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1、用流式细胞仪检测小鼠Fox P3调节性T细胞1、所需试剂：(l)Fox P3-PE, CD4-FITC,CD25-APC;PE Rat IgG2a 同型对照，(2) Normal Rat Serum， Flow Cytometry Staining Buffer(3) Fixation/Permeabilization用法：用Fixation/Permeabilization Diluent 对其进行4倍稀释(4) Fixation/Permeabilization Diluent(5) Permeabilization Buffer (10X)用法：用蒸馏水对其进行10倍稀释2、操作步骤：(
2、1) 取两支试管，加入100卩L制备好的小鼠脾细胞1X106(混匀)。(2) 试验管中加入适量CD4/25，对照管加入CD4/Ra t IgG1-APC混匀，室温避光 15-30分钟。如果需要溶血，加入(1 X)溶血素，混匀，避光10分钟，离心1500转，5 分钟。弃上清。(3) 然后取出用预冷的PBS洗一遍，离心1500转，5分钟。弃上清，加入1ml新鲜 制备的eBioscience Fixation/Permeabilization应用液。混匀,4C避光 12分钟。(4) 取出，离心 1500转，5分钟；再用2 ml Permeabilization Buffer遍。弃 掉上清。(5) 两
3、管中加入2 p L fc r blocking，避光孵育5分钟。(6) 取出后不洗，直接加入适量Foxp3-PE标记的抗体，对照管加入适量rat IgG2b同型对照(eBioscience)，混匀放4C避光孵育30分钟(7) 取出试管用2ml Permeabilization Buffer洗一遍，1500转，离心5分钟。(8) 弃掉上清，加入0.5 mlPBS,1小时内上机 结果分析：2.001o g-0200fiOO BOO 1000FSC-Height寻一1OU1011(/1OJ104CD4 FFC2.DD1RZo 2.002 oCl -Cis口10 101 102 103 104CD4 FIITCr2.002Q T -R2CD4 FITC
