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1、血液成分的制备中国输血协会常务理事广东省输血协会副会长广东省医学会临床输血分会主任委员广州血液中心主任医师江朝富血液成分制备的概述血液成分制备的原理 血液成分制备的方法 血液成分的病毒灭活 血液成分制备的质量控制总结一、血液成分制备的概述1、血液成分的概念：血液成分(Bloodcomponent)是用物理的或化学的方法把全血分离制备成各种较浓和较纯血液制品。血液成分包括血液细胞成分和血浆成分。血液细胞成分有红细胞、白细胞、血小板；血浆成分有白蛋白、免疫球蛋白以及其他凝血因子。美国TextbookofBloodBankingandTransfusionMedicine对成分定义：成分是由血液制备
2、的。成分一般分为细胞制品和血浆制品。ISBT在2008年6月出版的IntroductiontoBloodTransfusionTechnology指出：全血可以制备成各种成分。每种成分可以在理想的条件下保存，并最有效地用于病人的治疗。(p148)2、血液成分制备的简史(1)血浆的制备：1927年Strumin和McGraw提出用抗)疑全血离心分出上层血浆，以后Flosdort和Mudd提出将血浆冷冻，除去水分，制成干粉，用时溶解，这就解决了血浆贮存和运输问题。第二次世界大战期间，美国制备大量冰冻干血浆供应欧洲战区；(2)血液细胞成分的试用：1902年Hedon开始进行动物红细胞输注试验。193
3、4年Strumia尝试分离白细胞，但没有成功。1935年Castellanos尝试应用红细胞。1951年Dillard等试用血小板输注，但没有成功。1960年Frereich等收集慢性白血病患者的粒细胞进行输注获得成功。1965年Cohen成功进行了ACD血小板输注。(3)血浆乙醇分离法的创立：1943年Cohn成功地建立了低温乙醇法分离血浆蛋白组分的方法，开创了白蛋白和其他血浆蛋白成分的生产新纪元。1964-1965年间Pool发现了冷沉淀的应用价值。(4)血浆单采和置换术：1902年Hedon首先作了血浆置换术的动物试验。1909年Fleig首先为一例尿毒症患者进行血液体外清洗，然后再回输
4、。1914年Abel在为双肾切险的狗进行血浆置换术的文章中首先使用“血浆单采术(plasmapheresis)”.1952年Adams等人使用血浆置换术治疗高粘滞血症。同年第一台初级血液细胞分离机问世。1965年美国研制出第一台连续性流动离心式血细胞分离机。(5)成分输血的发展：成分输血是1959年Gibson首先提出，但到上世纪的60年代末和70年代初成分输血才真正发展起来。目前在我国各地成分输血的比例都达到90%以上。除用手工法分离成分血外，血液成分分离机几经改进，使血液成分分离技术达到一个新水平。血液制品的生产也成为我国制药工业的一部分。(6)成分输血的目的：现代输血医学证明，病人输血的
5、目的，仅仅需要进行成分输血。成分治疗也是最大的利用一个献血者；由一个献血者献出的成分有益于多个病人。3、血液成分的制备方法(1)物理方法：一是手工法：用多联袋采集全血，通过血液低温离心机离心后，将血液的不同成分分离出来；二是单采机法：直接用血细胞分离机采集各种成分。(2)化学方法：低温乙醇法：1946年由Cohn和他的同事发明的，经过儿十年的完善与发展，现被全世界血液制品企业采用；硫酸镂盐析法和利凡诺沉淀法：由于产品质量的安全性和稳定性不好，现已被淘汰；聚乙二醇沉淀法和层析法：通常和低温乙醇法联合应用，不断提高血液制品的质量和安全。目前，在血浆蛋白分离方面应用较多的有离子交换层析、凝胶过滤和亲
6、和层析法。全层析法具有分离条件温和、能很好保持蛋白质天然性质，产品纯度高、收获率高、分辨力高、有利于分离多种血浆蛋白成分。二、血液成分制备的原理无菌系统；血袋系统；离心原理；血液分离设备；1、血液抗凝剂的应用，防止血液被凝固和红细胞被破坏。1914年由Hustin发现，并于1918年用枸椽酸钠保存血液。经过几十年的研究，已有许多血液保存液配方被广泛应用（表1）。由于有抗凝剂的作用，红细胞等血液成分便可以进行离心分离。表1各种血液保存液配方成分保存液无水葡萄糖g/L枸椽酸钠g/L枸檬酸磷酸二氢钠g/L腺喋吟mg/L血天ACD-A24.522.08.015021ACD-B14.713.24.425
7、021CPD25.526.33.272.2214021CPD-125.526.33.272.2217314035血*:指1升保存液可以保存的血液。即ml/L.2、应用塑料联袋采集血液，使血液成分可以在密闭无菌的条件下进行分离。血袋依照用途不同，可分为单联袋、二联袋、三联袋、四联袋以及双二联袋等。这些是用三通管并联起来，其规格分为采血200400ml不等。另一种是上下串联起来的多联袋，称为底顶式血袋。在我国很少使用。3、根据血液成分的不同比重，选择不同的相对离心力进行离心，分离出不同的成分最早的持续性离心装置是在1877年瑞典医生Carl研究的手柄式乳烙分离器，1881年在美国获得专利。后来，运
8、用这种原理制造的离心机用于石油工业清除不纯的润滑油中的颗粒；在核燃料工业中处理铀同仓素市的固体和液体废物。1950年美国科学家Cohn在哈佛大学首先发明了持续性血液分离机分离血液成分。这些装置都是根据不同成分的密度来设置的。血液不同成分的比重见（表2）o表2血液成分的比重（g/ml）成分比重成分比重全血1.05血浆1.027红细胞（平均）1.096老年红细胞1.110网织红细胞 血小板 淋巴细胞 中性粒细胞1.071.0401.0551.0904、血液细胞分离机的原理早在第二次世界大战时期，因战伤需要大量的血浆救助伤员，GoTui首先提出，用单独采集人的血浆的办法，可获得大量的血浆；直到上世纪
9、60年代，血细胞分离机诞生，使安全单采各种血液成分变得现实。(1)断续流动离心式血细胞分离机：该类型的血细胞分离机运转期间由血泵顺时针控制，先采血，血液进入离心林内，经离心力祚用分离，杯底部位沉积的是比重最大的红细胞，其他血液成分依比重不同由远心端向中心排列。在分离杯的肩部有光感探测器，由电脑控制,自动开启收集各种血液成分的通道，使需要的单一成分流入采集袋内。一般常用的分离杯225毫升，当红细胞充满离心杯后，血泵逆时针运转，将其他血液成分经原采血针回输给献血者。一般每个循环能处理450550毫升全血。(2)连续流动式血细胞分离机：该类离心机的血液采集与收集的动力由全血ACD泵和血浆泵控制，离心
10、机装有内外两套转子。启动离心时内、外转子以不同的速度运转，内转子的转速是外转子的两倍，由于内、外转子的旋转速度不同，使同一条多腔管路在固定两端的情况下，高速运转而不发生缠绕扭曲，保持正常旋转。(3)膜滤式血浆分离机：高分子膜材料具有筛孔的功能，能筛分颗粒大小不同的物质，血液中较大的颗粒为血细胞部分，较小的颗粒为血浆蛋白部分，通过筛孔的为血浆蛋白部分，以此使血液不同成分分离。膜滤器一般由膜孔径0.5微米的中空纤维束组合而成，当全血在一定压力下流经膜滤器时，血浆部分由中空纤维的内腔穿越过膜孔，进入中空纤维膜的外侧（低压侧）而后被收集，未能穿越过膜孔的血细胞部分沿中空纤维内腔汇集于导管内，直接与置换
11、液混合U输给献血者。(4)吸附式血浆分离机：该类机具有特异性吸附柱。吸附剂单克隆抗体、葡萄菌蛋白A(SPA)、血型物质、DNA火棉蚀等，通过交链剂与适当的树脂形成共价键结合物或与IgG相连，制备成无菌的特异性或选择性吸附柱。当患者血液流经此柱时，可以吸附病理性抗体、蛋白质抗原和加疫复合物，经净化的血液则回输给患者。CHAPTERNINEComponentPreparation，手工法血液成分的制备手工法制备血液成分主要是用单袋或多联袋采集血液，置于大容量冷冻离心机内离心，在无菌条件下进行分浆，获得不同的成分。不同的血液成分离心时，要通过相对离心力（g）和离心机半径（cm）（从离心机中轴点到离心
12、筒内底部的距离）换算出每分钟离心转数。离心机的每分钟转数，离心时间直接影响各种成分的分离效果，必须定期给后校正。Step1WholeBloodisinBagA(primarybag).BagB(plateletbag)andBagC(plasmabag)aretermed“satellitebags/Step2Bagsarespunincentrifuge,separatingcomponentswithinprimarybag.Platelet-richplasmarisestothetop;redbloodcellsmovetothebottom.Step3Plateler-richpla
13、sma(PRP)isforcedintoBagB;redbloodcells(RBC)remaininthebottomofBagA.BagAisseparatedfromBagsBandCRedbloodcellsarestoredat4to60c.Step4Bagsarespunagain,longerandharderthaninitialspin.PlasmaandplateletsareseparatedinBagB.Plasmarisestothetop;plateletsmovetothebottom.PLASMAStep5PlasmaisforcedintoBagC.BagsB
14、andCareseparated.BagBcontainsPlateletsin40to70mLofplasma.PlasmainBagCcanbemadeintoFreshFrozenPlasmaorotherproducts.Fig.9-3Flowchartofcomponentpreparation.1、悬浮红细胞：(1)单袋制备法用单个塑料袋采集血液，离心后在无菌条件下与空塑料袋相连接，把上层血浆分离移入空袋，将等量的保存液加入红细胞内充分混匀。单袋制备方法要求严格的制备环境，整体环境达万级净化，局部操作空间达百级净化。(2)联袋制备法全血采集于多联袋的主袋内，与抗凝剂充分混匀后，在8
15、小时内制备。1)采血后的多联袋在大容量冷冻离心机内离心，离心力一般为5000Xg,温度控制在42,离心7分钟；2)轻轻取出离心后的血袋悬挂于分离支架上或放于分浆夹内，将上层不含血细胞的血浆分入空的转移袋内。注意不可把血细胞分入血浆中；3）把多联袋末袋中的保存液加入主袋浓缩红细胞内，使红细胞与保养液充分混匀,血细胞比容为0.50-0.65；4）用高频热合机切断塑料袋间的连接管，封闭红细胞袋上的所有管道，制成悬浮红细胞。2、浓缩红细胞：浓缩红细胞可以在全血有效保存期内任何时间分离出部分血浆制备而成，一般用二联袋采集的全血制备浓缩红细胞。(1)用二联袋采集1单位或2单位全血于主袋内；(2)将全血在42离心，离心力5000Xg,离心7分钟，沉
