《分离小鼠表皮和真皮细胞的方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分离小鼠表皮和真皮细胞的方法（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、成鼠分离角化细胞 取皮1. 颈椎脱臼处死小鼠2. 逆着毛发生长方向剪掉小鼠背毛3. 用无菌的解剖工具取下小鼠背部皮肤4. 真皮面向上至于 10cm 皿中注意：此时皮肤组织可在冰上放置5-6h，不影响后面的细胞分离。酶解5. 灭菌。将皮肤依次置于200ml碘伏中2min, 70%乙醇中1min，70%乙醇中1min，无菌 PBS 中 1min6. 真皮面向上置于 10cm 皿中7. 用无菌的解剖的刮去真皮的脂肪组织和肌肉 注意：尽量刮干净，否则影响制备细胞的质量。8. 10ml的0.25%胰酶，使表皮向上悬于胰酶中，4C过夜或者37C2h分离细胞9. 将组织放入培养皿盖中，表皮向上10. 手术镊
2、压住组织边缘，用无菌手术刀将表皮从真皮上刮除11. 扔掉真皮，将表皮切碎12. 将切碎的表皮放入50ml的Falcon管中，加入8ml胰酶13. 移液器吹打组织悬液至组织块分解。约 3060s14. 加入16mlFAD低钙完全培养基，50p m的细胞过滤器过滤。 注意：过滤器中剩余的组织可用来分离毛发。15. RT500g 离心 8min。16. 移除上清17. 8mlFAD低钙完全培养基重悬细胞，转移至14ml无菌Corning管中，500g离心8min18. 4ml加了 BSA的PBS重悬细胞19. 取50p l细胞悬液，加入50p l的台盼蓝，计数20. 培养。胎鼠或初生小鼠分离真皮细胞
3、（E16.5到Day2的小鼠） 准备：0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液1. 70%乙醇浸泡手术器械进行消毒2. 颈椎脱臼处死小鼠3. 依次置于200ml碘伏中2min, 70%乙醇中1min, 70%乙醇中1min,无菌PBS中1min灭 菌消毒4. 剪去四肢,尾巴以及头部5. 剥离皮肤,刮除真皮下的多余组织注意：不要刮太厉害6. 0.25%无EDTA胰酶与dispase酶1:1混合液消化。5只初生小鼠皮肤可置于一个10cm大 皿中，加入15ml混合液，37C1h7. 手术刀刮除表皮。刮下的表皮可用于分离表皮细胞。每只小鼠可得到约3x106个表皮细 胞8. 将真皮剪碎。0.25%的胶原酶37C消化至少1h, UP to 2h9. 将消化的细胞悬液转移至 10ml 离心管中,大力震荡至得到单细胞悬液10. 70m m的过滤器过滤细胞11. 收集滤过的悬液，500g离心4min12. 洗3次13. 计数,接种细胞
