在体小肠吸收实验

《在体小肠吸收实验》由会员分享，可在线阅读，更多相关《在体小肠吸收实验（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、在体小肠吸收实验【实验目的】1. 掌握大鼠在体肠管泵循环法研究吸收的试验方法。2. 掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数(ka)和吸收半衰期(t1/2(a)的方法。【实验原理】研究药物消化管吸收试验方法，大致可分为体外试验法、在体试验法和体内 试验法等。在体试验法不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走， 能避免胃内容物排出及消化管固有运动等的生理影响，对溶解药物是一种较好的 研究吸收的试验方法。但本法只限于溶解状态药物，并有可能将其它因素引起的 药物浓度的变化误作为吸收。消化管吸收药物主要方式是被动扩散。药物服用后，胃肠液中高浓度的药物 向低浓度的细胞内透过，又以相似的方式扩散转

2、运到血液中。这种形式的吸收不 消耗能量，其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：些=DKSbdth式中D为药物在膜内的扩散系数；k为药物在膜/水溶液中的分配系数；C为消化 管内药物浓度；Cb为血液中药物浓度；h为膜的厚度。令 Dk=P，P 为透过常数 一般药物进入循环系统后立即转运全身，故药物在吸收部位循环液中的浓度相当 低，与胃肠液中药物浓度相比，可忽略不计。若设PS/h=k式(1)可简化为:dQ _dtPS-C = kch式(2)说明药物透过速度属于表观一级速度过程。以消化液中药物量的变化率dx/dt 表示透过速度，则魏=K Xdt alnX = In/ Kt0 a以小肠内剩余的药

3、量的对数lnX对取样时间t作图，可得一直线，从直线的斜率 可求得吸收速度常数ka，其吸收半衰期t1/2 (a)为：% = .693久小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能 用直接测定药物浓度的方法计算剩余药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中 加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试 液的体积，再根据测定药物的浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被 吸收的药量。【实验内容与操作】1. 试剂的配制(1)0.1%NaNO2溶液：称取NaN02 0.1g置100ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇 匀。(2) 0.5%氨基磺酸铵(NH2S

4、O3NH4)溶液：称取氨基磺酸铵0.5g置100ml容量 瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。(3) 0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液：称取二盐酸萘基乙二胺0.1g于100ml容量瓶 中，加乙醇适量溶解，并用乙醇定容，摇匀。(以上试剂配好后冰箱保存)(4) 1mol/L 盐酸：取浓盐酸 9ml 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。(5) 0.2mol/L NaOH：称取NaOH0.8g,加蒸馏水适量溶解后，转移至100ml容量 瓶内定容。(6) 生理盐水：称取 NaCl 0.9g 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀。(7) Krebs-R in ger 试剂(pH7.4)：称取 NaCI

5、 7.8g, KCl 0.35g，CaCl2 0.37g, NaHCO3 1.37g, NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖 1.4g，加蒸馏水适量使成 1000ml。(8) 1%戊巴比妥钠液：称取戊巴比妥钠 1g 置 100ml 容量瓶中，加蒸馏水定容， 摇匀(10mg/ml)。2. 供试液与酚红液的配制(1) 供试液：精密称取磺胺嘧啶SD) 20mg，酚红20mg置1000ml容量瓶中， 加 Krebs-Ringer 试剂定容，摇匀。(2) 酚红液：精密称取酚红 20mg 置 1000ml 容量瓶中，加 Krebs-Ringer 试剂定 容，摇匀。3. 循环实验的操作

6、(1) 蠕动泵流速的调节：插上专用电源线，按下电源开关，选择所需工作的方 向；按动快、慢档开关，调节流速为 5ml/min 和 2.5ml/min。(2) 恒温水浴调节：将水浴温度调节为370.5C。(3) 供试液的准备：取7580ml供试液加入循环装置的烧瓶中，见图3-1-1， 将烧杯置恒温水浴中预热至 370.5C。(4) 生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37C备用。(5) 大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为 200g 的雄性大鼠一只，按 40mg/kg 体重腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，并固定于固定台上。(6) 小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔(约3cm)，在十二指肠上部和回 肠下

7、部各切一小口，插入直径约 0.3cm 的玻璃管，并用线扎紧。(7) 肠管洗涤：用注射器将37C的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至 净。(8) 作成回路：将肠管两端的玻璃管按图 3-1-1 所示与胶管连接，作成回路，开 动蠕动泵，其流速为 5ml/min。(9) 取样：以5ml/min流速循环10min后，将流速调节为2.5ml/min，立即自供 试液烧瓶中取样两份(1ml和0.5ml各一份)，分别作为SD和酚红零时间样品， 另向烧瓶中补加酚红液2ml，其后每隔15min按同法取样及补加酚红液，共取样 9 次，停止循环。4. 含量测定(1)标准曲线的制作1) SD的标准曲线：吸取供试液2、

8、4、6、8、10ml分别置10ml容量瓶中，加蒸 馏水定容，再各吸取上液1ml置10ml带塞试管中，加入1mol/L盐酸5ml，摇匀， 加0.1%NaNO2溶液1ml，摇匀，放置3min，加0.5%氨基磺酸铵(NH2SO3NH4) 溶液1 ml，摇匀，放置3min，再加0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液2 ml，摇匀，放 置20min。照分光光度法在550nm的波长处测定吸收度。以吸收度对浓度回归， 得到SD标准曲线方程。2）酚红的标准曲线：精密称取酚红约25mg置250ml容量瓶中，加蒸馏水定容， 再吸取上液1、2、3、4、5、6ml置10ml容量瓶中，加蒸馏水定容，再分别吸取 0.5ml置10m

9、l带塞试管中，加0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀。照分光光度法在555nm 的波长处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到酚红标准曲线方程。（2）样品测定1）SD的测定：取样品1ml置10ml带塞试管中，加入1mol/L盐酸5ml，摇匀， 以下步骤按SD标准曲线项下操作，在550nm的波长处测定吸收度。2）酚红的测定：取样品0.5ml置10ml带塞试管中，加入0.2mol/L NaOH 5ml，摇 匀，在 555nm 的波长处测定吸收度。5. 操作注意（1）在大鼠麻醉前应作好一切准备工作。如手术器械、水浴温度的调节，试药 配制并放在近处，蠕动泵流速调节等。如果蠕动泵上并未标出流速，可用量

10、筒接 流出液（蒸馏水）的方式确定流速。（2）由于小肠很细，小肠两端插上玻璃管后再洗涤非常容易堵塞，防止的方法 是先将十二指肠端插上玻璃管，回肠端找好后先用线扎紧（为以后找切口位置）， 然后在扎线处切个小口。生理盐水（37C ）从十二指肠端插管处注入，洗涤内容 物至净，再在回肠端切口处插上玻璃管。（3）插玻璃管时应注意方向，在十二指肠端向下插，回肠端向上插，以构成回 路。（4）SD 的测定中，加入氨基磺酸铵后要充分振摇至无气泡发生。（5）SD 比色测定空白液的制法：取酚红液 1ml 置 10ml 带塞试管中，加 1mol/L HCl 5ml，摇匀，以下操作按SD标准曲线制作。（6）酚红比色测定的

11、空白液为0.2mol/L NaOH。【实验结果与讨论】1. 分别写出SD和酚红的标准曲线回归方程和相关系数。SD 标准曲线：y=0.0210x-0.0332 （RA2=0.9981）酚红标准曲线:y=0.0153x-0.0082 （RA2=0.9973）2. SD和酚红样品浓度的计算 根据SD和酚红的标准曲线方程，分别计算出不同 时间SD和酚红样品的浓度，并填于下表。表1.SD大鼠在体肠吸收实验数据表取样时间 SD吸光度浓度（ug/mL）酚红吸光度浓度（ug/mL）供试液体积/mL剩余药量/mglnX循环前/20.0/20.080.01.600.47000.37819.60.34522.072

12、.71.420.353150.33717.60.33821.674.61.340.295300.31516.60.35022.372.31.250.227450.30015.90.34922.372.81.240.211600.28915.30.35622.771.61.200.185750.26514.20.35022.373.10.1533.不同时间SD剩余量的计算 按上表中公式计算出不同时间的剩余药量，并求得剩余药量的对数值。如上图所示4. ka和t1/2 （a）的计算 以剩余药量的对数对相应的时间作图，可得一条直线, 由直线的斜率求出ka，并计算得t1/2 （a）。图1.SD大鼠在体肠

13、吸收InX-t曲线0.4000.350 *0.300y = -0.0026X + 0.3334R2 = 0.94490.2500.2000.1500.1000.0500.0001020304050607080时间/minKa=0.0026t1/2=0.693/Ka=266.54 min5. 每小时吸收率计算每小时吸收率（）=（零时间剩余药量-1h的剩余药量）/零时间剩余药量*100%=15.49%思考题】1. 在体吸收试验法的特点是什么？在体试验法不切断血管和神经,药物透过上皮细胞后即被血液运走,能避免胃 内容物排出及消化管固有运动等的生理影响,对溶解药物是一种较好的研究吸收 的试验方法.但本法只限于溶解状态药物,并有可能将其它因素引起的药物浓度的 变化误作为吸收。2. 影响试验结果的主要因素有哪些？肠管回路的连接状况，流动液的温度，大鼠的麻醉情况，SD和酚红的标准 曲线的制作，整个实验过程中取样和补液的精密程度等等。3. 供试液中为什么要加酚红？小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故 不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试 液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间 供试液的体积，再根据测定药物的浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量 或被吸收的药量。