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1、文件类型作业指导书文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJT17研究所化学所第1页共6页Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪（三重串连四级杆质谱）操作指南1. 适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的 Waters Xevo TQ-S 液相色谱/质谱联 用仪（三重串连四级杆质谱）。2. 仪器设备的主要技术指标：1）梯度性能：保留时间标准偏差（SD） 3000:1；平均峰面积N60000；峰面积相对标 准偏差（RSD） 3.0%；保留时间标准偏差（SD） 400:1；平均峰面积1000；峰面积相对标准 偏差（RSD） 3.0%；保留时间标准偏差（SD） 0.047min测试结果
2、：信噪比（S/N） :520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差 （%RSD）： 2.8%；保留时间标准偏差（SD）： 0.00min,均符合指标要求。4）系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD） 0.5%；峰高相对 标准偏差（%RSD） 1x107,测试样品：Glu-Fibrinopeptide B,浓度：100fmol/yl测试结果：峰强度（m/z =785.8）： 1.48x107 ；符合指标要求。6）TRIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA编写
3、李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型作业指导书文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJT17研究所化学所第2页共6页T10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：0.25%测试结果：ADH T19:标准偏差为0.02% (23.77min)； PHO T33:标准偏差 为 0.03% (25.12min)； ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)； BSA T59:标准偏 差为 0.01% (21.58min)； ENL T43：标准偏差为 0.04% (22.33min)； ADH T17:标 准偏差为 0.03% (23.31min)； BSA T10：标准
4、偏差为 0.02% (24.41min)； PHO T88： 标准偏差为 0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试：测试样品17a-OHP。一维保留时间重复性(PDA)指标 保留时间标准偏差(SD): 1.0s； 维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准 偏差(%RSD): 0.5%； 维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(RSD): 0.9%；二维系统精密度测试：测试样品17a-OHP。二维保留时间重复性(PDA)指标： 保留时间标准偏差(SD): 1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准 偏差(%RSD): 0.5%；二维峰高重复性(
5、PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): 90.0%3. 仪器设备的使用环境要求：1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳 压电源，防止意外停电。2) 工作温度：19-22度，不要超过25C，保持恒温。3) 相对湿度：50%-70%4. 操作程序：4.1 开机4.1.1打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和U PLC各 电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入 Masslynx工作站。4.1.2 选择InstrumentMS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuun编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型作业指导书文件编号NIM
6、-ZY-HX-0000-YJT17研究所化学所第3页共6页pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪 烁，同时观察调谐界面DiagnosticsfTurbo Speed泵转速达至到 100%即可，达到实 验状态大约要抽真空4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无需打 开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。）4.1.4气源压力设置：氮气：90-100psi。氩气：0.05Mpa,不超过O.IMpa （实 验前确认氩气瓶压力，低于1 Mpa时需更换氩气。）4.2准备UPLC系统4.2.1准备流动相：用
7、0.22卩m的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新 配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要可挥发的，而且浓度在 2mM-5mM之间，不要超过10mM （注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比 例水相长时间冲洗系统和色谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸，浓度范围 为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等 离子对试剂）。有机相要使用原装进口的色谱纯。（2） SW+Purge （弱洗： 10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗; Wash （强洗：90%ACN+10%纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要
8、用流动 相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22卩m的膜过滤。4.2.2初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统控制 界面，点击左边 Quaternary Solvent Manager 选择 CONTROL Prime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1 min，如果更换了流动相则输入3min，按start。4.2.3初始化UPLC自动进样器：UPLC控制台上选择Sample Manager，选择 ControlPrime syrings，灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes， Numbe
9、r of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样 器准备好。4.2.4灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。4.3 建立一个 Project如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。编写李秀琴审核人批准人日期2009.1文件类型作业指导书文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJT17研究所化学所第4页共6页从Masslynx主窗口选择FileProject Wizard，出现对话窗口，点击Yes,输入 Project Name，选择 Create using existing project as template.点击 Browse 选择 pro
10、ject的模板。4.4 准备质谱如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。4.4.1 MS Tune，首先打开氮气，再开高压(红色表示高压已关，绿色表示高 压已开)。(注：一定要打开氮气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关高压 和氮气)。4.4.2点击 ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3；Cone (V): 30； DesolvationTemp (C): 550； Desolvation(L/hr): 800； Cone (L/Hr): 50；以下参数最 好直接使用intellistart自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resol
11、ution 1: 3； HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15； Ion Energy 2: 0.5；Collision: 2。4.5 ESI调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。4.5.1把调谐液放入A/B/C号位(注：浓度在0.1-lppm之间，根据实际的灵 敏度调整样品浓度)。4.5.2把流动相的流速设为0.2ml/min,有机相和水相比例为1:1。点击Tune 界面下的Fluidics，点击Purge syringe灌注注射器。设置Infusion流速5uL/min， 根据灵敏
12、度可适当调整。设置Flow State模式(Infusion:直接进样；Combined: 液相和样品混合进样；LC:液相进样；Waste:废液)。4.5.3 选择 Xevo TQ-S MS Detector 下面的 IntelliStart：Sample Tune and Develop Method点击Start，调出界面，输入各参数，系统开始自动优化目标化 合物的质谱参数。4.6建立质谱的MRM方法。选择 InstrumentMS Method 进入质谱方法编辑界面。打开新建质谱方法窗口， 再点击MRM,按调谐结果输入下列参数：离子模式、化合物名称、母离子质量编写李秀琴审核人批准人日期2
13、009.1文件类型作业指导书文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJT17研究所化学所第5页共6页数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和 MRM 运行时间等。4.7建立UPLC方法。选择InstrumentInlet Method进入UPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、 自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最后把UPLC的方法命名保存。4.8建立样品运行序列表，运行采集数据。在Masslynx主界面上点击FileNew，新建序列表，输入文件名、注释、质谱 方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。4.9处理数据。4.10 关机一般质谱仪部分不需要
14、关机，不用时只要保持在 Standby 状态下即可。但如 果长时间不用，或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。4.10.1 首先停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路 从质谱移开到废液瓶。4.10.2点击MS Tune进入调谐窗口，点击Standby,关闭高压，让MS进入待机 状态时，指示灯会由绿色变成红色。4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。4.10.4选择0ptionVent，这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时观 察调谐界面DiagnosticsfTurbo Speed泵转速为0时即可关闭质谱电源。5. 仪器基本维护与使用注意事项：5.1 仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。5.3溶剂和流动相的要求，所有的流动相都要用0.22卩m的滤膜过滤，水相要用 前新配，并不得超过两天。样品必须使用0.22卩m的滤膜过滤5.4 ESI 离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个 方面：三氟乙酸（TFA）
