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1、胃癌患者胃粘膜EB病毒检测及意义徐晓凤朱炳良朱亚平EB病毒(Epstein-BarrVirus)为含包膜的双链DN隔毒，属人类疱疹病毒4型，已经证明EB病毒与低分化鼻咽癌及多种淋巴瘤紧密相关。最近几年来通过检测胃癌组织细胞中EBV基因组发觉EBVS染与胃癌的发生有关1;但是，目前的研究尚不足以明确这种关系。作者于2005年对泰州地域162例胃粘膜标本进行EB病毒检测，以探讨本地域EBV染与胃癌的相关性。1材料与方式标本及来源病例来源于医院胃镜检查者162例，男108例，女54例，平均年龄岁。其中对照组94例，慢性浅表性胃炎64例、胃溃疡16例、慢性萎缩性胃炎14例；胃癌组68例，其中贲门胃体癌
2、42例、胃角癌14例、胃窦癌12例；胃癌诊断均有病理学证明。不能及时检测标本置-20冷冻保留。引物合成参考文献2报导的序列设计引物，由上海XX公司合成弓I物I5GTACTCATCACCGGGTCT6,弓I物H5TTCGGGTTGGAACCTCCSTG扩增的产物长度为269bp试剂和仪器TagDN够聚酶，4种脱氧核甘酸(dATP；dCTPdGTF?dTT,蛋白酶K,DNAI取液，TA谖冲液，琼脂糖，澳化乙锭，液体石蜡等；美国ABI-7000荧光分析仪。核酸提取取米粒大小的胃镜钳取活检组织12块，在Eppendorf管顶用足量生理盐水漂洗3次，加300区l裂解液(10mmol/LTris-HCl,
3、pH,1%SDS300g/ml蛋白酶K),用研磨器研磨成匀浆，55c孵育1h,按常规的酶/氯仿方式抽提蛋白3,乙醇沉淀核酸，漂洗晾干，50屋TE缓冲液()溶解，取5屋作模板。EBV阳性对照由XX公司提供。PCR扩增50屋反映体系中，含1XPCRBuffer(50mmol/LTris-HCl,50mmol/LKCl,烟胶)mmol/LMgCl2,200mol/L4XdNTP1UTaqDN膘合酶，上下防I引物各为mmol/L,PCRU板5”，上覆256液体石蜡，扩增程序为94预变性5min，然后9430s，55退火30s，72c延伸30s,共35个循环，最后72c再延伸5min。产物分析取PCRT
4、物15膜在2演脂糖凝胶中电泳，凝胶用澳乙锭染色，在80v电压下电泳20min后在紫外灯下观看结果，与阳性对照处于同一名置的为阳性，不然为阴性，阴性对照无扩增带。PCR分子量标记选择Puc19-DNA/MSPIMarker23,EB阳性应在269bp处。2结果162例EBVDNA佥出率，见表1。表1162例胃粘膜标本EBV佥测结果(略)对照组EBV染率为%(1/94),胃癌组EBV感染率为%(6/68)。胃癌组与对照组用X2查验，P<,不同有显著性；慢性萎缩性胃炎EBV感染率为%(1/14),胃癌组EBV感染率为%(6/68),P>,不同无显著性意义。3讨论EB病毒是一类可引发世界人
5、口普遍感染的病原微生物，其与胃癌发生的关系在最近几年来已成为研究热点。Shibata1991年第一次运用原位杂交技术和PCRi术在淋巴细胞浸润的低分化胃癌中检测到EBV随后又在1992年证明美国16渔型胃月M癌有EBW毒的存在，同时，日本的Tokunaga等用一样的方式证明在日本人中的%勺胃癌与EB病毒相关。国内有武汉报导胃癌组织中EBV检出率为4,本资料胃癌组EBV检测阳，性率为金与对照组的金不同有显著性（P<）。胃癌的EBV阳性率比其它地域略低，可能与所用引物不同或各地域感染率不一致有关。但能初步说明泰州地域EB病毒与胃癌的发生有相关性。对EBV染的研究多采纳原位杂交法，该法技术要求
6、高，灵敏度低。作者采纳PCR法检测EBV,并在本实验中采纳了阳性对照和MarkerPC的子量标记，双重对照，保证了结果的准确、靠得住，操作简便、有效，适用于临床标本。EB病毒的致癌机制尚未完全说明。此刻以为，EB病毒第一出此刻非肿瘤细胞内，携带EB病毒的胃上皮细胞可能逃幸免疫监视，在长期的暗藏进程中，EB病毒可能抑制宿主细胞的防御功能，慢慢造成细胞转化，最后致使肿瘤发生。研究EB病毒与胃癌的关系有重要的临床意义，在初期胃癌中，若是EB病毒阳性，那么无淋巴结转移，能够幸免传统的根治术，但关于中晚期的胃癌，却无明显的区别，因此EBV佥测关于临床医治手腕的选择具有指导价值。EB病毒对胃癌发生的作用，
7、还存在专门大的不合。本实验慢性萎缩性胃炎患者EBV感染率为%这与胃癌组织EB邛日性率好同无显著性(P>)，可能与样本量少有关，因此，还有必要对该地域二者的相关性进行大样本的进一步观看研究。【参考文献】1WuMS,ShunCT,WuCC,etal.EpsteinBarrvirusassociatedgastriccarcinomas:relationtoH.pyloriinfectionandgeneticalterationsJ.Gastroenterology,2000,118(6):10311038.2赵军理.胃粘膜损伤中EB病毒感染与P53抑癌基因突变的研究.中国病毒学杂志，1999,14(4):296302.3美.FM奥斯伯.精编分子生物学实验指南.北京：科学出版社,.4龙厥华.91例胃粘膜EB病毒感染的检测.中华消化内科杂志,1998,15(3):182183.
