《实验四---果蝇唾腺染色体的观察》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验四---果蝇唾腺染色体的观察（12页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验四 果蝇唾腺染色体的观测温度：1-24摄氏度 大气压：80.182.4Kpa 日期:.48姓名:郑元跃 学号：03225 班级:14级生物二班一 目的、观测果蝇唾腺染色体的形态特性；、掌握剥离果蝇幼虫唾液腺的技术以及制作唾腺染色体玻片标本的措施；3、观测果蝇唾液腺染色体的构造特性及理解果蝇唾腺染色体在遗传学研究中的意义;二原理双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比一般染色体大得多,宽约5,长约40um,相称于一般染色体的00150倍，因而又称为巨大染色体。唾腺染色体处在体细胞染色体联会配对状态。并且唾腺染色体通过多次复制而并不分开，每条染色
2、体大概有1004000根染色体丝的拷贝,因此又称多线染色体。多线染色体经染色后，浮现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的,代表着果蝇等昆虫的种的特性;如染色体有缺失、反复、倒位.易位等，容易在唾腺染色体上观测出来。观测多线染色体的特性:巨大;体细胞中同源染色体配对,因此细胞中染色体只可以观测出半数(n);各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chroocenr)；横纹有深浅、疏密的不同,各自相应排列,这意味着基因的排列。果蝇的染色体构成由于在唾腺细胞中条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会,经碱性染料染色后,可以观测到
3、一种染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的条染色体臂。在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同,被称为明带和暗带的横纹，这些横纹的位置、宽窄、数目都具有物种的特异性，不同物种，不同染色体的不同部位形态和位置是固定的,因此根据染色体各条臂带纹特性和各条臂端部带纹的特性能精确辨认各条染色体。在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环,其富含转录出来的RNA,因此不着色，是基因活动的区域。在个体发育的不同阶段,疏松区或巴尔比尼环在染色体上浮现的部位不同，因此可以研究基因的体现，开展多种染色体变异的研究等等。黒腹果蝇(Dsophil maogat)染色体的构成；有4对
4、染色体。其中一对为性染色体(XY或X),X染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形;第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体,呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边沿。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上,另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央,可以从异染中心呈“”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3R)，Y染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成,因此抱负的片子,不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（、L、2R、3、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观测)。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体
5、臂上可观测到许多明暗相间的带。黒腹果蝇(Drosohila laogaster)唾腺染色体特点:()巨大;(2)体联会现象决定了染色体只有半数;(3)各个染色体中异染色质多的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心; (4)横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自相应排列,这意味着基因的排列,具有种的特异性。(5)多线染色体（与中期高度螺旋的染色体相区别）若有缺失、易位、倒位、反复等现象，很容易在唾腺染色体上辨认出来。果蝇唾腺染色体核型图 果蝇唾腺染色体模式图果蝇唾腺染色体图三 材料与措施材料:黑腹果蝇（soila eanogter)三龄幼虫用品:显微镜、放大镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片试剂：%醋酸洋红、
6、HCl、生理盐水措施：.剥离唾腺:在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动缓慢、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫,或者选择经低温解决的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。每只手各持一种解剖针，在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处，因此左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位,合合用力向右拉唾腺腺体随之而出。唾腺是一对透明的棒状腺体，外有白色的脂肪组织(不透明）。清除幼虫其他组织部分,并把唾腺周边的白色脂肪剥离干净。.解离:在唾腺组织上滴一滴1滴HCl,解离-2in，以松软组织,利于染色体的分散。3.染色:吸去HCl,用水冲洗2-次
7、后滴加醋酸洋红染液染色10i。4.压片：染色完毕后,盖上干净的盖片，并覆一层滤纸。将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次。(注意不要使盖片移动,用力和揉动是一种方向,不能来回揉。当腺体被染成红色后，用滤纸擦去染液周边一圈的黑色沉淀物,再用蒸馏水冲洗3次,然后加上盖玻片，在盖玻片上方再植盖一层滤纸，用镊子在盖玻片,轻轻敲击几下。再用拇指按住盖玻片用力下压，把腺体细胞压破，把染色体压散开.压片时放载玻片的桌面要干,不要使盖片滑动。制好的玻片标本用蜡封住盖玻片四周以防干燥。经低温冷冻解决的材料经解离,染色.加盖片后不必敲击镜检即可看到分散良好的唾腺染色体.镜检:再用高倍镜观测。流程:解剖
8、唾腺转到载玻片上加滴Hc解离1m吸去Cl水洗醋酸洋红染色1min盖片、压片镜检注意事项;1一定加生理盐水,否则唾腺易干。 2.将脂肪组织清除干净。 .水不可太多,否则幼虫会漂浮并且活跃。 4.染色时间不可过长，否则背景也着色。 5压片时要揉。 6.染色完后来，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片。四成果与分析X2L3L34 2R 0显微镜下看到的成果五 讨论与结论所做出的唾腺染色体能观测到有条,并且制作的材料都是果蝇的三龄幼虫，制作的环节为剥离，解离,漂洗，染色,压片。和前人的做法大体相似,在制作过程中我们没有考虑外界因素的影响，不同条件下染色体的膨松区的构造也会发生变化;每个人和一种所选的
9、三龄幼虫大小不同样,而导致实验成果有差别。在实验的过程中,通过用不同大小的三龄幼虫所拉出的唾腺染色体进行压片观测,通过对比观测成果，发现越大的三龄幼虫所观测到的染色体越明显，更好的数出染色体条数。能更快的做出实验成果。通过实验中总结与观测，实验中应把握：（1)位于幼虫体前约三分之一处。(2）是囊状构造,常附着不透明的带状脂肪。（3）唾腺细胞较大,轮廓清晰。（4）要将脂肪组织清除干净，否则影响观测,压片时不能来回揉压。（5)由于样品难用肉眼观测到，在各步操作过程中(如冲洗、吸水等）要小心谨慎，以免样品丢失。（6）掌握好染色时间，时间过短则染色效果不明显，时间过长则容易使背景染色，影响观测。（）观
10、测唾液腺染色体制片,寻找形态良好、分散适中的图像仔细观测染色中心及各条臂的特点。由于短小的第染色体不易观测到，因此常看到明显的5条臂。雄果蝇的Y染色体重要由异染色质构成，几乎涉及在染色中心内，因此雄果蝇的X染色体臂比雌果蝇的X染色体臂要细某些。文献1任莉萍、聂永青、许树成.果蝇唾腺染色体的制作技术研究安徽农业科学,8（25)：369-1310.彭晓云果蝇唾腺染色体观测材料的制备J.生物学通报,43（4):5-563刘丽影、刘文静、邵红.果蝇唾腺染色体四种染色体措施的比较J.佳木斯大学学报（自然科学版),2():24-26.4赵锦惠、刘中华.果蝇唾腺染色体制片措施的改善生物学通报,46(）:52
11、-53.龚惠明.果蝇唾腺染色体制片应注意的问题J.生物学教学.,32():7-2.洪正树.获取果蝇三龄幼虫的简便措施J.生物学通报.,37():2-63.邹玉兰、林拥军如何培养具有良好唾腺染色体的果蝇三龄幼虫J.养殖与饲养,（7):-4.8胡甘用于果蝇唾腺染色体实验材料的培养措施.实验科学与技术.,5（）:38-2.9潘新法、许宏庆.不同浓度的苯酚品红对果蝇唾腺染色体的染色效果J.生物学杂志,，19(）：26-27杨大翔“果蝇唾腺染色体的制备与观测实验”的背景知识J生物学教学,，30（4）：37-91彭晓云果蝇唾腺染色体观测材料的制备.生物学通报，43（4):55612王华峰、那冬晨果蝇唾腺染
12、色体观测实验教学的改革与摸索实验室科学,13(5）：9-713刘丽影，刘文静，邵红.果蝇唾腺染色体四种染色措施的比较J.佳木斯大学学报，,2(3)：25-42714郝大翠，姚明镜，刘焰,蔡明历.果蝇唾腺染色体试材准备及观测措施的改善J.生物学通报,45():4-511龚慧明.果蝇唾液腺染色体制片应注意的问题.生物学教学，32(10）：2916洪正树.获取果蝇三龄幼虫的简便措施J.生物学通报，,37（)62617邹玉兰,林拥军如何培养具有良好唾腺染色体的果蝇三龄幼虫J.养殖与饲养,，(7）:3518何兰花，卢家现用改良苯酚品红染色液替代醋酸洋红染色液的研究J.生物学杂志，,17（):21作业1、
13、何谓多线染色体？答：多线染色体:果蝇的唾腺细胞停止在分裂间期(永久间期 )，染色 体核蛋白纤维不断复制，平行排列形成巨大而伸展的多线染色体唾腺染色体通过多次复制而并不分开，每条染色体大概有0000根染色体丝的拷贝，因此又称多线染色体（polytee croosome)。核内DNA多次复制产生的子染色体平行排列，且体细胞内同源染色体配对，紧密结合在一起，从而制止了染色体纤维进一步聚缩,形成体积很大的由多条染色体构成的构造叫多线染色体。多线化的细胞处在永久间期，体积也相应增大,它存在于双翅目昆虫的幼虫组织内，如唾液腺、气管等。特点:多线染色体不是生长到一定限度就进入有丝分裂,而是不断生长，继续复制
14、，并且新的复制体总是沿其全长整洁地与本来的染色体并列着的,因而染色体就生长得极其庞大。例如,在果蝇唾腺细胞中每一种多线染色体都是通过大概9个循环的复制产生的，因此每条多线染色体至少涉及了50-1000条单染色体(DNA纤丝),某些昆虫的多线染色体涉及了多达10条。通过醋酸洋红或地衣红染色后,在高倍光镜下就可以看到每条多线染色体都是由暗带和明间带直线交替构成的。同步也已证明，大部分DA存在于暗区带之内,每条区带都相应于染色体上染色粒的聚合区域,它能被碱性染料染得很深，孚尔根染色呈现阳性，而明间带则几乎不着色。后来又证明了每条区带都涉及几种或几十个基因位点。2、你如何证明你看到的是唾腺染色体？答：(）由于在唾液腺细胞中8条染色体之间以着丝粒互相连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会,经碱性染料染色后,可以观测到一种染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5条染色体臂。（2)在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称做明带、暗带的横纹，这些横纹的位置,宽窄、数目都具有物种的特异性。不同物种,不同染色体的不同部位形态位置是固定的。因此根据染色体
