菌落总数实验报告

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1、.检验报告实验名称： 菌落总数的检验 实验方法：平板计数法 商品名称：夸夸唔、有友、奇爽、乐棒棒、香猪脆、香脆肚。参照标准：GB4789-17 2021总负责人：熊经理检验人员:X恒琴、X艳霞、游惠检验时间： 2021年7月268月6号 2021年8月8日 菌落总数的检测平板计数法一、 实验目的 为了进一步了解与熟悉我们产品的操作规X和关键点的控制，掌握菌落总数的检验方法和了解超净工作台的操作规X。二、 实验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。 1、实验仪器及设备 杀菌锅YXQLSSU 编号5090、无菌超净工作台SWCJIC 编号24、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GHP9080、

2、出厂编号13475、烘箱ZFD5040(全自动型鼓风枯燥箱、蒸馏水制备机、灭菌过的250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、培养皿、电子天平AL104、电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅HH4 出厂标号160.53。2、试验试剂及配制2.1主要试剂：琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%的酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L的盐酸。2.2药品试剂2.21琼脂：准确称取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3.0g、琼脂37.5g、蒸馏水2500ml，参加至锅中煮沸溶解，先参加琼脂将其熬化，在参加其它样品，直至样品熬化即可关掉火，冷却后调解PH值7.

3、0左右即可。酸性用氢氧化钠调节、碱性用盐酸进展调节，将在1200C高压灭菌15min即可。2.22无菌生理盐水：准确称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中。2.23无菌水：吸取1000ml的蒸馏水，将在1200C高压灭菌15min即可。2.24 1moL/L氢氧化钠：称取40g的氢氧化钠溶于1000ml的蒸馏水中在1200C高压灭菌15min即可。2.45 75%的酒精：分别吸取400ml的95%的无水乙醇和100ml的蒸馏水与500ml的容量瓶中。2.46 1moL/LDE 盐酸：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml，在1200C高压灭菌15min即可。三 试验步骤1 、样品的

4、稀释1.1固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min，或放入盛有225 ml 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10 的样品匀液。1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 ml样品置盛有225 ml 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。36 1 48 h2 h.2、 检样与接种：25 g(ml)样品+225 ml稀释液，均质，10 倍系列稀释选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各

5、取1 ml 分别参加无菌培养皿内。2.1 用1 ml 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 ml，沿管壁缓慢注于盛有9 ml 稀释液的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面，振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 2.2.按上述操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 ml无菌吸管或吸头。 12.2. 根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液液体样品可包括原液，在进展10 倍递增稀释时，吸取1 ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 ml空白稀释液参加两个无菌平皿

6、内作空白对照。 3、倒平板：在酒精灯开着的条件下进展到培养皿的3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在46即可倒入琼脂，不然会影响其细菌的生长繁殖。平板计数琼脂培养基，混匀.4、培养：待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h。水产品30 1 培养72 h3 h。如果样品中可能含有在琼脂培养基外表弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂外表覆盖一薄层琼脂培养基约4 ml，凝固后翻转平板， 5、报 告 6.菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位colony-forming units，CFU表示。6. 1 选取菌落数在30 CF

7、U300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6. 2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，那么不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；假设片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。6. 3 当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，那么将每条单链作为一个菌落计数。7 结果与报告7.1 菌落总数的计算方法7.1.1 假设只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均

8、值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。7.1.2 假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数X围内时，按公式1计算： N=C/(N1+0.1n2)d 1式中：N样品中菌落数；C平板含适宜X围菌落数的平板菌落数之和；n1第一稀释度低稀释倍数平板个数；n2第二稀释度高稀释倍数平板个数；d稀释因子第一稀释度。上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5104。7.1.3 假设所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，那么对稀释度最高的平板进展计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4 假设所有稀释度的平板菌落数均小于30

9、 CFU，那么应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 假设所有稀释度包括液体样品原液平板均无菌落生长，那么以小于1 乘以最低稀释倍数计算。7.1.6 假设所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU 之间，其中一局部小于30 CFU 或大于300CFU 时，那么以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.2 菌落总数的报告7.2.1 菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入原那么修约，以整数报告。7.2.2 菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入原那么修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数

10、形式来表示，按“四舍五入原那么修约后，采用两位有效数字。7.2.3 假设所有平板上为蔓延菌落而无法计数，那么报告菌落蔓延。7.2.4 假设空白对照上有菌落生长，那么此次检测结果无效。7.2.5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。四、 数据处理及结果计算一、 乐棒棒菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1细菌菌落数2细菌菌落数3细菌菌落数100373938100058010000000假设只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。所以： N=37+38+39/310 N

11、=380个/g二、 奇爽菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白123100267281295100044342910000406假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数X围内时，按公式1计算： N=C/(N1+0.1n2)d 1式中：N样品中菌落数；C平板含适宜X围菌落数的平板菌落数之和；n1第一稀释度低稀释倍数平板个数；n2第二稀释度高稀释倍数平板个数；d稀释因子第一稀释度。 N=267+281+295+44+34+29/(3+0.1310 N=2879个/g三、 香猪脆菌落总数的数据分析结果1稀释倍数平板个数空白123100576034100012感杂410000001假设只有一个稀释度

12、平板上的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。 所以： N=57+60+34/310 N= 503个/g结果2稀释倍数平板个数空白123100576034100012感杂410000001假设只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。 所以： N=36+35+12/310 N=243个/g四、 夸夸唔菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白12310045233665010005311884100001587假设只有一个稀释度平板上

13、的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。所以： N=53+118+84/3100 N= 8500五、 有友菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1231001721000感杂感杂010000000只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数X围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每gml样品中菌落总数结果。所以： N=1+7+3/310 N=33个/g六、 香脆肚菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白123100131444376100015812113610000434755假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数X围内时，按公式1计算： N=C/(N1+0.1n2)d 1式中：N样品中菌落数；C平板含适宜X围菌落数的平板菌落数之和；n1第一稀释度低稀释倍数平板个数；n2第二稀释度高稀释倍数平板个数；d稀释因子第一稀释度。 N=158+121+136+43+47+55/【3+0.13】10-1 N=16969五、 数据分析。 通过一系列的实验论证说明：自己的贴牌产品的菌落总数含量较高，而其中香脆肚的菌落总数