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1、3复方磺胺类药物中SMZ和TMP的薄层色谱分离和鉴定授课教师姓名及职称：一、实验名称复方新诺明中SMZ和TMP的分离与鉴定二、授课对象药学授课形式实验教学三、教学目标1熟悉薄层板的铺制方法2. 了解薄层色谱法在复方制剂分离、鉴定中的应用3. 掌握Rf的计算方法四、教学内容1薄层色谱法的分离原理2. 薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法3. Rf的意义及计算方法五、教学安排 与课时分配1 .讲解演示30 min2.学生操作教师辅导130 min六、授课重点1. 薄层色谱法分离、鉴定复方制剂各组分的方法2. Rf的计算方法七、注意事项1 点样时毛细管切勿损坏薄层表面2展开剂用量适当八、授课方法
2、教师示范讲述，学生操作九、使用教材分析化学实验自编教材十、教研室 审查意见主任签字新乡医学院化学教研室 年 月 日实验 复方新诺明中SMZ和TMP的分离与鉴定一、实验目的1熟悉薄层板的铺制方法；2了解薄层色谱法在复方制剂的分离、鉴定中的应用；3掌握Rf值及分离度的计算方法。二、实验原理复方新诺明为复方制剂，含磺胺甲恶唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)成分，为了使SMZ和TMP分离，可使用薄层色谱法，薄层色谱法是把固定相均匀地铺在玻璃板、铝箔或塑料板上形成薄层，铺好薄层的板 称为薄层板，经点样，展开与显色后，与适宜的对照物质在同一薄层板上所得的色谱斑点作比较，用于进 行定性鉴别或含量测定的方法
3、。薄层色谱法分为吸附薄层色谱法和分配薄层色谱法，本实验采用吸附薄层 色谱法，固定相采用的是硅胶GF254,磺胺甲恶唑(SMZ)和甲氧苄氨嘧啶(TMP)可在硅胶GF254荧光薄层板254254上，用氯仿-乙醇-正庚烷(1:1:1)为展开剂，利用硅胶对SMZ及TMP具有不同的吸附能力，流动相(展开剂) 对二者具有不同的溶解能力而达到混合组分的分离。利用SMZ和TMP在荧光板上产生暗斑，与同板上的对 照品比较进行定性。L比移值(耳)是薄层色谱法的定性参数，比移值是溶质移动距离与流动相移动距离之比。Rf f L0L为原点至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿的距离。如果组分的耳与对照品的耳一致可以初步
4、确定组 分与对照品是同一化合物，仅根据一种展开剂展开后的耳值作为定性依据是不够的，需要经过多种展开系 统得到的耳值与对照品一致时，才可基本认定该组分与对照品是同一化合物。三、仪器与试剂玻璃板，乳钵，微量注射器(或毛细管)，紫外分析仪；磺胺甲恶唑，甲氧苄氨嘧啶，丙酮，氯仿-乙醇-正庚烷(1:1:1)，复方新诺明片剂。四、实验步骤1 粘合薄层板的铺制称取羧甲基纤维素钠0.75g，置于100mL水中，加热使溶解，放置1周待澄清备用。取上述CMC-Na上 清液30mL(或适量)置乳钵中，取10g硅胶GF254，分别加入乳钵中，研磨均匀后，取糊状物适量放在清洁 的玻璃板上，晃动或转动玻板，使其均匀地流布
5、于整块玻璃板上而获得均匀的薄层板。将其平放晾干，再 在110C活化1小时，贮于干燥器中备用。2供试品溶液及对照溶液的制备分别取磺胺甲恶唑0.2g、甲氧苄氨嘧啶40mg,各加丙酮10mL，振摇使溶解，作对照溶液。取本品细 粉适量（0.50.6g,约相当于磺胺甲恶唑0.2g）,加丙酮10mL，振摇，过滤，取滤液，作为供试品溶液。3点样展开在距薄层板底边1.5cm处，用铅笔轻轻划一起始线。用微量注射器（或毛细管）分别点SMZ、TMP对照 液及样品液各5pL,斑点直径不超过23mm。待溶剂挥散后，将薄层板置于盛有30mL展开剂的色谱缸中 饱和15分钟，再将点有样品的一端浸入展开剂氯仿-乙醇-正庚烷（1:1:1）约0.30.5cm,展开。待展开剂移 行约12cm，取出薄板，立即用铅笔划出溶剂前沿，待展开剂挥散后，在紫外分析仪254nm或365nm）下观 察，标出各斑点的位置、外形，计算R值。五、注意事项1 点样时微量注射器针头切勿损坏薄层表面。2色谱缸必须密闭，否则溶剂挥发，改变展开剂比例，影响分离效果。3展开剂用量不宜过多，否则溶剂移行速度快，分离效果受影响，但也不可过少，以免分析时间过 长。一般只需满足薄层板浸入0.30.5cm的用量即可。六、思考题1 为什么薄层荧光被掩盖的板不能使用?2荧光薄层检测斑点的原理是什么?3色谱缸（槽）若不预先用展开剂蒸气饱和，对实验有什么影响?
