《巨噬细胞提取方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《巨噬细胞提取方法（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、我是按照经典的方法，注射淀粉肉汤3 天后腹腔灌洗得来的，培养3小时除去上清液后纯化了巨噬细胞然 后加药的，培养 24 小时后可以看到细胞已经贴壁了，但是我发现加了 LPS 的组细胞悬浮的比阴性组多， 这个就很奇怪了，我的LPS浓度从10ng直到20ug/mL都有设置，但是吞噬率无一超过阴性组的。(1) 小鼠2 ml/只腹腔注射3%巯基乙醇酸钠，三天后颈椎脱臼处死小鼠，用75%乙醇浸湿3 min消毒，置 超净台中；(2) 用镊子将小鼠下腹部皮肤提起，剪开一个小口，将皮肤撕开，完全暴露腹膜；(3) 用镊子提起腹膜，用10ml注射器向小鼠腹腔中注入6ml PBS缓冲液，针尖向上，避开肠和脂肪,反复回
2、 抽腹腔液，不同的方向冲洗数次，最后吸出腹腔液；(4) 将细胞悬液1000r/min条件下离心10min,用PBS液洗涤l次，用含10%的胎牛血清RPMIl-1640将细 胞悬起，台盼蓝染色，当活细胞数达到95%以上时调整细胞浓度至2x106个/ml。(5) 将细胞接种到96孔细胞培养板中，每孔100pL,把细胞培养板放置于37C5%CO2的培养箱中培养3h；(6) 3h后取出细胞培养板，清洗1次，去除未贴壁的细胞，弃去上清液，然后每孔加入100mL RPMI-1640 完全培养液,此时细胞培养板孔内的贴壁细胞即为纯化以后的小鼠腹腔巨噬细胞。按照以上述制备和纯化腹腔巨噬细胞方法处理细胞后，20
3、0pL/孔加入不同浓度的阳性药LPS，阴性对照孔 加200pL培养基，放置于培养箱中，培养24 h后取出细胞板，弃上清，用PBS液200pL/孔洗3 遍,加0.1% 中性红溶液200pL/孔，继续于培养箱中孵育3h。取出细胞板，弃上清，用PBS液200pL/孔洗两遍后加细 胞裂解液(醋酸与无水乙醇等体积混合)200pL/孔，将96孔板放在微型振荡器上振荡10 min后，放在4C 冰箱12h过夜。将细胞板520 nm波长处测定吸光度。按下式计算吞噬中性红增加率%=(给药孔A值一对 照孔A值)/对照孔A值x100%。宾验方法取韻腥腔巨薩细胞与乳胺颗羟在不同培弄衆件下混合后走莹加24孔板,37C ,
4、 5% UQw培养箱中摒育百，烝光显微尙下计魏吞匡耳分率和吞噬揺试剖，试剂盒位器.耗初实迪歩骤小鼠1640 :咅題1畔血洁典抗 台盼兰壬术器械一戾性兰射器頃科型 眼科糞 9&孔板COM咅莽箱一，实幕彌1. 如果采用剌隸物,则可在克验前三天頤控注勾眇題乙醇酸钠厚只2 mL,获得 的巨噬细胞数芟峯一些”不乘用刺锻物,直按汗冶下面的歩強=2. 拉珊h砸隔r在了E%酒精浸泡1-2分钟,移入jg务舍中r仰恐位固走于解咅腋 丄,碘酒i肖毒腹部皮転*酒精第珠脱碘，用手术直弟充分剪幵腥咅E.酬,暴盍據部 肌层，再冃闿静球消毒腹郃肌真.3一用注肘器抽取弓R1L含取抗的即讪 北40培梅三W腔,用墀球轻彌器1-2
5、nin r然后.冃眼起银*0臭起卿空r并用眼科剪剪?口 r用吸晉吸取細砲岂巨噬纽抱一般没有特殊的鉴定方扌去,有两条经验：1巨噬细胞是终未分化细胞不会瑁殖2.很难消化下来r所以齢的时侯,必须直接按种到目的培养器m丰.更赛最新实验心得共2个心毎）令studentdxy:小底康腔巨坦妊胞，至注討器E回的右法他|我以前也袒不回耒隹多?B几决就好了 .你可以用一妾锻子彳刀打开皮扶.易產腹腹后,再用一妄新倔子,淸 洁加丢脇密.加命莒养蔻注入百.拓后尋用&子至H脇虺.往包抽.弐6内BEJS住兰.可以再垃个牟虔.再拍. 主要礁子超后,古脏就不分堵了 ,而强匿不会那么轻易祓夫破的。发表于2005 08-15 20:53 nt）、e.小自岛薛巨瞎另翩惑曲自床左法兰81我作的实捡小凤分为四爼因为涉及須更垢弄折以要求无呈接托.目己小心又cJ心.到昨还是有TE污梁 了。隹是沏了3组,在该说还星不错的兰时我还亲姜取血,及礙汎发表于2004-06-09 15:49
