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1、总氮量的测定微量凯氏定氮法（Kjeldahl）适用范围：0.2-1.0mg氮1. 仪器设备烘箱、剪刀、微型植物粉碎机、封口袋若干、微量凯氏定氮仪、凯氏烧瓶（50ML）、容量瓶（50ML）、锥形瓶（50ML）、滴定管（5ML）、吸量管（5ML 和2ML）、量筒、表面皿、消化架和蒸馏装置等。（生物化学实验指导、北京 大学生物系生物化学教研室编、人民教育出版社、1964, 53）2. 试剂准备长条硫酸纸、蒸馏水、硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸、过氧化氢、2%硼酸溶液、 0.2%甲基红酒精溶液、0.1%次甲基蓝酒精溶液3. 操作方法3.1制十粉植物材料洗涤后，十之，置100150C下烘干30min后杀死，再放
2、在70 80C下烘干3H,磨细，以0.9毫米孔筛筛后放入封口袋中，标号备用。3.2消化a. 首先以减重法准确称取0.2g样品并测定其含水量b. 然后称取0.2g样品以长条硫酸纸放入凯氏烧瓶底部，用滴管加入几 滴蒸馏水以湿润样品c. 加入0.2g硫酸铜-硫酸钾混合催化剂（K2SO4:CUSO4 - 5H2O按5： 1混 合）d. 再徐徐加入5ML硫酸e. 另取凯氏烧瓶不加样品以测定试剂中微量氮作为比照f. 之后均放在消化架上，转放入通风厨内，用小火加热煮沸，瓶内水气 蒸完时，硫酸开始分解入出SO3的烟后，调节火焰保持瓶内液体轻轻 沸腾，继续消化。1如消化6h后溶液仍呈黄色，可取下烧瓶，冷却后加3
3、0%的H2O2, 继续用小火加热，直至消化液透明无色或呈淡蓝色为止。2如呈黄色，则表示消化尚不完全。在消化过程中要时时转动烧瓶，使样品始终在浓硫酸的回流中。g. 消化结束后，关闭火焰，取下烧瓶，冷却全室温，将消化液移入50ML 容量瓶中，用少量蒸馏水洗涤3次，将洗涤液并入容量瓶中，并定容。3.3蒸馏a. 取50ML锥形瓶，以蒸馏水洗涤23min，冷后，加入约5ML2%硼酸 溶液及4滴（约0.05ML）混合指示剂（0.2%甲基红酒精溶液与0.1% 次甲基蓝酒精溶液以2： 1混合），溶液呈棕紫色，用表面皿覆盖后以 备吸氨用。b. 将预先放有几滴经过硫酸化过的蒸馏水的蒸汽发生器煮沸，关闭夹 子，使蒸
4、汽通过反应器，由冷凝管下端逸出。冷凝管下端放一空烧杯 以承接凝聚的水滴。这样以蒸汽洗涤冷凝器约10min后，在冷凝器下 端放一盛有硼酸溶液的锥形瓶，其位置应倾斜。冷凝器顶端应完全浸 没在液体内。继续以蒸汽洗涤12min。观察锥形瓶内溶液是否变色， 如不变色，则说明整流器内部是干净的。c. 向下移动锥形瓶使硼酸液面离开冷凝管口约1CM，继续通蒸汽1min. 最后用水冲洗冷凝管外口，减小火焰。打开夹子（掌握夹子或玻璃塞 很重要，若不紧，刚有氨逸出而影响测定的准确性。在加样品时，一 定要打开夹子，而且要在蒸汽发生后才能关闭，否则就会发生样品倒 吸现象。）将消化液移入蒸馏器反应室内。用水冲洗凯氏瓶3次
5、（每 次用2ML），将洗涤液倾入反应室。塞紧反应室上的棒状玻璃塞。d. 另取一盛有硼酸溶液的锥形瓶，放在冷凝管下，使冷凝管完全浸没在 液体内。取约10ML30%的NaOH溶液放入小烧杯，轻提反应室上的玻 璃塞，使之慢慢流入反应室。在未完全流入时，应将玻璃塞盖紧，向 玻璃杯中加入约3ML的蒸馏水，再轻提反应室上的玻璃棒，使一半蒸 馏水流入反应室，一半流在玻璃杯中作水封。e. 用煤气灯将水气发生器加热，沸腾后，夹紧夹子，开始蒸馏。锥形瓶 中硼酸溶液由棕紫色变成蓝绿色。自变色时记时，蒸馏约35min. 移动锥形瓶使硼酸溶液面离开冷凝管约1CM，并用少量蒸馏水洗涤冷 凝管口外面，继续蒸馏1min，挪开
6、锥形瓶，用表面皿覆盖锥形瓶。最 后松开夹子，移去煤气灯。f. 蒸馏结束后，为了洗涤反应室，拧紧夹子，一手捏紧橡皮塞，一手轻 提棒状玻璃塞，使冷凝水迅速流入反应室。用反应室外壳内蒸汽冷缩， 反应室中残渣自动吸入反应室外壳，塞住玻璃塞，取约20ML蒸馏水 加入小玻璃杯中，启开玻璃塞，冷水再次由小玻璃杯流入反应室，又 自动吸出。如此冲洗34次，将夹子拧开，排除反应室外壳中积水。 关闭塞子，再使蒸汽通过全套蒸馏仪数分钟后，继续下一个蒸馏。3.4滴定全部蒸馏完毕后，以0.01mol/L HCl滴定各锥形瓶中收集的氨，直至硼 酸溶液出现淡紫色（即滴定终点）为止（蒸馏和滴定时空气中不能有酸 性蒸汽）。4结论按下面公式计算样品中的总氮量：样品中的总氮量 氮）=（A-B）*m*14/（W*1000）*100式中：A-为滴定样品用去的盐酸毫升数B-为滴定空白用去的盐酸毫升数m-标准盐酸的mol数14-为氮的原子量W一为加样重量5注意事项在蒸馏样品和空白对照之前，必须取2ML标准硫酸铵溶液（0.3mg氮/ml）代 替样品，作硫酸铵溶液中氮的回收率测定。以2ML配置硫酸铵的蒸馏水为空白对 照。回收率误差不得超过982%.
