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1、1 目的通过对微生物检测流程的规范确保检验工作有序进行。2 范围适用于微生物检测的全过程。3职责3。1 检验人员严格按检测流程做好各项工作。3.检测主管做好监督检查工作。4内容1 准备工作4.11 卫生清洁 整理普通检验室内的各类检验物品，检查工作台面和地面卫生。4。1。2样品收集登记4.2.1与收样员沟通，确定检样品种、数量（如仓库到货的茶原料、内包膜，车间生产的半成品、成品，研发样品，采购样品，稳定性试验的样品、定期跟踪检测的样品).41。2.2与质保员沟通，确定检样品种、数量(如自来水、纯水、一楼生产过程跟踪的各阶段液体）。4.2. 按检测计划自行确定的检样品种、数量(如工作间空气、设备
2、内表面、员工手部)。41。2。4各项确定后，收集并登记样品.1检测方法的确定4。13。1样品收集后进行分类，确定样品的检测方法,若无方法的要尽快上报或查找相关方法。4.1.3.2微生物各项目所采用的检测方法(见附表1）4。2 试剂配制、物品包扎4。2.玻璃容器的包扎：灭菌前器皿应包扎紧密完整后才进行灭菌，以防止灭菌后器皿受到污染.4。2平皿、吸管按量分成若干单元用牛皮纸、报纸包扎；4.2。试管及三角瓶应塞硅胶塞，在瓶口再用报纸包扎；4。24其它玻璃或金属取样工具也要用报纸包扎；4.2.5生理盐水按氯化钠加水比例0。84配制；平板计数琼脂(PCA）、孟加拉红、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（ST）、煌
3、绿乳糖胆盐肉汤（BGL）则以标签上规定的比例进行配制。按需要量分装成于不同规格的容器中。.3 高压灭菌。1培养基及器皿的灭菌:4。3。1。1高压蒸汽灭菌:金属器具、玻璃器皿、基础培养基及其它耐热物品均放入锅内灭菌.4。31灭菌参数:121（0。0Pa)，520min；4。2染菌培养物：121（01034a），3mn;。3.3含糖类不耐热培养基（按试剂要求）：5（.077MPa），1520min。43。4每次灭菌时均须将灭菌指示带置于灭菌锅内，观察灭菌效果。4.。5灭菌锅的使用：参照“仪器使用维护保养作业指导书”的相关内容执行。4。4 烘干高压蒸汽灭菌后的物品除培养基及稀释液外的其他物品，如玻璃
4、平皿吸管、金属器具或棉花等均应先置于10烘箱内,根据包装大小应保持1h以上，至干燥后使用。4。5贮存4。51灭菌后处理：灭菌后物品，注意放置场所,严禁与未灭菌物品混放，以免再度污染。4.52灭菌合格的培养基及稀释液先贮存于消毒柜,臭氧消毒并低温烘干瓶口包扎纸,存放一般不超过24,当天未使用完的置于4冰箱存放，3天内使用完。培养基及稀释液的配制数量应以适量为宜。4.5烘干后合格的灭菌物品应存放于贮藏室或消毒柜内，灭菌后保存最长不得超过天.4包装损坏或塞子脱落者,不可作为无菌品使用.4。6 无菌室的消毒4.6.超净台的使用4。61。1使用前应先用75酒精棉擦拭台面，再打开超净配备的紫外灯,照射时间
5、不少于30min；4。.1使用时，应关闭紫外灯，打开日光灯，同时打开无菌风直至实验结束;4。.1.3超净台灭菌效果应以落菌实验加以验证;4.。2无菌间使用前后应将门关紧，打开悬吊式紫外灯消毒，应选用3W,距离在10m处，照射时间不少于30i；4.63缓冲间的使用：微检员工作时穿的衣帽、鞋等物品需放置在缓冲间。并于实验前后打开紫外灯，照射时间不少于0in。.7检测过程4。操作过程要求无菌;4.。进入缓冲间后用5%的酒精棉球消毒双手，换上已消毒的专用工作服、帽、口罩及鞋；47接种样品时，应再用75的酒精棉球消毒双手；4.7。检品须称量的要保证重量准确，且要尽快加入至稀释液中;4.7.5检样液瓶口应
6、尽快塞紧硅胶塞，将其样液充分摇匀；4.7从包装中取出吸管时,尖端不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖端不得触及试管或平皿;4.7。7接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作,吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰灭菌。接种环和接种针在接种细菌前后应经火焰灼烧全部金属丝,必要时要烧到环和针的连接处。火焰灭菌的有效范围以火焰为中心半径c内。7.8倾倒培养基至平皿中摇匀放置；47.检品检测完毕时,要求做空白对照；4。7.9不同检品要根据各自特性综合考虑，如选择的检测项目、稀释度等（附表的相关内容）；4。7.打开包装未使用完的器皿，放置后再使用应重新灭菌;. 记录 按检品的种类、检测项
7、目、稀释度进行登记，注明编号.4.9培养91冷却后的平板及已接种的稀释培养液（如菌落总数、大肠菌群）置入7恒温培养箱培养48；4。9。2冷却后的平板(如霉菌）则置入28恒温培养箱培养5天;4。9。2培养温度时间按不同检测项目进行确定，置入前均须检查培养箱温度是否符合要求。41 结果报告410。按品种、检测项目查记录后,确认达到规定培养时间的培养物，取出进行计数;4.10.2计数方法按附录1中不同检测项目规定的内容执行;4。1 清洗41。1器皿的清洗:凡被污染的器皿，应先经过121，0in高压蒸汽灭菌后再进行清洗。4。12日常使用后的容器、平皿等经水冲洗或超声波清洗干净。4。113清洗后要求烘干
8、或晾干备用。4.12 卫生清洁消毒 按化验室卫生管理制度、微生物检定室管理制度的相关内容执行.5卫生检测5。1微生物涂抹实验11实验试剂：。4灭菌生理盐水;5.1。实验仪器:试管、灭菌镊子、灭菌棉球：体积为33m3、酒精灯。1.3 准备工作：配制。%生理盐水分装在一定数量试管中，每管10m,灭菌后待用;514 样品采集：5.。1 设备及容器具取样: 在酒精灯火焰上方,以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水,反复擦拭需采集样品物体表面约30c2，然后将该棉球迅速装入盛有1ml的灭菌生理盐水试管中,摇匀待用；5。1。2内包装材料取样： 在酒精灯火焰上方，以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，以无
9、菌操作方式于无菌操作台内反复擦拭内包装材料表面,再将擦拭后的棉球装入盛有10m的灭菌生理盐水试管中，摇匀待用；。1.43操作人员手菌取样:在酒精灯火焰上方，以无菌镊子镊取无菌棉球沾润灭菌生理盐水，用此棉球反复擦拭待测人员左手(或右手）,然后棉球迅速装入盛有1ml的灭菌生理盐水试管中，摇匀待用；5。1.5 样品检测：将带有检测棉球的生理盐水在微生物无菌室按4中相关内容操作。1 计算方法:5。1。6.1设备、容器具与内包装材料（涂抹法）：菌落总数（cfucm2）=平皿上菌落的平均数样液稀释倍数10/31。62:人员手部（涂抹法):菌落总数（fu/只手）=平皿上菌落的平均数样液稀释倍数10/25。2
10、落菌实验5.。1实验试剂：营养琼脂;5。2.2实验仪器：平皿、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱52.3 实验步骤：。2.3.1 在微生物检验室内将灭菌好的凉至45左右的营养琼脂倒入灭菌平皿内，每皿约1520ml，待琼脂凝固后，将平皿翻转，待用；52。2生产车间环境落菌检测的操作方法: 生产车间灭菌后或生产进行中进行测试。将个装有营养琼脂的培养皿（直径为9c)，放置于所测车间的四个角落以及中间处,测试时间为30min,然后将平皿盖好取回,放入培养箱内培养,同时做空白实验；2.3将其在37的环境下培养48h，平皿上所长菌落数即该环境的菌落数。6 其它61查找检验用文件，分析检验工作中存在的问题；6.2清点本身检验有关的物品，提出领用或申购，满足检验。附表文中如有不足，请您指教！ /
