《液相及液质分析方法学的开发及验证》由会员分享，可在线阅读，更多相关《液相及液质分析方法学的开发及验证（66页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、HPLC及HPLC/MS分析方法的开发及其在药物分析中的哂，HPLC及HPLC/MS法基于分离分析科学技术一小颗粒填料的色谱柱-以光谱、质谱技术作为检测手段专属性、分离效率及灵敏度-适用于广泛的色谱应用-适用于开发新方法-适用于现有方法的改进分析方法学的开发及验证质量源于设计(QualitybyDesign,QbD)准则实验设计方法学(DesignofExpeHment,DoE)方法验证(MethodValidation)：确保方法在样品分析的一定范围内中准确、重现、可靠、耐用性。实验室获得方法及运用过程方法开发分析条件的筛选（色谱柱，流动相,pH等）及优化柱温、流速等）方法验证方法确认方法转
2、移准确度，精密度，专属性，检测限,定量限，线性，范围，耐用性法定检验方法在使用环境中适用性评估（人员、仪器、样品、试剂）非法定检验方法在实验室之间传递的文件化过程实验室获得方法及运用过程方法验证用一个性质明确的物质来挑战建立的分析方法方法确认用一个确定方法来挑战现实的分析环境专属性，准确度，精密度，LOD,LOQ一般不需要进行线性，范围，耐用性实验方法验证的内容ICH、USPChPIIAppendixXIXA准确度(Accuracy)精密度(Precision)-重复性，重现性，中检精密度专属性(Specificity)检测限(LOD)定量限(LOQ)线性(Linearity)范围(Range
3、)耐用性(Robustness)系统适用性试验的内容-在分析未知样品之前或期间，检查系统以保证系统之性能达到规定的要求-塔板数，拖尾因子，分离度-确定重现性（RSD）系统适用性“样品”-主组份与预期副产物之混合物-系统适用性试验是色谱方法的一部分容量因子-k2 精密度/进样重复性 RSD5 分离度-Rs2（主峰与最近洗脱的色谱峰之间）拖尾因子-T2000类型1-主组份或活性成份定量分析方法类型2-杂质或降解化合物测定方法类型3-性能特点之确定分析方法如溶出度实验类型4-鉴别试验类型2类型4验证的内容类型1定量限度试验类型3鉴别试验准确度+*一精密度+十一专属性+*+检测限一+*定量限+*一线性
4、+*范围+*可能需要，具体与特定试验的性质有关。如何进行方法验证分析实验阶段-按照规定的实验计划或步骤通常需要3到5天-在不同操作条件下，进不同浓度的试样-原料及制剂皆需分析数据分析阶段-对分析结果进行统计学计算色谱结果是相对的用统计学分析的方法，可以客观地评估最终结果的真实变化方法验证步骤耐用性Min&Max实验参数2Min&Max实验参数3Min&Max实验参数4Min&Max线性浓度1：60%原料及制剂浓度2:80%原料及制剂浓度3：100%原料及制剂浓度4:120%原料及制剂浓度5:140%原料及制剂精密度I1-3天I六次重复,100%原料药检测限六次空白样品的基线噪音定量限浓度1原料
5、药浓度2原料药浓度3原料药浓度4原料药浓度5原料药I精密度I定量限原料药 每一方法验证的过程由80到100次分析组成 每次分析中，仅一种组分（一个色谱峰）即可产生7个相关结果（峰面积，保留时间，分离度等） 每一组分最终得到总共约700个数字 所有这些数字需要进行数学处理：一手工处理（计算器，ExcelMacros等）-专用的方法验证程序液相色谱的方法开发Information on Sample# of Compoundsy Structures, Solubility, pKay UV spectra etc.E DefineSeparation GoalAll peaks need to
6、be resolved?Accuracy, Precision, Run time, etc.Separation Modez Column Chemistry, Sample Pretreatment Selection of Detection ModeDetector; Detector ParametersPreliminary Run/OptimizeEstimate Best Separation Condition/Fine Tune for SubsequentExperimentMethodValidationProve assay meets intended use液相色
7、谱的方法开发根据分析物的化学性质选配色谱条件- 基于既往经验及思考进行合理猜测- 通常辅以资料参考- 询问同事“步进式”测试开发-基于前一测试结果设计下一步的测试条件，逐步进行系统性筛选策略-先按流动相pH、有机相和固定相的直接组合进行系统性筛选测试评估结果，选择最有效的条件组合-再进行方法优化梯度/温度MaximizedinUPLCSeparationsby:Ultra-lowdispersionsystemSmall400%UPLC技术加速方法开发过程能够在一个工作日内完成方法开发!对pH、有机相和色谱柱的组合条件进行系统性筛查高分辨亚二微米色谱柱技术确保高分辨分离在更快的同时分离能力不打
8、折扣可自动选择色谱柱和流动相四元溶剂或二元混合使方法开发更方便影响选择性的主要因素固定相有机溶剂流动相pH值梯度WatersTHisemeswwiursposmtxrUSPLColumnListingIftolOfanmAan-ta.gympflvlidn.LSAOMITYURLB84FWTFwhStBu1fMIDF，.fhy4轴a7&3S5JnnFRW.片中心xkftnoa玲5L20nJlDpavocaliacspvtxAn-3tK)pmanHnHOHafrgeGwCXKarCdiBVKallyUarAdtopomade*cnv*parbeVa-1SIo10pnnA-m，.Sreww22Pe
9、tStAixJilizus*ACXJnJlCBiC.l.il.fAJuWiUlLsKaDltriow-rrJUttnixnryifVffHIJu17uawnuuesicACMHWCFSuIJJGUnHSS13IJ/，g133.5.13AHM3/*FMjk?M33ID10仙修51t5J、pK.f!W466、gio二民MiAr方力q*客33U.s.rXX、母5turnOKISpMmOOS?一,5、,3RKXIXSTTXB%SH*fe.wUabcaoar-3DkWjnmJaan-bv.&dtolPtaWPgSa&dPatkhSobuklaS5.4*,SJR口ITWjnrtPFrsfctoM片nufc
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