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1、军事医学学科学院院（博士士）微生生物 20022年微生生物1、毒力力岛：毒力岛岛具有以以下特点点：1. 编码细细菌毒力力基因簇簇的一个个相对分分子质量量较大的的(2001000kbb左右)染色体体DNAA片段；2.一一些毒力力岛的两两侧具有有重复序序列和插插入元件件， 但是是也可以以没有；3.毒毒力岛往往往位于于细菌染染色体的的tRNNA基因因位点内内或附近近， 或者者位于与与噬菌体体整合有有关的位位点，肠肠致病性性大肠杆杆菌(EEPECC)的LLEE毒毒力岛就就位于ttRNAA seelC位位点；44.毒力力岛DNNA片段段的G+C mmol % 、密密码使用用和宿主主细菌染染色体有有明显差
2、差异， 有的比比宿主细细胞的GG+C moll% 明明显高， 有的 明显低低； 55.毒力力岛编码码的基因因产物许许多是分分泌性蛋蛋白和细细胞表面面蛋白， 如溶溶血素、菌菌毛和血血红素结结合因子子， 一一些毒力力岛编码码细菌的的分泌系系统（如如型分泌泌系统）、信信息传导导系统和和调节系系统； 6. 一种病病原菌可可以有一一个或几几个毒力力岛； 7. 一部分分学者认认为， 细菌菌的毒力力岛应该该包括位位于噬菌菌体和质质粒上的的、与细细菌的毒毒力有关关的、其其G+CC百分比比和密码码使用与与宿主细细胞明显显不同的的DNAA片段；8.毒毒力岛可可能与新新发现的的病原性性细菌有有关。2、定点点诱变技技
3、术：是在体体外特异异性地取取代、插插入或缺缺失DNNA序列列中任何何一个特特定碱基基的技术术，包括盒盒式取代代诱变、寡寡核苷酸酸引物诱诱变及PPCR定定点诱变变等。33、DNNA微点点阵芯片片：寡核苷苷酸芯片片的主要要原理与与cDNNA芯片片类似，主主要通过过碱基互互补配对对原则进进行杂交交，来检检测对应应片段是是否存在在、存在在量的多多少。它它与cDDNA芯芯片的本本质差别别在于寡寡聚核苷苷酸芯片片固定的的探针为为特定的的DNAA寡聚核核苷酸片片段（探探针），而而后者为为cDNNA。基基因表达达芯片的的两个重重要参数数是检测测的灵敏敏度和特特异性。ccDNAA芯片由由于基因因长短不不同以至至
4、Tm值值各异，众众多的基基因在同同一张芯芯片上杂杂交，使使得杂交交条件很很难同一一，使得得传统的的cDNNA芯片片的分辨辨能力受受到限制制。寡聚聚核苷酸酸芯片序序列选择择经过优优化，利利用合成成的一定定长度（如如20，330，770-mmer等等）的寡寡核苷酸酸单链探探针代替替全长ccDNAA点样，制制成芯片片。其优优点：无无需扩增增，防止止扩增失失败影响响实验；减少非非特异杂杂交，能能有效区区分有同同源序列列的基因因；杂交交温度均均一，提提高杂交交效率；减少二二级结构构。此外外，寡核核苷酸芯芯片还可可以通过过原位合合成法制制备，而而cDNNA芯片片只能通通过后者者制备。上上述特点点使得寡寡核
5、苷酸酸芯片的的应用日日益广泛泛。但是是当寡核核苷酸序序列较短短时，单单一的序序列不足足以代表表整个基基因，需需要用多多段序列列。 高密度度的寡核核苷酸芯芯片作为为一个有有力的工工具广泛泛用于分分析基因因组数据据，与传传统的凝凝胶分析析方法比比较起来来，具有有成本低低、高通通量、高高度自动动化的优优点，这这些寡核核苷酸芯芯片，已已广泛用用于用遗遗传变异异扫描、分分子条编编码、基基因表达达检测及及测序。寡寡核苷酸酸芯片主主要用途途包括： 1）临临床诊断断方面。用用于研究究人类多多基因相相关性疾疾病（如如癌症、心心血管疾疾病等），发发现相关关的基因因及其相相互作用用机理，寻寻找早期期发现，早早期诊断
6、断的方法法；同时时还可制制成外源源性病原原体相关关基因芯芯片，如如病毒性性肝炎芯芯片等； 2）基基因功能能研究。应应用基因因芯片可可以开展展DNAA测序、基基因表达达检测、基基因突变变性、基基因功能能研究、寻寻找新基基因、单单核苷酸酸多态性性（SNNP）测测定等研研究； 3）药药物筛选选和新药药开发。采采用了基基因芯片片技术来来寻找药药物靶标标，查检检药物的的毒性或或副作用用，用芯芯片作大大规模的的筛选研研究可以以省略大大量的动动物试验验，缩短短药物筛筛选所用用时间，在在基因组组药学（ppharrmaccogeenommicss）领域域带动新新药的研研究和开开发；并并可指导导实现合合理用药药。
7、 4）环境境监测和和指导高高科技农农业等。监监测流行行病和传传染病扩扩散；监监测有害害微生物物的发生生和传播播；农、林林、牧、渔渔等产业业的品种种改良和和病虫防防治。 5）其它它。如DDNA身身份认定定等。44、细菌菌基因组组学概念念，意义义。见下下.5、慢性性乙型肝肝炎致病病机理？乙型肝肝炎病毒毒 (HHBV) 属嗜嗜肝DNNA 病病毒科 (heepaddnavviriidaee)，基基因组长长约3.2kbb ，为为部分双双链环状状DNAA。HBBV只有有32000bpp，是一一个相当当小的病病毒。其其基因组组共有四四个ORRF，编编码以下下一些蛋蛋白：CCoree蛋白和和pree-coor
8、e蛋蛋白，PPol蛋蛋白，XX蛋白，以以及S蛋蛋白（LL，M，SS）。CCoree是核衣衣壳蛋白白；Prre-ccoree现在不不知道有有何功能能，它对对病毒的的复制不不是必要要的，但但是可能能与抑制制宿主的的免疫反反应有关关；X蛋蛋白对病病毒复制制是重要要的，还还与肝癌癌的发生生有关；S蛋白白是病毒毒的包膜膜蛋白，与与病毒进进入细胞胞有关。HBV的的致病机机理尚未未完全明明了。鉴鉴于乙肝肝临床类类型可表表现为多多种多样样（如急急性肝炎炎、慢性性活动性性肝炎、慢慢性迁延延性肝炎炎、重症症肝炎及及HBssAg无无症状携携带者），因因而认为为HBVV的致病病作用一一般病毒毒不同。可可能不是是由于病
9、病毒在夺夺细胞内内增殖而而直接损损害靶细细胞，而而很可能能系通过过机体对对病毒的的免疫反反应而引引起病变变和症状状。1特异性性抗体：受乙肝肝病毒感感染后，机机体可产产生三种种抗体，抗抗HBss、抗HHBc 及抗HHBe。但但抗HBBs仅能能作用于于细胞外外的HBBV，在在预防感感染上较较重要，而而在疾病病恢复时时尚需细细胞免疫疫协同作作用。抗HHBc的的出现反反映了HHBV新新近感染染及正在在体内进进行增殖殖，因此此，它可可用为HHBV在在体内复复制的一一个指标标。抗HHbe能能使病毒毒活力降降低，可可能有保保护作用用，但机机制不一一样。2免疫复复合物的的损伤作作用：在在乙型肝肝炎病人人血循环
10、环中常可可测出HHBsAAg抗HBBs的免免疫复合合物。免免疫复合合物可引引起型变态态反应，其其中以关关节炎和和肾炎最最为常见见。3 细胞胞介导的的免疫反反应：目前认认为HBBV是非非溶细胞胞性的，即即不会增增殖裂解解被感染染的细胞胞。因此此，机体体清除乙乙肝病毒毒主要依依赖T细细胞（TTc， T杀杀伤细胞胞）或通通过抗体体介导的的K细胞胞来杀伤伤靶细胞胞，将病病毒释放放于体液液中，以以后再经经抗体作作用。实实验研究究发现，凡凡转为慢慢性肝炎炎者，一一般T细细胞数及及功能较较低下。因因此，推推测可能能乙型肝肝炎病人人T细胞胞功能强强弱与临临床过程程的轻重重和转归归有关。DDudlleuyy认为
11、，当当T细胞胞免疫功功能正常常，受病病毒感染染的肝细细胞不多多时，乙乙肝病毒毒很快被被细胞免免疫配合合体液免免疫予以以清除，这这时，由由细胞免免疫所造造成的急急性肝细细胞损伤伤可完全全恢复。如如T细胞胞免疫功功能低下下，免疫疫反应不不足以完完全破坏坏被病毒毒感染的的肝细胞胞，或亦亦不能产产生有效效的抗HHBs，或或即使抗抗HBss却无法法作用于于细胞内内的病毒毒，持续续在肝细细胞内的的病毒可可引起免免疫病理理反应而而导致慢慢性持续续性肝炎炎。如机机体对病病毒完全全缺乏细细胞免疫疫反应，既既不能有有效地清清除病毒毒，亦不不导致免免疫病理理反应，结结果出现现HBssAg 无症状状携带症症状。如如果
12、T细细胞免疫疫功能过过强，病病毒感染染的细胞胞又过多多，细胞胞免疫反反应可迅迅速引起起大量肝肝细胞坏坏死，临临床上表表现为暴暴发性肝肝炎。但但上述学学说尚未未被完全全证实，通通过进一一步的研研究，多多数人认认为细胞胞免疫和和体液免免疫相互互配合发发挥免疫疫作用。因因此，抗抗体介导导的K细细胞作用用已日益益受到重重视，并并认为是是杀伤靶靶细胞的的重要免免疫机制制。除上上述T细细胞作用用低下外外，还有有人认为为慢性活活动性肝肝炎的发发生与TT细胞抑抑制性功功能低下下，Tcc细胞或或K细胞胞的杀伤伤功能过过强有关关，从而而造成肝肝细胞持持续损伤伤。4自身免免疫反应应：HBBV感染染肝细胞胞后，一一方
13、面可可引起肝肝细胞表表面抗原原的改变变，暴露露出膜上上的肝特特异蛋白白抗原，另另一方面面可能因因HBssAg含含有与宿宿主肝细细胞蛋白白相同的的抗原，从从而诱导导机体产产生对肝肝细胞膜膜抗原成成份的自自身免疫疫反应。通通过研究究，发现现确有部部分乙肝肝病人存存在对LLSP的的特异抗抗体或细细胞免疫疫反应。一一般认为为，如病病人在病病程中出出现自身身免疫反反应，则则可加强强对肝细细胞的损损伤而发发展成为为慢性活活动性肝肝炎。正常人由由于T细细胞对自自身抗体体系统的的调控，在在清除老老化或破破坏的肝肝细胞时时，虽可可产生自自身抗体体，但并并不发生生自身免免疫性疾疾病。在在慢性肝肝炎，特特别是慢慢性
14、活动动性肝炎炎时，由由于T细细胞免疫疫机能缺缺陷，乙乙型肝炎炎抗原（包包括HBBsAgg，HBccAg及及HBeeAg）与与宿主肝肝细胞表表面或内内部的蛋蛋白质相相互作用用，形成成含自身身组织蛋蛋白的抗抗原，具具有较强强的免疫疫原性，可可引起持持续的自自身免疫疫反应；也可能能由于病病毒使机机体免疫疫系统稳稳定性发发生紊乱乱，细胞胞免疫失失去调控控，体液液免疫反反应亢进进，对宿宿主的自自身组织织产生抗抗体，发发生自身身组织免免疫反应应，引起起肝细胞胞损伤。有有人认为为，肝炎炎患者病病毒性损损伤可释释放肝特特异抗原原，使宿宿主致敏敏，并使使肝损伤伤持续存存在。因因此，自自身免疫疫反应在在慢性活活动
15、性肝肝炎发病病中具有有一定的的作用。目目前已知知在慢性性活动性性肝炎患患者常出出现某些些自身免免疫现象象，如常常伴有关关节炎炎、皮疹疹、肾小小球肾炎炎、慢性性甲状腺腺炎及干干燥综合合症等自自身免疫疫性疾病病，患者者血清中中IgGG、IggA及IIgM明明显升高高，血清清中可查查到抗平平滑肌抗抗体、抗抗核抗体体、抗线线粒体抗抗体、抗抗肝细胞胞膜特异异性脂蛋蛋白抗体体及类风风湿因子子等自身身抗体；有155300%的患患者可查查到狼疮疮细胞。5乙型肝炎与原发性肝癌：近年来，关于乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的发生之间的关系，日益受到重视。国内外资料均提示肝炎患者的肝癌发病率比自然人群高。肝癌病人有HB
16、V感染指示者也比自然人群高。Maupas等就HBV与原发性肝癌的密切关系作了以下论证：（1）乙型肝炎传染形成高度地方性的区域与原发性肝癌流行率高的地区，在地理上有相关性；（2）与HBV相关的原发性肝癌是在全世界人口中较为流行的癌症之一；（3）HBV感染可先于并经常伴随原发性肝癌的发生；（4）原发性肝癌常发生与乙型肝炎病毒有关的慢性肝炎或肝硬化的肝；（5）在原发性肝癌患者取出的组织中存在HBV的特异性DNA及抗原；（6）有些原发性肝癌细胞系已能在培养中产生HBsAg ，并已证明HBV的DNA已能整合到这些细胞的基因组中。但对上述述资料解解释仍有有不同观观点：1. HBBV能引引起致癌癌或促癌癌作用，须须配合其其它如遗遗传、内内分泌、免免疫与环环境因素素而导致致肝癌；22. 肝肝癌是与与HBVV无关的的因素引引起，但但这些癌癌细胞可可能对HHBV特特别易感感，以致致持续携携带病毒毒。6、细菌菌致病机机理：侵袭力力
