同2.1.1，测得吸光度A。样品的总黄酮浓度C=2.079A+0.033样品的总黄酮含量=C
12、V25/M式中：M为样品质量，g；V为定容容积，mL ；C为样品液的总黄酮浓度，（mg/mL）。2.2 提取工艺研究2.2.1 提取溶剂对提取率的影响精确称取多份2.5g 粉碎度为100 目的川桐皮粉，分别加入水、甲醇、乙醇（95%）、丙酮、乙酸乙酯、石油醚（3060 ）各100 mL，在溶剂沸点温度下，回流浸提3h，抽滤、洗涤、定容，测定总黄酮含量。结果见表1、图2。表1 提取剂种类对提取率的影响溶液种类水甲醇乙醇丙酮乙酸乙酯石油醚总黄酮含量（mg/g)12.4157.8650.1620.399.981.25图2 提取剂种类对提取率的影响由图2可见，实验的几种溶剂对川桐皮总黄酮提取能力的大小
13、顺序是：甲醇乙醇丙酮水乙酸乙酯石油醚。2.2.2 粉碎度对提取率的影响 将川桐皮粉碎，筛得20、40、60、80、100、120、140目川桐皮粉备用。精确称取2.5g不同粉碎度的川桐皮粉，用100 mL95%的乙醇，在溶剂沸点温度条件下，回流浸提3h，抽滤、洗涤、定容，分别测定总黄酮的含量，结果见表2、图3。表2 粉碎度对提取率的影响粉碎粒度/目20406080100120140总黄酮含量（mg/g)5.0513.8632.4237.2636.0238.3235.86图3 粉碎度对提取率的影响由图3可以看出，粉碎度不同，川桐皮中总黄酮提取量有很大的差异。粉碎度在20目80目之间时，随粉碎度的
14、增加，总黄酮的浸提量增加；当粉碎度超过80目后，进一步提高粉碎度，总黄酮的提取量增加不明显。2.2.3 乙醇浓度对提取率的影响精确称取多份2.5g 的80目川桐皮粉，以不同浓度乙醇为提取剂，在沸点温度条件下，回流浸提3h，抽滤、洗涤、定容，分别测定总黄酮的含量，结果见表3、图4。表3 乙醇浓度对提取率的影响乙醇浓度/%（体积浓度）405060708095总黄酮含量/(mg/g)28.12 34.4242.2246.2345.4243.18图4 乙醇浓度对提取率的影响从图4可以看出，不同乙醇浓度（体积分数）条件下，川桐皮黄酮类化合物的浸提率差异较大。当乙醇浓度为40%70%（体积分数）时，黄酮类化合物的浸出率随乙醇浓度的增加而提高；乙醇浓度70%（体积分数）时，提取率最高；超过70%（体积分数）时，随乙醇浓度增加黄酮类化合物浸提率略有降低。2.2.4 浸提时间对提取率的影响精确称取多份2.5g的80目川桐皮粉，以70%的乙醇溶液为提取剂，在沸点温度下，分别回流浸提不同时间，抽滤、洗涤、定容，测定黄酮类化合物的含量，结果见表4、图5。表4 浸提时间对提取率的影响浸提时间/min6090120150180210总黄酮含量/(mg/g)28.1236.2150.1451.2250.5449.82
