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1、饲料中粗蛋白测定方法1、 原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下， 用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。2、试剂2.1 硫酸（ GB 625）：化学纯，含量为98，无氮。2.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5 个结晶水（GB 665），6g 硫酸钾（HG 3920）或硫酸钠（ HG 3908），均为化学纯，磨碎混匀。2.3 氢氧化钠（ GB 629）：化学纯， 40水溶液（ m/V ）。2.4 硼酸（ GB 628）：化学纯， 2水溶液（ m/V ）。2.5 混合指示剂：甲
2、基红（HG 3 958）0.1乙醇溶液，溴甲酚绿（ HG 3 1220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601 制备。盐酸标准溶液： c（HCl）=0.1mol/L 。8.3mL 盐酸（ GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。盐酸标准溶液： c（HCl）=0.02mol/L 。1.67mL 盐酸（ GB 622，分析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。2.7 蔗糖（ HG 31001）：分析纯。2.8 硫酸铵（ GB 1396）：分析纯，干燥。2.9 硼酸吸收液： 1硼酸水溶液 1 000mL，加入
3、 0.1溴甲酚绿乙醇溶液 10mL，0.1甲基红乙醇溶液 7mL，4氢氧化钠水溶液 0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用） 。3、 仪器设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。3.2 分样筛：孔径 0.45mm（40 目）。3.3 分析天平：感量0.0001g。3.4 消煮炉或电炉。3.5 滴定管：酸式， 10、25mL。3.6 凯氏烧瓶： 250mL。3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。3.8 锥形瓶： 150、250mL。3.9 容量瓶： 100mL。3.10 消煮管： 250mL。3.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。4、 试样的选取和制备选取具有代表性的
4、试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40 目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。5 分析步骤试样的消煮称取试样 0.51g（含氮量 5 80mg）准确至 0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入 6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入 12mL 硫酸和 2 粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360410）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少 2h。氨的蒸馏：将试样消煮液冷却，加入20mL 蒸馏水，转入 100mL 容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL 硼酸吸收液和 2
5、 滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。 准确移取试样分解液1020mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL 氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min 降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。蒸馏步骤的检验精确称取 0.2g 硫酸铵，代替试样，按步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。滴定用
6、或法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L（）盐酸标准溶液滴定， 溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。6 、空白测定称取蔗糖 0.5g，代替试样，按第 5 章进行空白测定，消耗 0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL。消耗 0.02mol/L 盐酸标准溶液体积不得超过 0.3mL。7、 分析结果的表述7.1 计算见下式：粗蛋白质（） =（V2-V1）c0.01406.25/（mV/V ） 100式中： V2 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V1 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；c 盐酸标准溶液浓度， mol/L ；m 试样质量， g；V 试样分解液总体积， mL；V 试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140 与 1.00mL 盐酸标准溶液 c（ HCl）=1.000mol/L 相当的、以克表示的氮的质量。6.25 氮换算成蛋白质的平均系数。7.2 重复性每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。当粗蛋白质含量在25以上时，允许相对偏差为1。当粗蛋白含量在10 25之间时，允许相对偏差为2。当粗蛋白质含量在10以下时，允许相对偏差为3。此文档可自行编辑修改，如有侵权请告知删除，感谢您的支持，我们会努力把内容做得更好
