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1、第一章药物的鉴别实验第一节 概 述根据药典进行的药物分析重要有三大项:鉴别、检查和含量测定。药物的鉴别实验(dentificatio t）是用于鉴别药物的真伪，在药物分析中属首项工作,只有证明被分析的药物是真的,才有必要接着进行检查、含量测定。 药典所收载的药物项下的鉴别实验措施,仅合用于贮藏在有标签容器中的药物,用以证明与否为其所标示的药物。它与分析化学中的定性鉴别有所区别。这些实验措施不能赖以鉴别未知物。 原料药:鉴别实验结合性状项下的外观和物理常数进行确证。 一、鉴别的项目 （一)性状 药物的性状反映了药物特有的物理性质,一般涉及外观、嗅、味、溶解度以及物理常数等。 (二）一般鉴别实验（
2、genera dentiicai test) *以药物的化学构造及其物理化学性质为根据，通过化学反映来鉴别药物真伪的。 无机药物：根据其构成的阴离子和阳离子的特殊反映，并以药典附录III项下的一般鉴别实验为根据,*有机药物：采用典型的官能团反映。 *一般鉴别实验的项目: 丙二酰脲类、托烷生物碱类、芳香第一胺类、有机氟化物类、 无机金属盐类(钠盐、钾盐、锂盐、钙盐、钡盐、铵盐、镁盐、铁盐、铝盐、锌盐、铜盐、银盐、汞盐、铋盐、锑盐、亚锡盐）、有机酸盐（水杨酸盐、枸橼酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、酒石酸盐)、无机酸盐(亚硫酸盐或亚硫酸氢盐、硫酸盐、硝酸盐、硼酸盐、碳酸盐与碳酸氢盐、醋酸盐、磷酸盐、氯化物、
3、溴化物、碘化物)。一般鉴别实验仅供确认单一的化学药物,如为数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时,除另有规定外，应不合用。*通过一般鉴别实验只能证明是某一类药物,而不能证明是哪一种药物。例如，经一般鉴别反映的钠盐实验，证明某一药物为钠盐,但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其他某一种钠盐药物。要想最后证明被鉴别的物质究竟是哪一种药物，必须在一般鉴别实验的基本上,再进行专属鉴别实验，方可确认。 （三）专属鉴别实验（spciic ieiiatin test） *根据每一种药物化学构造的差别及其所引起的物理化学特性的不同,选用某些特有的敏捷定性反映,来鉴别药物真伪的。是证明某一种药物的根据。综上所述，
4、一般鉴别实验是以某些类别药物的共同化学构造为根据，根据其相似的物理化学性质进行药物真伪的鉴别,以区别不同类别的药物。而专属鉴别实验,则是在一般鉴别实验的基本上，运用多种药物的化学构造差别，来鉴别药物,以区别同类药物或具有相似化学构造部分的各个药物单体,达到最后确证药物真伪的目的。二、鉴别实验条件 鉴别实验是以所采用的化学反映或物理特性产生的明显的易于察觉的特性变化为根据。因此，能影响鉴别实验鉴定成果的特性变化的因素都是应当精心选择和严格控制的。也就是说,鉴别实验应当是在规定条件下完毕的，否则鉴别实验的成果是不可信的。 (一）溶液的浓度 重要指被鉴别药物的浓度，及所用试剂的浓度。由于鉴别实验多采
5、用观测沉淀、颜色或多种光学参数(、A、等）的变化,来鉴定成果，而药物和有关试剂的浓度会直接影响上述的多种变化,必须严格规定溶液的浓度。 (二）溶液的温度 温度对化学反映的影响很大，一般温度每升高0,可使反映速度增长倍。 （三)溶液的酸碱度 许多鉴别反映都需要在一定酸碱度的条件下才干进行。溶液酸碱度的作用，在于能使各反映物有足够的浓度处在反映活化状态，使反映生成物处在稳定和易于观测的状态。 (四)干扰成分的存在在鉴别实验中，如药物构造中的其他部分或药物制剂中的其他组分也可参与鉴别反映，产生干扰，应选择专属性更高的鉴别反映将其消除或将其分离。 （五)实验时间 有机化合物的化学反映和无机化合物不同，
6、一般反映速度较慢,达到预期实验成果需要较长的时间。这是由于有机化合物是以共价键相结合,化学反映能否进行，依赖于共价键的断裂和新价键形成的难易,这些价键的更替需要一定的反映时间和条件。同步在化学反映过程中，有时存在着许多中间阶段,甚至需加入催化剂才干启动反映。因此,使鉴别反映完毕，需要一定期间。 三、鉴别实验的敏捷度 （一）反映敏捷度和空白实验反映的敏捷度(sensitiity）:在一定条件下,能在尽量稀的溶液中观测出尽量少量的供试品，反映对这一规定所能满足的限度。它以两个互相有关的量,即最低检出量(inimum deca qutity）（又称检出限量)和最低检出浓度（nmu dectbleoc
7、enratn）(又称界线浓度)来表达。 最低检出量(以m表达），就是应用某一反映，在一定的条件下，可以观测出的供试品的最小量,其单位一般用微克（g)表达（1m g=1-6g)。最低检出浓度就是应用某一反映,在一定条件下，可以观测出供试品的最低浓度,一般以1G(或1V)表达，其中G(V）表达具有g重某供试品的溶液的g()数。 最低检出量和最低检出浓度之间的关系可以用下式表达， 式中为鉴别实验时,所取供试溶液的最小体积(l)。如果选用鉴别反映的敏捷度愈高,则产生可被观测的成果所需要的药物愈少。 空白实验(lanktest): 所谓空白实验，就是在与供试品鉴别实验完全相似的条件下，除不加供试品外，其
8、他试剂同样加入进行的实验。 在选用敏捷度很高的反映时，必须采用高纯度的试剂和非常干净的器皿，才干保证鉴别实验成果的可靠性。为了消除试剂和器皿也许带来的影响,应同步进行空白实验，以供对照。 (二）提高反映敏捷度的措施在实际工作中,常采用如下措施来提高反映的敏捷度。 1加入与水互不相溶的有机溶剂 在鉴别实验中，如生成物具有颜色并颜色很浅时，可运用加入少量与水互不相溶的有机溶剂，浓集有色生成物,使有机溶剂中颜色变深，易于观测。 2.改善观测措施例如,将目视观测溶液的颜色，改为可见分光光度法；将观测生成沉淀改为比浊度法等。 第二节 药物的一般鉴别实验一、鉴别措施 (一)化学鉴别法 1.干法将供试品加合
9、适试剂在规定的温度条件下（一般是高温)进行实验，观测此时所发生的特异现象。(1）焰色实验:常用干法，运用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。 措施为:取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧,使火焰显出特殊的颜色。(2)加热分解:在合适的温度条件下,加热使供试品分解，生成有特殊气味的气体。 2.湿法 系指将供试品和试剂在合适的溶剂中，于一定条件下进行反映，发生易于观测的化学变化，如颜色、沉淀、气体、荧光等。 (1）呈色反映鉴别法:系指供试品溶液中加入合适的试剂溶液，在一定条件下进行反映，生成易于观测的有色产物。在鉴别实验中最为常用的反映类型有： 1）三氯化铁呈色反映
10、-酚羟基或水解后产生酚羟基; ）异羟肟酸铁反映-多为芳酸及其酯类、酰胺类； 3)茚三酮呈色反映-脂肪氨基; 4)重氮化偶合显色反映-芳伯氨基或能产生芳伯氨基; 5)氧化还原显色反映及其他颜色反映。 （2）沉淀生成反映鉴别法：常用的此类反映有： 1）与重金属离子的沉淀反映 在一定条件下,药物和重金属离子反映，生成不同形式的沉淀; 2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反映 多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐; 3)其他沉淀反映。 (3)荧光反映鉴别法：常用的荧光发射形式有如下类型： 1）药物自身可在可见光下发射荧光； )药物溶液加硫酸使呈酸性后,在可见光下发射荧光;3)药物和溴反映后,于可见光
11、下发射出荧光； 4)药物和间苯二酚反映后，发射出荧光及药物经其他反映后，发射荧光。 ()气体生成反映鉴别法: ）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱解决后,加热，产生氨（胺）气; 2）化学构造中含硫的药物，可经强酸解决后，加热，发生硫化氢气体; 3）含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气;含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后,加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。 (二）光谱鉴别法 .紫外光谱鉴别法 常用的措施有: ）原则品对照法; 2)规定吸取波长法; 3）规定吸取波长和相应的吸取度法; )规定吸取波长和吸取系数法; 5)规定吸取波长和吸取度比值法。 2.红外光谱鉴别法 红
12、外光谱法是一种专属性很强、应用较广(固体、液体、气体样品)的鉴别措施。1. 原则图谱对照法:中国药典（995年版）和BP (1993） 2. 对照品法:US (23)。 (三）色谱鉴别法 运用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特性色谱行为(f值或保存时间）进行鉴别实验。常用的措施有： 1.薄层色谱鉴别法 在实际工作中，一般采用对照品(或原则品）比较法,规定供试品斑点的f值应与对照品斑点一致。2.高效液相色谱鉴别法 一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行实验。规定供试品和对照品色谱峰的保存时间应一致。含量测定措施为内标法时，可规定供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保存时间与内标物
13、峰的保存时间比值应相似。3.气相色谱鉴别法 措施同高效液相色谱法。4.纸色谱鉴别法 纸色谱法存在分离效能低、分析时间长等缺陷,在药物鉴别实验中逐渐被薄层色谱法所取代。 二、鉴别实验与原理 (一)有机氟化物1鉴别实验 取供试品约7m,照氧瓶燃烧法（附录C)进行有机破坏，用水0m与.0mol/氢氧化钠溶液6.5ml为吸取液，俟燃烧完全后,充足振摇;取吸取液2l，加茜素氟蓝试液0.5ml，再加12%醋酸钠的稀醋酸溶液0.2,用水稀释至ml，加硝酸亚铈试液05ml，即显蓝紫色;同步做空白对照实验。 2.实验原理有机氟化物经氧瓶燃烧法破坏，为碱性溶液吸取成为无机氟化物后,与茜素氟蓝、硝酸亚铈形成蓝紫色络
14、合物。(二)有机酸盐 .水杨酸盐 鉴别实验一 取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液1滴,即显紫色。 原理 本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物,在中性时呈红色,弱酸性时呈紫色;若在强酸性中,配位化合物分解生成游离水杨酸。 本反映极为敏捷，只需取稀溶液进行实验,如取用量大，产生颜色过深时,可加水稀释后观测。 鉴别实验二 取供试品溶液，加稀盐酸,即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。原理 水杨酸不溶于水(0时溶解度为1/0）,故供试液加酸即析出游离水杨酸。由于水杨酸的酸性(K=1.06103,5)不小于醋酸(K=1.8510-5,2）,故能与醋酸铵作用释出醋酸，而自身形
15、成铵盐溶解。析出的水杨酸亦可经冷水洗涤、干燥后测定熔点(158-61)。 .苯甲酸盐3乳酸盐 4.枸橼酸盐 5酒石酸盐6.醋酸盐鉴别实验 取供试品,加硫酸和乙醇后加热，即产生乙酸乙酯的香气。 (三）无机金属盐 钠盐 鉴别实验一取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品,在无色火焰中燃烧，火焰即显鲜黄色。原理 钠的火焰光谱在可见光区，有90nm、58.6m重要谱线,故其燃烧火焰显黄色。本焰色反映极为敏捷（最低检出限量为0ng钠离子)。因此，对所用仪器和试剂规定必须很严格。在检测前应将铂丝烧红,趁热浸入盐酸中,如此反复多次,直至火焰不染黄色后，再蘸取供试品进行测定。只有当强烈的黄色火焰持续数秒钟不退，才干确觉得钠盐。鉴别实验二 取供试品的中性溶液,加醋酸氧铀锌试液，即生成黄色沉淀。原理 其反映式为： 本实验中,供试品溶液应为中性;有些有机酸盐（如水杨酸钠）遇醋酸氧铀锌试液能生成有色配位化合物，故在实验前应对供试液进行预解决。其解决措施是，在供试液中加入稀盐酸,滤过，取滤液蒸干，加水溶解后,再供实验用;实验中,醋酸氧铀锌试液要加多过量;必要时,还需用玻璃棒摩擦试管壁，以增进黄色沉淀的析出。 .钾盐 鉴别试液一 焰色反映显紫色,但有少量钠盐混存时，须隔色玻璃透视，方能辨认。 原理 钾的火焰光谱在可见光区有766.49nm、6.90nm与04nm几条谱线，其中以76
