生物化学实验习题及参考答案

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1、生物化学实验习题及解答一、名词解释、I：指氨基酸的正离子浓度和负离子浓度相等时的H值，用符号p表达。2、层析:按照在移动相和固定相(可以是气体或液体）之间的分派比例将混合成分分开的技术。3、透析：通过小分子通过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理,将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳：在去污剂十二烷基硫酸钠存在下的聚丙烯酰氨凝胶电泳。DS-PAE只是按照分子的大小，而不是根据分子所带的电荷大小分离的。、蛋白质变性：生物大分子的天然构象遭到破坏导致其生物活性丧失的现象。蛋白质在受到光照,热，有机溶济以及某些变性济的作用时,次级键受到破坏,导致天然构象的破坏，使蛋

2、白质的生物活性丧失。、复性：在一定的条件下，变性的生物大分子恢复成具有生物活性的天然构象的现象。7、Tm 值：核酸分子变性过程中，紫外吸取达到最大增量一半时的溶解温度。8、同工酶：能催发相似的反映类型但其理化性质及免疫学性质不同的酶。、Km值:反映速度为最大反映速度一半时的底物浓度。是酶的特性物理学常数之一。近似表达酶与底物的亲和力。10、DN变性：DNA双链解链，分离成两条单链的现象。11、退火:既A由单链复性、变成双链构造的过程。来源相似的DA单链经退火后完全恢复双链构造的过程,同源之间DNA和RNA之间，退火后形成杂交分子。1、增色效应：当双螺旋DA熔解（解链)时,260n处紫外吸取增长

3、的现象。二、基本理论单选题1、A；、C；3、B；4、A；5、A；6、B;7、B；8、C;、;0、A；、A；1、；13、A;、用下列措施测定蛋白质含量，哪一种措施需要完整的肽键?( )、双缩脲反映 B、凯氏定氮 C、紫外吸取 D、羧肽酶法2、下列哪组反映是错误的？ （ ） A、葡萄糖Molish反映、胆固醇bermnn-urchard反映 C、色氨酸坂口（Skaguci)反映 D、氨基酸茚三酮反映3、Sanger试剂是( ) A、苯异硫氰酸 B、2,4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、b-巯基乙醇4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸取？( ） A、5m B、260nm C、20nm D、340nm、

4、下列蛋白质组分中，哪一种在280n具有最大的光吸取?（ ） 、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子6、SD凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据多种蛋白质（ ) A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同7、蛋白质用硫酸铵沉淀后,可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵与否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查？ （ ) 、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、olin-酚试剂、蛋白质变性是由于（ ) A、一级构造变化 、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是根据蛋白质具

5、有（ ) A、胶体性 B、粘性 C、变性作用 D、沉淀作用10、有关变性的错误描述为（ ) A、蛋白质变性后，其一级构造和空间构造变化B、蛋白质变性后,其理化性质和生物学活性变化C、加热、紫外线照射、超声波等可以引起蛋白质变性、变性蛋白质粘度增长，易被酶水解,易沉淀1、双链DNA热变性后( ) A、黏度下降 B、沉降系数下降 C、浮力密度下降 、紫外吸取下降12、酶的活化和去活化循环中，酶的磷酸化和去磷酸化位点一般在酶的哪一种氨基酸残基上？(） A、天冬氨酸 B、脯氨酸 C、赖氨酸 D、丝氨酸13、在生理条件下，下列哪种基团既可以作为H+的受体,也可以作为H+的供体?( ） 、His的咪唑基

6、B、rg的胍基 C、Cys的巯基 D、Trp的吲哚基三、填空、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反映产生（ ）色物质，而其她氨基酸与茚三酮产生（ )色的物质。2、一般可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是由于蛋白质分子中的（ ）、( ）、（ )三种氨基酸的共轭双键有紫外吸取能力。3、移液枪在每次实验后应将刻度调至( ),让弹簧答复原型以延长移液枪的使用寿命,并严禁吸取（ ）。4、使用离心机时，如有噪音或机身振动时，应立即( ），并且离心管须对称放入套管中，避免机身振动，若只有一支样品管，则此外一支要用( ）替代。5、测定蛋白质浓度的措施重要有( ）、( ）、（ )。、运用蛋白质不能通过半透膜的特性,使

7、它和其她小分子物质分开的措施有（ )和（ )等。7、核酸在20nm附近有强吸取,这是由于（ ）。8、双键DN热变性后，或在2如下，或在H12以上时，其OD60( ),同样条件下，单键DNA的OD260( )。9、硝酸纤维素膜可结合（ ）链核酸。将RN变性后转移到硝酸纤维素膜上再进行杂交，称( ）印迹法。1、常用二苯胺法测定（ ）含量，用苔黑酚法测定( )含量。11、变性DA的复性与许多因素有关,涉及(）、（ )、（ )、（ ）、( ）。1、温度对酶活力影响有如下两方面:一方面( ）,另一方面( )。1、维生素C是( ）酶的辅酶，此外还具有（ ）作用。14、在分光光度计的使用或检定中，( ）的精

8、确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标，它的精确限度直接关系到所测数据的可信性及科学性。（ ）的误差越大，测试成果的可信性越差,从而影响到测试数据的精确性。四、问答1、紫外分光光度法测定核酸含量的原理。答 :核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸取紫外光,RA和A的紫外吸取峰在2nm波长处。一般在260nm波长下，每1l含1g RNA溶液的光吸取值为.220.24,每m含1 NA溶液的光吸取值约为0.020，故测定未知浓度A或DNA溶液在的光吸取值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸取紫外光的物质，则测光误差较大,故应设法事先除去。2、蛋

9、白质变性与沉淀的关系。答 ：沉淀可以是由蛋白质变性从而产生沉淀,也可以是由于盐析。 蛋白质变性是指光照，热，有机溶济以及某些变性剂(如重金属盐)的作用时蛋白质的空间构造被破坏,使得蛋白质丧失活性，该过程不可逆。盐析是指向蛋白质的溶液中加入轻金属盐,使得蛋白质沉淀析出,这是由于加入盐减少了蛋白质得溶解度而析出，该过程可逆,加水蛋白质又会溶解。 两者本质上是不同的。3、牛乳中制备酪蛋白的原理和措施。答:牛奶具有半乳糖、蛋白质、脂肪成分。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，再通过离心而获得，糖类小分子由于处在清夜中而分离，沉淀物中所具有的脂肪通过有机溶剂抽提而清除,最后得到纯白色、晶状酪蛋白。措施:取新

10、鲜牛乳,用酸碱调到酪蛋白的等电点沉淀析出酪蛋白,然后洗涤，醇醚吸水至干燥得粉末称重,计算提取率。环节:保温调H沉淀离心洗涤干燥称量、试述凝胶成像系统操作时应注意的事项。答:）紫外凝胶照相时要避免B污染仪器，在紫外透射灯样品台上垫上蓝色和白色胶片，开关凝胶成像系统前面板那、操作GeneSnap软件之时都不可以戴手套。白光透射光源放置在紫外透射光源上面时要把蓝色和白色胶片取出。2)注意开机顺序，先开凝胶成像系统,再打开电脑进入Genna软件。3)在使用紫外光源照相的过程中，不可以打开凝胶成像系统前面板。5、若样品中具有蛋白质和核苷酸等杂质,如何排除干扰?答:用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）使蛋

11、白质变性，A通过RNase消化清除。6、体液血糖测定有哪些措施?答：测定血糖的措施常用的有三种:静脉血浆葡萄糖（G）,毛细血管全血葡萄糖（CB）和静脉全血葡萄糖（VBG）。7、D在电场中的迁移率取决于哪些因素?答:1） DNA的分子大小及构型： ？8不同构型DNA的移动速度顺序为：供价闭环N（coatlycloedcircular,ccDNA）直线A开环的双链环状DN。2)琼脂糖浓度:一种给定大小的线状DN分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相似。D电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的选择取决于DNA分子的大小。 t， jGh/ 4 G & Y）NA分子的构象：当DA分子处

12、在不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还和它自身构象有关。相似分子量的线状、开环和超螺旋NA在琼脂糖凝胶中移动速度是不同样的，超螺旋DN移动最快,而线状双链DNA移动最慢。 + * V !W9 a2 z;4)电源电压 :琼脂糖凝胶分离大分子D实验条件的研究成果表白，在低浓度、低电压下,分离效果较好。: 9 D3 Y$ o)! w: & D?4 （ R） 嵌入染料的存在 :荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状NA,使其刚性更强,还会使线状DN迁移率减少5。 6N L5B6)离子强度影响：电泳缓冲液的构成及其离子强度影响N的

13、电泳迁移率。8、琼脂糖凝胶有哪些注意事项？答:1)缓冲液的使用要对的，长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。2）琼脂糖的影响。3)凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致。4）样品加入量的多少。5）电泳系统的变化会影响DN的迁移,加入A原则参照物进行鉴定是必要的。)DNA样品中的盐浓度也影响NA的迁移率。）DA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度、迁移分子的形状及大小。9、考马斯亮蓝G-50法测定蛋白质含量的原理是什么?答：考马斯亮蓝G-50(Coassie brilli lue G250）染料，在游离状态下溶液呈棕红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色。蛋白质含量在0范畴内,蛋白质

14、-色素结合物在595n下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用比色法进行定量分析。考马斯亮蓝G-250法（Badford法）是比色法与色素法相结合的复合措施，简便快捷，敏捷度高,稳定性好,是一种较好的蛋白质常用分析措施。10、何谓Rf值?影响Rf值的重要因素是什么？答:Rf为氨基酸的比移值。影响纸层析迁移率f值的重要因素:1、样品自身的性质和构造;、溶剂的性质；3、PH值;4、温度;、滤纸性质。1、蛋白质分离和纯化的一般措施?答：重要有如下某些措施:透析及超滤法;丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀;电泳;层析;超速离心。12、如何对的选择核酸电泳批示剂?答:核酸电泳常用的批示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色。溴酚兰在碱性液体中呈紫兰色,在0%、%、.%和琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1、 0、0.2Kb和05Kb的双链线性DA片段大体相似.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在1%和14%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2b和1.6Kb的双链线性DA大体相似。染色剂: + c 1C, 核酸电泳后，需经染色后才干显现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,另一方面是银染色。！ + p- & i$ E8 _4 Y