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1、报告成绩实时记录成绩实验四 细胞计数和大小测量学生姓名学号班级座位号： 同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）电子计数仪的原理：细胞和悬浮介质之间的电反差，是通过光电方法获得的反差的10 倍，通 过所产生的电压脉冲可非常容易地对流经小孔的悬浮液中的细胞进行准确计数。在新的计数器中，让单 个细胞穿过悬浮液中一个小的狭窄电流通路，然后检测细胞和悬浮液各自导电性的差别。在通过液体中 小的电流路径时，单个血细胞改变了电路中的电阻，使得穿过电流通路后电压的下降发生了变化。这样 就可以记录细胞数目。（2）细胞计数板的原理：细胞计数板亦称血球计数板，是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成
2、 的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边 上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计 数用，四角的大方格供真核细胞计数用。【Materials & methods 实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号 笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯。实验材料：四膜虫培养液（500p I）；4%甲醛溶液（200I）。其他：Motic校准片；血球计数板；配套标本片；棉球（浸泡洗洁精）。实验操作：1四膜虫细胞计数：准备洁净的血球计数板一吸取200山
3、四膜虫培养液一加到200山甲醛溶液离心管一混匀一干燥一两 个计数池分别滴上10山混合液一盖玻片一4倍镜找到计数板网格一 10倍镜观察一计数每个计数池4个 角上大格中的细胞数一用棉球清洁网格线一重复干燥后的步骤，共计数3 次。2细胞大小测量：（1）校准：用motic校准片和Motic数码互动系统来进行校准，注意对应相应的镜头。（2）测量：在相应镜头下观察待测标本，用Motic数码互动系统的“线段”来测量细胞大小。【 Results】数据记录请见附录。1四膜虫细胞计数计算得到四角大格细胞平均数为26 个，则原液中四膜虫密度=细胞个数/ 1mL=4个大方格细胞总数/ 4 X10000 X稀释倍数=2
4、6宁 4X10000X2 = 1.3X105（个/mL）2细胞大小测量在10倍镜下观察可以看到：四膜虫无染色时呈无色透明的椭圆形。平均长55.52微米，宽22.48 微米。在40倍镜下观察可以看到：红细胞染红色，圆形无细胞核；淋巴细胞有细胞核，染深紫色，大小与 红细胞差不多；嗜中性粒细胞有核分页，细胞核染深紫色，比红细胞大。细胞大小测量得：红细胞平均直径7.33微米。淋巴细胞平均直径8.00微米。嗜中性粒细 胞平均直径11.45微米。【Discussion】1. 讨论实验中进行细胞计数的注意事项。答：首先每一次观测之前，血球计数板都要清洗干净，在显微镜下确认没有杂质并且充分 干燥以后再加混合液
5、；每次吸取四膜虫混合液之前都要摇匀，防止四膜虫在管底沉淀；盖盖玻片时 不能产生气泡，会影响观测；在数细胞时要用弓形计数的方法，每一小格计左和上，不计右和下，防止 多算和漏算。12. 对该实验有何意见或建议？答：盖玻片太脏了，有很多划痕，而且网格线比较浅，所以很影响观测。【Questions】1. 分析用细胞计数板对细胞计数时的误差来源。答：首先，我认为最大的误差发生在盖上盖玻片的时候。因为要防止产生气泡，所以盖玻片是倾斜 着缓慢盖上的，导致事先滴在计数池上的混合液被不均匀挤压，会造成一边四膜虫数量多，另一边四膜 虫数量少。如果采用毛细的方法，先盖盖玻片再吸混合液，可能会减少的误差。其次，在吸取
6、四膜虫混 合液时没有混匀也会造成浓度不一致。以上是技术误差，另外还有血球计数板的仪器误差，以及细胞分 布不均匀等因素带来的分布误差。分布误差可以通过多次的重复实验采用平均值的方法来缩小。2 【References】1沈萍等.微生物学实验（第三版） . 高等教育出版社2004年2月2 h卄p:/210.38.57.228/151/re/xyjy/shcwart.asp?art_id=119实验四 细胞计数和大小测量学生姓名学号班级座位号： 同组同学日期：年月日【Real-time Record】流程一、四膜虫细胞计数备注1取板将洁净的血球计数板置水平台面，把专用盖片在上面放 好、放正。2固定吸取
7、200山四膜虫培养液，加到装有200山甲醛溶液离 心管中，混匀。3上样吸取50山样品液置于盖玻片的边缘，使其在毛细作用下 自然地吸入盖片与计数板之间的缝隙。在两侧的计数池 中都加上样。多余的液体用吸水纸吸取。避免产生气泡。 稍待片刻，使细胞全部沉降到血球计数室内。4计数将血球计数板置于载物台上，打开显微镜光源，将孔径 光栏调至最小，在4倍镜下先找到计数板上的网格，然 后换10倍镜观察。分别计数计数板4个角上大格中的 细胞数，总和为S,重复3次。5清洁弃盖玻片f用自来水对着网格线处冲洗f用棉球或纱布 蘸洗洁精清洁网格线，切勿用硬物洗刷一用自来水冲洗 多次f晾干或用乙醇等有机溶剂脱水使其干燥。干后
8、通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀 物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。、细胞计数(四膜虫稀释倍数：)四角大格细胞个数1234总和s 15678总和s 2大格总和平均值次数1次数2次数3原液中四膜虫密度=细胞个数/ 1mL=4个大方格细胞总数/ 4 X 10000X稀释倍数流程二、细胞大小测量（以10倍镜为例）备注1校准将motic校准片直于载物台上，以0.6mm黑点对准通光 孑L,物镜调至10倍镜下，调节旋钮至电脑屏幕上出现 边缘清晰的黑色圆点。点击工具栏上“动态测量”在屏幕左侧出现工作框。在 “校准”下选择圆直径600,物镜倍数10X，然后点击 “校准”框。2取下校准片，换上
9、待测标本。在10倍镜下调节清楚后， 以动态测量工具中选择适当的工具，在屏幕上点击，便 可测定细胞的直径或面积等数据。3如在10倍镜下重新测量，选择工具栏中“清除全部项”， 便可重新进行测量。若40倍镜下测量，应选择校准片中0.15mm的小黑点进 行校准。其他步骤如10倍镜操作。4测量 在一干净载玻片滴10微升四膜虫和4%甲醛溶液的混 合液（吸液前混匀），涂布开，加盖玻片。在10倍镜下 选10个四膜虫细胞，测量其长宽，并计算其平均值。 观察人血涂片，40倍镜下，任选20个红细胞，测量 其直径，并计算出平均值。 40倍镜下，选择不冋类型的白细胞，测量直径，比较 其大小。细胞生物学实验 2014-2015（1）
