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1、一、流式细胞术常用试剂1、1%aN3:将1NN3溶解于0m蒸馏水中，室温保存;活体实验或在辣根过氧化酶反映中可不使用NN3。、3%SA/PBS:ml PBS中加入3gBSA,使之溶解,再加入2ml 1%的N。3、0mmo/ ED：将18g DTANa2H2O溶解于ml蒸馏水中,用NaO将PH调至8.0,补充蒸馏水至500ml,分装，高压灭菌,室温保存。4、4%多聚甲醛：在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS,加入数滴NOH,在通风柜中于0度加热,使其溶解,调节PH至.,使用前新鲜配制。、消化液：%胰蛋白酶(用培养液或PS配制）或0.25胰蛋白酶与0 TA的混合液。6、红细胞裂解液：
2、4C .16g,KHC30.5g，DA2a 0.，溶于100水中,调PH至，补充蒸馏水至50m,度储存,使用时需恢复至室温。、流式细胞抗体稀释剂：.mmoBS液（P 7.4)+BA+0.1%Na2。8、常用细胞破膜剂：P液(H 7.4)+1FB(或A）0%Na0.%aponn（gma的效果不错)。、流式细胞染色洗涤液：含2%的BSA、01%N的PBS(P7）。0、PI染液(保存液,用于细胞周期和凋亡检测):1g PI溶于1mlPBS,加入mg无DN酶的RNA酶，度保存备用。应用时,10倍稀释,每管加0.3m0.5ml P染液。11、anks液的配制(BSS,重要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液,
3、不能单独作为细胞、组织培养液）原液Aal 10Mg47H2 2KCl 8gl6H2O2gCaCl28g溶于1000ml双蒸水原液B）N412H2O 04KH2PO41.2g葡萄糖 00g溶于0ml双蒸水2)0.4%酚红溶液:取酚红.置玻璃研钵中,逐滴加入01N NaH并研磨，直至完全溶解，约加入1N NaOH 10ml。将溶解的酚红吸入100量瓶中，用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液,并入量瓶中,最后补加双蒸水至10l。将1)液和2）液混合,补加双蒸水至1000ml即为原液B。应用液: 原液A 1份原液B 1份双蒸水 份混合后，分装于20ml小瓶中,高压灭菌。临用前用无菌的.%NaHO调P至7.2
4、。 2、磷酸盐缓冲液的配制（）A液(.2o/LNa2水溶液):HO4H2O 27.6，溶于蒸馏水中,稀释至000l。B液（0.mol/L Na2HPO4水溶液): a2PO7H25.6g 加蒸馏水溶解，加水至1000m。不同P值B的配制:液xm（参照下表)中,加入液yl,为0.2moL的PB。若再加蒸馏水至20m,则成.mol/L P。PH/m /l5. 3.5.5.8 92.08.05.99.0 10.6.0 .7 12.3.1 1506. .5.56. 77.5 . 7.5265. 6. 31.56 257.56. 56.5 4356.8 10 49.069 45.55.0709061.0
5、.1 3. 67.07. 28.072.0 230 7.07 90 81.7.5 1.0 4.7.6 30 87.7.1.090.07.8 8.50 9079 7.0.08.0 5304 13、PBS的配制配制,只要在相应的B基液中加入.5g/ NaC即可。二、常用激活剂1、激活剂PMA:用M配制成01mgl,分装0u/管,-度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠BS 1：100稀释储存液,终浓度为20ng/ml。2、激活剂离子霉素:用乙醇配制成浓度为0.5g/m的储存液,-20度保存。实验时用无菌、无叠氮钠S 1:0稀释储存液,终浓度为1g/ml。3、taphoccl enteroo B
6、(EB) :用无菌无叠氮钠P调节浓度.g/mL,4储存，SEB终浓度10ug/m。4、3：包被在培养板中，在蛋白转运克制剂存在下活化未稀释的血液细胞。5、C28：加速不同刺激剂(涉及EB、CD3等)的活化效应,浓度一般为10u。6、阻断剂regedinA：用DSO配制成浓度为5mgl的储存液,分装20u管,2度保存。勿反复融冻。实验时用无菌、无叠氮钠BS 1:10稀释储存液,在激活过程最后5小时使用BF，终浓度为/ml。、阻断剂莫能菌素：用MO配制成浓度为1mm的储存液,储存至少4个月,实验时用无菌、无叠氮钠B 1：1稀释储存液，终浓度为2umolL。三、常用抗体标记荧光染料的特性及其应用、F
7、ITC：激发波长488n，最大发射波长525m。)其标记的抗体合用于所有配备48n氩离子激光器的流式细胞仪;2）在流式细胞仪的FL1通道检测;3)可用于荧光显微镜技术4)荧光强度易受PH值影响,PH值减少时其荧光强度削弱。2、xa lr88:激发波长488nm，最大发射波长59nm。1）其标记的抗体合用于所有配备488氩离子激光器的流式细胞仪；2）在流式细胞仪的F通道检测;）具有超乎寻常的光稳定性，非常合用于荧光显微镜技术;4）在较宽的PH值范畴内保持稳定（PH410）。3、:激发波长488nm，最大发射波长7n。1）其标记的抗体合用于所有配备48m氩离子激光器的流式细胞仪;2）在流式细胞仪的
8、FL2通道检测;)合用于荧光显微镜技术;4）为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术，荧光强度低于E。4、C：激发波长63/63,最大发射波长70m。)其标记的抗体合用于所有配备633氩离子激光器的流式细胞仪；)在流式细胞仪的L4通道检测；)合用于荧光显微镜技术;4)同样为小分子染料,非常适合需小分子染料的流式细胞术,荧光强度低于APC。5)与单核和粒细胞非特异性结合多,易浮现假阳性成果。5、PE:激发波长48nm，最大发射波长5nm。1)其标记的抗体合用于所有配备488nm氩离子激光器的流式细胞仪;2)在流式细胞仪的L2通道检测;3）其荧光泯灭性强，不合用于老式的荧光显微镜技术，但合用
9、于激光共聚焦显微镜技术。、PET:激发波长48,最大发射波长65n。）在Bemn Coute流式细胞仪的FL3通道检测;）可合用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。7、E-lea Fuor 610:激发波长4nm,最大发射波长628nm。1)在Bcmn Coltr流式细胞仪的F通道检测;2)荧光强度高;)可合用于小功率激光器的流式细胞仪，也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。8、PEAlexa o647：激发波长488m，最大发射波长668n。1)在ekmaltr流式细胞仪的L4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测；2）不易湮灭;3)可合用于小功率激光器的流式细胞仪
10、,也可使用于大功率激光器的大流式细胞仪。9、PE-Cy：激发波长88m，最大发射波长60nm。）在Beckman oler流式细胞仪的4通道检测，细胞仪F3通道检测；)可合用于大、小功率的流式细胞仪； 3）淬灭性强，不合用于老式的荧光显微镜技术；4)可与I、E搭配，荧光干扰小、补偿小,但不适宜与APC搭配。5)与单核细胞和粒细胞非特异性结合多。0、ECy5：激发波长48n,最大发射波长694n。1）在ecmn Couter流式细胞仪的FL4通道检测，BD细胞仪FL3通道检测;2)可合用于大、小功率的流式细胞仪; 3）淬灭性强，不合用于老式的荧光显微镜技术;4)可与FT、PE、P搭配，荧光干扰小
11、、补偿小，是AP比较抱负的搭配。11、PE-lexa Fo 0:激发波长88n，最大发射波长73n。1）在Bckmn oulter流式细胞仪的FL4通道检测，D细胞仪L通道检测；）光淬灭性很强,要绝对避光。1、PE-Cy7：激发波长88m,最大发射波长77n。）在eckmanCoter流式细胞仪的FL4通道检测,细胞仪FL3通道检测;2）可合用于大、小功率的流式细胞仪; 3）光淬灭性很强,要绝对避光;)可与FTC、P搭配，与FTC无光谱重叠,与APC搭配荧光干扰小,补偿小，是比较抱负的搭配。、T:激发波长59nm,最大发射波长1nm。1）其标记的抗体合用于配备eas d激光器的流式细胞仪;2)
12、荧光不易淬灭,可用于荧光显微镜。14、AC:激发波长33635m,最大发射波长66。1)其标记的抗体合用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪;)在BD细胞仪的FL通道检测，在Bema Clter细胞仪只有配备双激光器的FC00才干检测到。、APy55：激发波长63/35nm，最大发射波长668nm。1）其标记的抗体合用于所有配备氦氖激光器的流式细胞仪；2)重要用于四色以上的流式细胞术。16:PerP：激发波长48nm,最大发射波长77nm。)在Bckma Cour流式细胞仪的FL通道检测,B细胞仪F3通道检测；2)可于FT、PE搭配,荧光光谱重叠少，对随细胞的特异性结合少,但量子产量较低,合用于较高体现物的检测。
