病理学摄影技术

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1、病理学摄影技术一、概述（一）病理医师根据病理学诊断、教学和研究的需要确定病理学摄影的内容， 进行客观、准确的图像记录。（二）病理学摄影的客体包括：患者体表病征，大体标本（手术切除和 尸检标本的肉眼病变），组织学切片（光学显微镜下病变），超薄切片（透射 电子显微镜下超微病变），冷冻蚀刻标本（扫描电子显微镜下超微病变），细 胞培养标本，细胞和分子细胞遗传学检测结果，尸检过程，动物实验标本 和文字、图像资料翻拍等。二、普通摄影（一）普通摄影是应用普通照相机拍摄客体的图像，包括患者体表病征，大 体标本的肉眼病变，尸检过程，动物实验标本和文字、图像资料等。摄影时应注 意病征或病变显示、光照、角度等，适度

2、调节距离、光圈、速度。（二）患者体表病征摄影1. 需征得患者或患方有关人员同意。2. 应遮盖患者的面容和隐私部位。（三）大体标本摄影1. 于标本下面铺垫色泽反差鲜明、协调的平整背景（纸或布）并需置放标 尺和相关标本的病理号，必要时添加箭头等符号标志指示重点部位。2. 因照相机固定于翻拍机上，宜选用较慢的快门速度，以增加景深。（四）尸检过程摄影1. 宜用28135mm变焦镜头的135相机进行摄影。2. 重要病变的原位摄影：应包括局部肉眼病变特征（“近拍”）及其与毗邻 结构的解剖关系（“全景”），突出重要病变，兼顾显示全貌。3. 离体标本摄影参见上文：“（二）大体标本摄影”（五）文字、图像资料翻拍

3、1. 应用翻拍机进行摄影。2. 在翻拍相机的两侧一般至少安装24盏100W灯光，与照明直线呈45o 角，以使光线均匀。摄影条件可用测光表确定。(六) 底片的选择1. 黑白摄影:扩印照片者，可用ASA100速度底片；制作幻灯片者可用ASA25 50速度底片。2. 彩色摄影：(1) 用日光型彩色底片摄影时，需用雷登80系列平衡滤色片把色温调到 5600oK状态；用灯光照射者，无需平衡滤色片。(2) 用灯光型彩色底片在日光下摄影时，需用平衡滤色片把色温调到 3200oK 状态。三、光学显微镜(光镜)摄影(一) 光镜显微摄影是应用显微照相机拍摄通过光学显微镜放大401000 倍的客体图像。(二) 摄影

4、用显微镜性能要求1. 具有摄影目镜筒。2. 能通过目镜筒对图像进行对焦。3. 具有光镜选择移动杆。4. 物镜具有分辨率良好平视场象。5. 聚光镜具有孔径光阑和调节光轴中心、的机构。6. 具有视场光阑。7. 光源亮度足够，电压可以调节。8. 具有插入滤色镜的槽口。(三) 显微摄影的基本装置1. 具有自动输片机构的35mm照相机背。2. 具有对不同光照条件进行光路调节的调节杆。3. 具有能对不同标本面积进行自动测光的装置。4. 具有与显微镜相连接的接圈、平场消色差物镜(Splan，Dplan)和聚光镜。5. 具有显微摄影控制台。目前较常用的有日产0lympus PM-10及PM-20等 显微摄影装

5、置。常用参数项目包括：快门按钮(EXPOSE)，底片类型选择键 (FORMAT)，感光度旋钮(ASA/ISO)，倒易律失效的补偿旋钮(RECIPROCITY)， 曝光增减旋钮(EXPOSURE ADJ)，快门速度调节旋钮(MODE/EXPOSURE TIME)，卷片按钮(OFF/MINDING),停片进片按钮(NO WINDING),自动曝光锁按钮 (AEOCK)，时间回忆按钮(TIME RECALL)。(四) 显微摄影要点1. 显微照相机必须安放稳定，具有一定防震性，室内光线应暗些以避免散 射光进入目镜。2. 选择适当的彩色或黑白底片装入照相机身(暗盒)。拍摄常规HE染色、 特殊染色、免疫组

6、化染色切片的病变，宜用感光度ASA为100的彩色或黑白底 片；拍摄培养细胞和免疫荧光染色标本，宜用感光度ASA为400的彩色或黑白底 片。3. 调节照明和光照(1) 打开电源，调节电压(约在9优)。(2) 视场光阑收缩到取景框边缘外。(3) 孔径光阑调到物镜孔径数值的60%80%，例如孔径为0.25的10X 物镜，聚光镜上光阑应调到：0.25X60%80%=0.150.2。(4) 光通路调节 常规摄影：先将视野与照明合轴、再将聚光镜调中，使光线同时调到观 察目镜和取景目镜的视野之中，以便于边观察边曝光摄影。如图像分布均匀， 将曝光增减旋钮(EXPOSURE ADJ)调至“ 1”处。 暗视野、荧

7、光和偏振光摄影：将光线100%调到取景目镜的视野之中，用 调焦镜观察视野中的标本图像，进行摄影。如图像分布不均匀，应将曝光增减旋 钮调于0.254之间。4. 调节和校准取景目镜于标准状态：旋转调焦镜镜筒上的圆环，使取景框 中央的双十字线达到最清晰。5. 将切片等标本放置在载物台上，先用观察目镜选定摄影图像，再用取景 目镜调整摄影图像，并转动微调旋钮，同时使图像与取景框中的双十字线像达到 最清晰。6. 用彩色底片摄影时，必须用色温计调节色温：将光通路100%到达色温 计上(由调焦镜中看不到光线)；观察色温指示表，用平衡滤色镜(使用日光 型底片时用雷登80系列)和灯光亮度将色温调至最佳色温点(日光

8、型底片的色温点为5600K左右，灯光型底片的色温点定为3200K左右）7. 用黑白底片摄影时，必须按下列对应关系选择滤色片以提高图像反差和 清晰度：标本颜色红橙黄绿深蓝滤色镜蓝、绿蓝、绿蓝红、蓝深 绿、橙8. 检查光线可达到底片的位置，确定正确的曝光时间和进行曝光；或用自 动摄影控制台上的按键曝光。9. 记录图像的摄影日期、摄影编号、样品编号、放大倍数、内容、摄影条 件和备注等。10. 将已全部摄影过的底片退回底片暗盒内，取出底片并进行暗室冲洗等后 期处理。四、电子显微镜（电镜）摄影（一）透射电镜摄影1. 检查电镜工作状态，确认样本无漂移现象，选择好曝光条件。2. 调节好灯丝像，消正像散。3.

9、 选择视野，确定放大倍数。4. 调整物镜光阑：样品反差较强时，使用较大的物镜光阑孔，直至反差适 中为止；反差小时，宜用较小的光阑孔。5. 样本聚焦在低倍电镜（1500倍）图像时，可采用摇摆聚焦法用肉眼定 位；样品聚焦在高倍电镜（1500倍）图像时，除用肉眼观察定位外，还需采用 系列拍照法：于确定焦点后，用细调钮聚焦，增加物镜电流，每调动一级最小钮 拍摄一张底片，总计拍摄45张，从中选择最佳底片。6. 放平荧光屏，传送底片使之进入摄影位置。7. 调定曝光亮度和速度，然后启动快门进行曝光；曝光结束后，将底片送 入储存盒内。将底片全部摄影的储存盒取出，进行暗室冲洗等后期处理。8. 用于透射电镜摄影的

10、底片一般为色盲片（对红光不感光），曝光时间为2 4s，ASA 为 825s。（二）扫描电镜摄影1. 检查电镜工作状态（1）加速电压强度的选择：取决于样品的性质、图像反差和放大倍率。高倍观察时一般需要较高的加速电压，低倍观察时需要较低的加速电压。（2）聚光镜电流的选择：在保证图像亮度和反差要求前提下，尽可能加大 聚光镜电流，以提高照片分辨力，加大景深。（3）物镜光阑孔的选择：对于表面结构高低差异大的样本可用较小的光阑 孔，以获较大景深；低倍镜下观察时，可选用较大光阑孔，以增加视野内的信号 强度。（4）选择摄影扫描速度。（5）视野选择：与透射电镜相同。2. 确定曝光时间。在扫描电镜照相机处于光关？

11、F8或F11情况下，照片的 曝光时间在50100s之间。3. 样品的聚焦程度主要依靠操作人员的肉眼观察。拍摄较低放大倍数（V 1000倍）的图像，以调节粗聚焦钮为主；拍摄较高放大倍数（1000倍）图像， 应先调节粗聚焦钮，再调节细聚焦钮。4. 图像消像散：先调节X方向旋钮，消除X方向的像散；再调节Y方 向旋钮，消除Y方向的像散；最后再调节细聚焦钮，直到图像最清晰为止。5. 调节高度和反差：扫描电镜一般装有亮度和反差自动调节按钮，按动该 钮即可得到反差适当的图像。6. 拍摄：将照相机中的底片调至摄影位置，按动面板上的摄影快门钮，荧 光屏上便由上而下自动扫描图像；扫描结束后，即完成一幅照片拍摄。7

12、. 底片选择：扫描电镜装有120或135照相机，故一般选择感光速度为 ASA100的120或135胶卷，；装有Polaroid后背相机的扫描电镜，可进行一次 成像。8. 记录图像的摄影日期、摄影编号、样本编号、放大倍数、内容、摄影条 件和备注等。五、暗室技术（一）暗室技术用于：普通摄影、显微镜摄影和电镜摄影底片的冲洗，及 其照片的洗印和放大；幻灯片的制作等。（二）摄影底片的冲洗操作程序于完全黑暗中取出全色底片（色盲片或电镜底片可在红灯下取出）f 将底片卷入螺旋形的槽内或显影架上f清水湿润2min f显影312min （20C）f 定影1020min （20C）f 水洗30min f 凉干底片

13、f 分类装入底片袋内，并做好记录。（三）试剂配制1. 显影液：有多种配方，组成成分大同小异。下列的D-11配方兼用于冲 洗底片和照片的洗印和放大显影：水（50C） 500ml米吐尔1.0g无水亚硫酸钠75 g对苯二酚9.0g无水碳酸钠25 g溟化钾5 g加水至1 000ml冲洗电镜底片、色盲片和制做幻灯片、显影照片等，需要极强反差，可用以 上配方的原液显影。普通摄影用的全色底片对反差要求不很高，可将原液用清水 稀释成1:21:4的工作液。2. 停影液水 750ml28% 醋酸 48ml加水至1000ml3. 定影液：较常用下列的F-5酸性坚膜定影液水（50C） 600ml硫代硫酸钠240g无水

14、亚硫酸钠 15g28%醋酸 48ml硼砂（结晶）7.5g硫酸铝钾15 g加水至1000ml（四）照片的洗印和放大洗印和放大照片一般使用黑白放大相纸。这类相纸根据反差分为特软性、软 性、中性、硬性和特硬性等5种，即0、1、2、3、4号相纸。较常用者为3号相 纸。1. 洗印：在印相箱中操作（一般装有自动定时曝光控制器），主要用于制做 透射电镜摄影的照片。已经曝光的像纸进入冲洗操作程序（同底片的冲洗程序）。2. 放大：在放大机上操作，主要用于制做显微镜摄影的照片。（1）操作程序 放大镜头焦距的选择参见下表：底片规格 135 120 120 120 120 （16 张）（12 张）（10 张）（8 张

15、） 负片负片负片底片尺寸 （mmXmm） 24X36 45X60 60X50 60X70 60X90 80X105 90X120 108X125镜头焦距（mm） 50 75 7580 8090 90105 135 150 175 装入底片：将底片的乳剂面向下，目测聚焦，使放大的图像结构清晰。 选择相纸：常用3号放大纸。 确定镜头光圈和曝光时间：对于正常反差的底片，将镜头光圈缩小到 f/5.6至f/8之间，曝光时间控制在820s为宜。 将曝光后放大纸进入显影、定影程序中。六、数码摄影技术数码摄影通常包括：拍摄、下载（将所拍摄的照片由数码相机下载到电 脑中）、修饰（加工处理等后期制作）和分享（将经过修饰的照片输出，例 如打印等）4个步骤。（一）选择适当的照片质量要求数码相机的照片质量（解像度）分为精细、正常、经济等档次。图像 质量越好，每张照片占用的存储空间越大，在相同内存的情况下，解存储的照片 数量越小。因此，在拍摄之前，应先根据需要，设定对于照片的质量要求，即设 定压缩比。设定压缩