正交设计多糖提取实验方案

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1、多糖 正交实验方案基本提取工艺流程:黄精、百合干燥粉碎石油醚脱脂2 次加水热提提取液过滤水浴浓缩离心取上 清加入 Sevag 试剂脱蛋白操作取上层水层加无水乙醇沉淀收集沉淀用水溶解 过滤除杂质重复1 次醇沉收集沉淀加水溶解定容成为贮备液。精密量取贮备液一一加水稀释定容一一供测多糖含量。精密量取贮备液一一置锥形瓶水浴蒸干一一干燥3h冷却后一一称重,计算浸膏得率。一、提取过程的正交方案:1、称取黄精、百合各10g干燥至恒重一一粉碎成粗粉(过筛)一一(置于圆底烧瓶中)加入5倍量 (100ml)石油醚一一水浴50C加热回流1h,共2次,进行脱脂及除去小分子糖一一弃液留渣,药渣晾干(置于培养皿中于通风处

2、过夜晾干,或置于圆底烧瓶中水浴上加热至能轻松倒出)一一(按 照正交设计表的要求)加适量蒸馏水,于适宜温度,水浴加热回流提取规定次数一一合并提取液一 减压抽滤水浴浓缩(90C) 至固定量30ml (浓缩过量时补足体积)4000r/min离 心10min (注射器抽取)取上清液2、一一置于锥形瓶中一一加入Sevag试剂(氯仿:正丁醇=5:1)约等量一一置于恒温水浴振荡器50C 振荡15min 改置于分液漏斗中静置20min以上 待其分层后,取最上层(从上口倒出) 重复操作2次置于广口瓶,加醇处理,加入4倍量的无水乙醇(预冷过)冰箱冷藏过夜使 其沉淀一一减压抽滤,收集沉淀一一(连同滤纸一起)用20m

3、l蒸馏水溶解一一过滤除去水不溶物一 重复1次加醇沉淀,减压抽滤收集沉淀,加少量蒸馏水溶解,加水稀释定容至50ml容量 瓶中,成为贮备液。3、精密量取1ml贮备液,加至100ml容量瓶中,加水稀释至刻度,定容摇匀。供测定多糖含量。4、精密量取10ml贮备液,置于(已干燥并精密称重的)小锥形瓶中,水浴蒸干,于105C烘箱干 燥3h,取出迅速置于玻璃干燥器内冷却30min,迅速称重,计算浸膏得率。浸膏得率=(干浸膏重量/药材质量)X(50/10) x 100%注意事项:1、粉碎不用太细,20-40目均可。脱脂时圆底烧瓶可选择500ml或1000ml的。2、9 份水浴浓缩条件应一致,置于水浴锅盖面上,

4、注意不要打翻。3、离心后取上清液时,用注射器抽吸,每编号用一支。4、精密量取操作,用移液器或移液管5、制备浸膏的小锥形瓶,约50ml规格的。应洁净,105C干燥2-3h至恒重,迅速取出,置于玻璃 干燥器内冷却 30min 后,带手套操作,迅速称量,记录空瓶重量。6、加醇沉淀时,应置于磁力搅拌器上,在搅拌下缓慢加入无水乙醇。在抽滤时再取回搅拌子。多糖提取正交因素表水平温度(C)提取时间h料液比提取次数17011:812801.51:10239021:123多糖提取正交试验表编号A提取温度CB提取时间hC料液比V: VD提取次数多糖浸膏%多糖含量%17011:812701.51:10237021:12348011:1035801.51:12168021:8279011:1228901.51:8399021:101klk2k3R三、多糖脱蛋白及醇沉正交试验方案

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