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1、-1、目的分析方法验证指南. z.-本文件的目的是为分析方法验证的数据收集提供根本指南。该指南参考了USP，EECBP/EP和ICH 中的分析方法验证指南，能够满足公司的产品的分析方法验证工作。2、围本文件中提供的定义和程序是为了促使公司质量方针的根本原则符合所有关于方法验证的法规要求。本指南适用于API、原料、中间体的检测和放行的分析方法，并为新药物的应用收集支持性的数据。本指南是为了规验证为公司的产品提供一个通用和分析方法验证方案。现有的方法中的小变化不需要全面验证，如：对柱子的固定相的生产厂家变化，样品准备的变化搅拌和超声，震摇和超声。在实际分析中，方法验证需要提供更多的信息或细节，需要
2、制定的特殊的方案。这个指南不包括微生物分析方法的验证。3、参考文件USP，法定方法的验证ICH 指南Q2A&Q2B，分析方法验证程序。公司关于有效数字修约原则4、定义降解物：降解物是由于一个物质经一段时间的化学变化经过诸如光照、温度、pH、水分，经与容器发生反响产生，也叫降解产物或分解产物。大剂量原料药：原料药在产品中的最大剂量大于2g/天。定量限LOQ：指试样中的被分析物能够被定量测定的最低值，其测定结果应具有一定的准确度和精细度。线性：在设计的测定围，检测结果与供试品中被分析物的浓度直接呈线性关系的程度。通常相关系数R在回归线上有一定的斜率m。小剂量原料药：原料药的在产品中的最大剂量小于或
3、等于2g/天。测量精细度ICH-重复性：屡次测定同一样品时的重现性%RSD。在HPLC或GC中也叫进样精细度。方法精细度：同一样品或标准品假设有时准备多份供试品在测定含量时的重现性%RSD。回收精细度：测定同一标准时对准确度和线性的评估。也叫水平精细度。报告限度RL：低于*一数值的时候报告中就不表达。报告限度一般大于或等于定量限。再现性ICH-中间精细度：在不同检测条件下对样品检测结果的重现性。不同的实验室、分析人员、仪器、试剂、分析时间、日期等5、指南A、总则因为在对产品的物理性质的评估时，分析方法会因测定的准确性和精细性而有所不同，故验证的可承受标准也不同于一般的检测方法。一个可承受的标准
4、可能需要根据方法的特性和检测的指标. z.-来确定。验证工程的选择可参照该指南后面所附的表8-推荐验证工程。在验证之前，应当为验证的分析方法提供一个清楚并简明的格式。该方法应提供所有必要的细节参数、条件等。可以用以下几种方式来描述这些在分析方法验证过程中将要用到的数据。在验证过程中得到的任何意外的或方案外的结果，在此都应当调查并形成文件包括合理评估的取消*个无效数据。任何超标的结果也应在验证报告中讨论并记录方法的局限性假设有。方法应按照USP 中名称分类，参照表1。这里需指出并不是所有的分析方法都适合这1到4类。有特殊的方法时，每个数据以下都应反复考虑其适用性以满足分析方法的目的。表1：分析工
5、程检验类别IIIIIIIV定量，面积%，wt%定性精细度是是否是*准确度是是a*否检测限否*是*否定量限否是否*否报告限度否是否*否选择性是是是*是围是是*否线性是是否*否中间精细度是是是是是耐用性是是*否*可能需要根据其自然特性作详细检测。a可能需要对相关响应因子RRF根据以下方法作进一步的检测。B、选择性：1、要求：a)选择性的研究一般优先于其它验证工程。b)收集被分析物的相关文件色谱图、分析报告、参考文献等，包括杂质、降解物、溶液、相关的或相近的相关物质。c)应有对典型样品的分析。新方法应能对相关降解物和/或杂质具有明确性和选择性。假设杂质或降解物的标准不存在，通过对含有杂质或降解物的产
6、品用不同的程序来检测的结果进展比照来研究选择性，这个样品的成分应已得到鉴别确认。为了更适合，这应当包括快到有效期的或相关的强降解条件下的样品：光照、加热、湿度、酸碱水解、氧化等。2、可承受标准：为证明选择性，需要有重要成分的积极响应和对一些干扰物质的响应的控制。鉴别试验对降解物和杂质的选择性不作要求。c)精细度、回收率、线性和围1、要求a)线性/回收率：准备两份样品两份样品，分别在两天准备，每个浓度总共准备4份+每天用新的标准如果需要。典型的做法是，准备的样品做成五个不同的浓度。具体使用的浓度或多或少. z.-由产品本身和/或所使用的仪器决定。+注意：在预定的围分析物应该参加到适宜的赋形剂或空
7、白溶液中，应该用可靠的有代表性的分析试样比方：大批量的API。定量溶液的制备应该采用线性/回收率制备的同一批样品，以免引入研究的可变性。b)准确度方法的精细度由分析的线性和回收率数据决定。c)围具体的围一般是由线性数据和所要使用的程序决定。这些值的围在分析方法中能够到达一定的线性、准确度和精细度。d)回收率由线性/准确度评估是由测定单个样品时的%rsd的值得到，由每个浓度的四个点组成的回收率决定的。2、可承受的标准：所有数据都应符合表2的标准。3、报告：a)每个浓度的单个和平均百分含量原料药验证或回收率最终产品的验证都应该计算和报告。在API 验证中，因为没有赋形剂，系数就用百分数表示。检出量
8、回收率百分含量= 100参加量表2：一般方法可承受的标准D围%样品的每个浓度准备的份数精细度线性回收率精细度(%RSD)可承受的平均回收率与理论值比照相关系数(R)斜率(m)含量API550150%A每个浓度4份1%0.9900.95-1.051%降解物含量低剂量原料药5C0.05150%每个浓度4份10%0.5%25%0.5%B0.9500.875-1.12510%(0.5%25%(0.5%类别II降解物含量高剂量原料药5C0.03150%每个浓度4份10%1.0%25%1.0%B0.9500.875-1.12510%(0.5%25%(0.5%A：根据不同的检测浓度需要实验证应包括低浓度的5
9、0%和高浓度的150%；B：如果线性关系在整个围不能得到满足，活性组分和降解的线性关系可以分开；C：下限代表主成分的水平，而上限代表降解物的水平；D：应该在各个验证方案中先定义好紧缩或宽松的验收标准。b)这些数据应当表示为检出量比参加量，进展线性回归分析，根据以上要求测得的样品的结果进展绘制得到每个浓度的四个点。y=m*+b，其中y=检出量，m=斜率，*=参加量，b=截距c)报告相关系数R，斜率m，和残差平方和。d)报告每次参加量浓度所得的回收数据的SD 和%RSD。D、测量精细度1、要求为确定测量精细度，同一化验员屡次对同一样品进展检测每个至少检测6次。典型例子，对100%的标准溶液分析进展
10、类别I的验证。类别II验证要求对标准品的规格和指标进展. z.-分析。2、可承受的标准：数据的%RSD应符合表3的标准。对类别IV 的含量没有一个普遍承受的标准。3、报告：报告检测的数据并计算平均值、标准偏差和%RSD。表3：测量和方法精细度的可承受标准%RSD测量精细度样品/标准品方法精细度类别1原料药1%1%类别I制剂1%2.5%类别I防腐剂3%3%类别II原料药&大剂量制剂3%10%等于或大于0.5%25%小于0.5%类别II小剂量制剂3%10%等于或大于1%25%小于1.0%类别III3%5%E、方法精细度：1、要求为确定方法的方法精细度，同一分析员将样品和标准溶液各准备6份。2、可承
11、受的标准所有数据都应符合表3所给出的标准。对类别IV 的含量没有一个普遍承受的标准。3、报告每个样品的检测数据都应报告，包括平均值、标准偏差和%RSD。F、中间精细度1、要求a)为测定方法的中间精细度，两个分析员分别对至少三批样品假设有的含量测定两次。分析操作应分别在两天进展，在操作条件根本不变的情况下，用不同的仪器、不同的设备、试剂、溶液、标准溶液，样品溶液进展小的变动。b)当分析物中的检测成分不存在时，可以参加相应标准使出现响应峰。2、可承受的标准所有数据必须符合表4 提供的标准。表4：中间精细度可承受标准类别要求标准绝对差I含量：原料药1%II降解物含量：小剂量制剂0.2%2%0.5%2
12、%II降解物含量：API&大剂量制剂0.1%1%1%1%II残留溶剂浓度的25%a1%浓度的10%a1%a浓度是指最初检测时的数据。注解：当一个分析物的检测结果低于报告限度时，结果仍然要报告以便与其它有检测结果比照即计算绝对差。假设一个分析物的检测结果为未检出，那在计算绝对差时应看作是0。假设两个分析物的结果都是“未检出或低于“报告限度，那中间精细度可看做通过。. z.-3、报告报告与中间精细度结果的比照的结果作为绝对差。每个分析都包括系统适应性结果和样品检测的定量结果如适用。G、检测限1、要求a)按照一个恰当的方法来稀释分析物来确定检测限。稀释的倍数是直到分析物不能被检测到为止。b)在做检测
13、限测试的样品需平行测定三次以确认结果。2、可承受的标准：以信噪比为3:1时的三针进样进展确认。要注意检测限经常会受分析方法的条件的影响，会因仪器和柱子等的不同而发生变化。3、报告在方法的最后讨论中对检测限的结果报告。H、定量限1、要求：准备一份不含赋形剂或分析物的溶液，或一份由指定方法检测可能到达检测限的溶液。其测定结果应当具有一定的精细度、准确性和线性，并且是能够被定量测定的最低量。2、可承受的标准：以信噪比为10：1时进样进展确认。定量限经常会受分析方法的条件的影响，会因仪器和柱子等的不同而发生变化。3、报告在方法的最后讨论中对定量限的结果报告。I、报告限度1、要求 a)准备并分析一份在报告限度的样品以得到典型图谱，放在分析方法中。一般而言，限度应符合表5中所例的ICH指南。在验证总结报告中应有对更高报告限度的证明。表5：报告限度*报告限度小剂量原料药(2g/天)0.05%大剂量原料药(2g/天)0.03%2、可承受标准定量限必须不大于给定的报告限度。一般以信噪比为10：1时进样进展确认3、报告在最后的方法中的系统适应性局部中报告。J、耐用性1、要求a)假设测量法易受不同分析条件的影响，分析条件可以调整以便于测试。调整变化要符合耐用性要求，典型调整变化有：样品制备、
