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1、文件编号：VP-QC-2015-05起草人：审核人：批准人: 批准日期： 年 月 日目录1概述12验证目的及围13验证小组人员组成及职责14验证依据25验证前准备26验证的实施27偏差处理58验证数据及评估59验证报告及评审510再验证及周期511验证文件及归档512附件51 验证目的及围2015 版中华人民国药典中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为 R2A 琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该 R2A 琼 脂培养基进行适用性检查实验。2 验证方法照 2015 版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则 1105） 中“计数培养基适用性检查”的胰酪
2、大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试 验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。3.2 验证小组组成及职责列表组成职责QC1. 负责起早验证方案的起早2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的收集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告质量部1. 负责验证方案、验证报告的审核与批准2. 负责验证现场的监督审查生产部1. 负责保障设备、器具的完好2. 负责动力系统的保障4验证接受标准4.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.52
3、围，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；4.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。5.验证前准备5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试 验的结果没有影响。5.3确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。5.4相关文件序号相关文件文件编号1DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程WI-1002BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程WI-1013WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程WI-
4、1034DK型电热恒温水浴锅操作规程WI-1045HWS型恒温恒湿箱操作规程WI-1056JA2003N电子天平操作及维护保养规程WI-1067PHS-3C型PH计操作及维护保养规程WI-1088SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程WI-1099YJ-875SDB型净化操作台的操作及维护保养规程WI-11310培养基管理规程WI-766.验证的实施6.1实验材料6.1.1培养基类别培养基名称厂家批号验证培养基A2R琼脂培养基对照培养基胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.2仪器设备DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提 式灭菌器、DK型
5、电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱(3035C)、JA2003N电子 天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱(2025C)、YJ-875SDB型净 化操作台。6.1.3稀释剂：PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液6.1.4计数用培养基胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.5验证用菌株铜绿假单胞菌CMCC(B)10 104枯草芽抱杆菌CMCC(B)63 5016.1.6灭菌前调节PH溶液：10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。6.2验证容6.2.1培养基的配制灭菌过程将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中121C灭菌15分钟后取出。取1管已 灭菌的培养
6、基，放冷至25C测定pH值，应在7.2 0.2围。621.4外观性状灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培 养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好的培养基保存在225C、避光的环境中，在 存放2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。6.2.2菌液制备接种铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大 豆胨琼脂培养基上，3035C培养1824小时。6.2.3菌液计数（每种菌液接种2个）6.2.3.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽抱杆菌（50100cfu/ml）各1ml加入 无菌培养皿，立即注入不超过45C胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml,混匀，
7、凝固，置 3035C培养箱培养48小时，计数每株试验菌平行制备2个平皿。6.2.4培养基适用性检查6.2.4.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽抱杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平 行做2皿，立即注入不超过45C胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml,混匀，凝固，置 3035C培养箱培养48小时；分别计数。同时取相应的对照培养基替代被检培养基进 行上述试验。6.2.4.2 取每管装量为 9ml 的胰酪大豆胨液体培养基 7 支,分别接种小于（ 50 100cfu/ml）的铜绿假胞菌、枯草芽抱杆菌1ml各2支，另1支不接种作为空白对照， 置3035C培养箱培养48小时，逐日观察结。同时取相应的对照培养
8、基替代被检培养 基进行上述试验。625结果判定: 625.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.52围，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；625.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。7.偏差处理验证的数据产生的任何偏差，应及时进行偏差调查，按照化验室偏差管理规程 进行处理并如实记录，给出合理的偏差处理措施，并上报验证领导小组，记录备案， 并且根据处理措施进行相应的处理，并对处理的过程、结果进行记录与跟踪。验证小组根据数据分析，做出相应的评定与结论，报请验证委员会批准。8验证数据及评估验证小组对验证检测数据进行评估，并对结果进行评价结果
9、评价:评价人： 日期：9. 验证报告及评审9.1 验证小组依据本方案实施验证，编写验证报告。9.2 验证小组组织专业人员对验证报告进行评审。9.3 QA 对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证。10. 再验证及周期10.1纯化水微生物限度检查用的A2R琼脂培养基的适用性检查验证，其再验证周期一般为三年，以证实确认培养基的可靠性。10.2当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证；10.2 当所用到的检验设备出现故障进行重大维修，尤其是关键部件的维修；仪器的性 能发生了明显的偏移，已不能再满足检验产品质量的要求时，均需要对该检验方法进 行重新确认，以证明变更对已经确认的效果无影响
10、。11. 验证文件归档验证结束，全部验证文件（验证方案、验证报告、验证记录、验证合格证等）归档 质量部。12. 附件12.1 验证小组组成及职责12.2 验证前确认记录13.5 验证结果评估记录13.6 验证合格证验证前确认记录一、验证前仪器仪表确认试验材料表一、计数用培养基胰酪大豆胨琼脂培养基：批号：来源：三、验证用菌种菌种类型菌种代数批号来源铜绿假单胞菌CMCC(B)10104枯草芽抱杆菌CMCC(B)63501四、灭菌前调节 pH 溶液溶液名称配制批号配制日期有效期至配制人10%碳酸钠溶液1mol/l氢氧化钠溶液15%冰醋酸溶液1mol/l盐酸溶液检查人：日期: 复核人：日期：附表 2培
11、养基的pH值附表 3外观性状培养基名称批号灭菌后外观检杳保存2周后外观检杳结果判定日期：日期：检查人：日期: 复核人：日期：表4培养基无菌性检查表培养基名 称管 数培养时间（天）培养 温度123456789101112131412345结论检查人/日期：复核人/日期：注：“+”为生长，“-”为不生长。附表 7菌种计数表计数培养基培养温度（C）培养时间（h）菌种类型稀释级数菌落数（cfu/ml）平皿1平皿2平均值胰酪大枯草芽抱杆豆胨琼菌脂培养铜绿假单胞基菌结果评价查人/日期：复核人/日期：菌落计数结果（cfu/ml）试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释123123123金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌勃沸创医疗科技验证合格证书验证方案名称：无菌检查用培养基适用性检查验证方案验证方案编号：VP-QC-2015-02验证报告名称：无菌检杳用培养基适用性检杳验证报告(NO.)验证报告编号：VR-QC-2015-02严格按照本方案规定项目进行了验证，验证合格，批准允许投入使用。有 效 期：批准人：年 月 日 备注：1.严格按批准方案进行，当验证条件发生变更时应报质量部审核，并经批准后再进行重 新验证。2.当中国药典中无菌检查方法发生变更时，应重新进行验证。
