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1、第一章结缔组织染色结缔组织广泛分布于人体和动物体内， 其结构特点是细胞分散， 有大量的细胞间质纤维和基质， 而化学成分是含有大量的蛋白质和多糖。 结缔组织一般分为固有结缔组织 （其中包括疏松、致密和网状结缔组织等） 、软骨组织和骨组织。第一节结缔组织多色染色法一、 Mallory三色染色法1.试剂配制（1）重铬酸钾液（ 2）苯胺蓝桔黄（ 3）酸性复红液G液重铬酸钾2.5g ，醋酸 5ml，蒸馏水 95ml苯胺蓝 0.5g ，桔黄 G2g，磷钨酸1g，蒸馏水酸性复红 0.5g ，蒸馏水100ml100ml2. 染色步骤（ 1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（ 2）重铬酸钾液 10m
2、in 。（ 3）蒸馏水冲洗 2min ，蒸馏水 2 次。（ 4）酸性复红液 2min ，蒸馏稍洗。（ 5）苯胺蓝液 20min ， 95%乙醇快速分化。（ 6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3. 结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。4. 注意事项（ 1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。（ 2）苯胺蓝液染色后，用 95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。（ 3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。（ 4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。二、 Ma
3、sson 三色染色法1. 试剂配制（ 1） Masson 复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄 G2g， 0.25%醋酸 300ml。（ 2）亮绿染色液高绿 SF0.1g ， 0.2%醋酸 100ml。2. 染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（ 1） Masson 复合染色液 5min 。（ 2） 0.2%醋酸水溶液稍洗。（ 3） 5%磷钨酸 5-10min 。（ 4） 0.2%醋酸水溶液浸洗 2 次。（ 5）亮绿染色液 5min ，0.2%醋酸水洗 2 次。（ 6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3. 结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。4. 注意
4、事项（ 1） Masson 复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。（ 2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993 年）1. 试剂配制（ 1）高锰酸钾硫酸液0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml 的硫酸。（ 2）维多利亚蓝染色液维多利亚蓝2g，糊精 0.5g ，间苯二酚4g，蒸馏水 200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min ，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60恒
5、温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml 的 70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml 和苯酚 5g 放置至成熟后使用。（ 3）丽春红染色S 染色液0.5%丽春红 S水溶液 15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。（ 4）Gomori 氨性银改良液取 5%硝酸银水溶液5ml ，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入 3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。2. 染色步骤（ 1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（ 2）高锰酸钾硫酸液氧化3min 后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白 2
6、min。（ 3） 5%硫酸铁铵 1min 。（ 4） Gomori 氨性银改良液染 1min。（ 5）蒸馏水洗 2 次，用 15%甲醛液还原 1min。（ 6）蒸馏水洗 2 次， 0.2%氯化金 30s ，蒸馏水洗 1 次。（ 7） 70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h 。（ 8） 95%乙醇分化 1min 左右。（ 9）浸入蒸馏水中 1min 后，用丽春红 S 染色液染色 2min。（ 10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3. 结果胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。4. 注意事项氨性银液滴染时， 要用干净吸管， 防止银液
7、污染而发生沉淀。 氨性银液作用后的切片不能倾倒， 应将蒸馏水冲洗切片上的银液， 这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。第二节胶原纤维一、胶原纤维的分布和组成成分胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、键、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等，胶麻纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。 在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水，称白明胶。 胶原纤维和网状纤维的基本构造相似，都以胶原单位(蛋白质为主的大分子) 为基本单位。胶原单位接连和融合形成网状纤维它是粗约1 m 左右的分支状纤维，形成全身组织的支架，在HE 染色中看不清楚。但其外面裹着的一层类蛋白，凭借
8、镀银法可以清楚地显示出来，故又称为嗜银纤维。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。其他如平滑肌细胞等也能产生。胶原单位的形成开始于细胞的粗面内质网，合成比构成胶原单位的肽链更长的前肽链，经高尔基体分泌出细胞， 在细胞外液的内切肽酶作用下，切去前肽链的附加肽段而形成胶原单位；再经细胞外液的赖氨酰氧化酶作用使两条肽链通过醛醇或醛胺缩合构成共价交联。这样胶原单位分子之间就形成了稳定的联系，形成胶原微纤维，然后再聚合而成胶原纤维。二、胶原纤维染色的应用;胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、 纤维形细胞肿瘤的组织来源： 常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。 还能使用于其他的情况下， 如观察动脉
9、硬化的心脏，在 HE 切片中， 心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色， 而作胶原纤维染色可将胶原组织和心肌组织明显地区分开来。 早期肝硬化用胶原纤维染色， 也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。 由干胶原纤维是由成纤维细胞产生的一种纤维蛋白成分， 常常被酸性染料染色。l . Van Gieson苦味酸酸性复红法(1889年 )试剂配制(l) Van Gieson 液l% 酸性品红水溶液10ml ，苦味酸饱和水溶液(约 l.22%)90ml 。(2)Weigert 铁苏木素溶液甲液：苏木素lg,95% 或无水乙醇100ml；乙液： 29%三氯化铁水溶液4ml ，蒸馏水95ml，盐酸
10、l ml 。临用时取甲液和乙液等量混合即可。铁苏木素不能像明矾苏木素一样配制后放置，因铁与染色剂的色素可引起化合而形成不溶性沉淀。 所以，以铁作为媒染液时， 必须与染液分别配制、分别应用或临时混合应用。 染色方法 (1) 组织固定于 10%甲醛液，常规脱水包埋。(2) 组织切片脱蜡至水。(3) 用 Weigert 苏木素液染 5l0min 。(4) 自来水冲洗数分钟。(5) 根据染色的深浅可用 0.5%盐酸乙醇分化。(6) 自来水洗至变蓝；用蒸馏水洗。(7) 用 Van Gieson 液染 15min。(8) 倾去染液，直接用 95%乙醇分化和脱水。(9) 无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封
11、固。结果 胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色，胞核呈黑色。注意事项 (1) 目前以苦味酸、复红的 Van Gieson 染液直接染此一种溶液即可。(2)Weigert 铁苏木素分甲、 乙两液， 应于临用前将两液等量混合使用， 而不宜预先混合，否则易氧化沉淀而逐渐失其染色能力。(3) Van Gieson 染色液分别在临用时混合，防止放置时间长，则酸性品红不易着色。2. Siriured 染色法这种方法可使胶原纤维长期保存，是不易褪色的一种好方法。试剂配制 (l)Siriusred饱和苦味酸液0.5%Siriured l0ml ，苦味酸饱和液90ml 。(2) 天青石蓝液 天青石蓝 B1
12、25g，铁明矾 1.25g，蒸馏水 250m1。溶解煮沸，待冷过滤后，加入甘油30m1，然后再加入浓盐酸染色方法 5ml 。(1) 组织固定于 10%甲醛液，常规脱水包埋。(2) 切片脱蜡至水。(3) 入天青石蓝液染 510min ，(4) 蒸馏水洗多次。(5)Siriured 饱和苦味酸液染1530min 。(6) 无水乙醇直接分化与脱水。(7) 二甲苯透明，中性树胶封固。结果 胶原纤维呈鲜红色，细胞核绿色，其他为黄色。3. Lillie 改良 Van Gieson 法 (1965 年) 试剂配制 A . 用 1%醋酸配成0.1% 快绿 FCF 液，或为得到较蓝的绿色用3%毛绿 S(Wool
13、 greenS ) 。B. 且 0.2%酸性复红， 0.2%紫胺 (Violamine) 或用 0.1%0.5% 丽春红 S(ponceau S) 溶于饱和的苦味酸水溶液。染色方法 (1) 按常规将切片脱蜡至水。(2)用 Harris 明矾苏木素液染3min。(3) 自来水洗，盐酸乙醇分化数秒钟。(4) 自来水洗至显蓝，蒸馏水洗。(5)在 A 溶液中染4min 。(6)在 1%醋酸中洗2 次。(7)在 B 溶液中染l0l5min 。(8)在 1%醋酸中洗2min。(9) 无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。结果 结缔组织红色，肌肉、胞质灰绿色，红细胞绿色，核蓝黑色。4. Clark 改良 Van Gieson 台盼蓝法 (1971 年 )用于胶原纤维、包括非常细的纤维，以及肌肉角化上皮的染色。固定 甲醛固定液。试剂配制 (l)A 液0.3g 萘酚黄 S（ naphthol yellow S ）溶窜犯100mI 蒸馏水。(2)B 液0.2g 酸性复红溶于100ml 蒸馏水中。(3)C 液0.2g 台盼蓝溶于100ml 蒸馏水中。染色液由 40 份 A 溶液
