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1、实验四茶叶中咖啡碱含量的测定(3学1、掌握咖啡碱的分离分析方法。2、理解实验特征与一般原 理。实验四 茶叶中咖啡碱含量的测定(3 学时)一、实验目的1、掌握茶氨酸的分离分析方法。2、理解实验特征与一般原理。二、实验原理 在茶叶水浸出物中除去叶蛋白、茶多酚等物质后 ,留下的生 物碱其测定波长为 274nm 者,均称茶叶咖啡碱。茶叶中的咖啡碱易溶于水,除去干扰物质后,用特定波长测定 其含量。三、实验仪器和用具 1、仪器：紫外分光光度仪；分析天平，感量 0.0001g。2、试剂和溶液：所用试剂均为分析纯(AR)，水为蒸馏水。碱性乙酸铅溶液：称取50g碱性乙酸铅(HG 3139681), 加水100m
2、L静置过夜。盐酸(GB 62277): 0.01N溶液取0.9mL 盐酸，用水稀释1L,摇匀。硫酸(GB 62577): 9N溶液取硫酸250mL用水稀释至1L,摇匀。咖啡碱标准液: 称取 100mg 咖啡碱(纯度不低于 99)溶于 100mL 水中,作为母液,准确吸取 5mL 加水至 100mL 作为工作液 (1mL含咖啡碱0.05mg)。四、操作方法1、取样：按GB 830287茶 取样的规定取样。2、试样的制备：按GB 830387茶磨碎试样的制备及其 干物质含量测定的规定,制备试样。3、测定步骤：(1) 试液的制备：称取 3g 准确至0.00 1g )磨碎试样(4.2) 于500m L
3、锥形瓶中，加沸蒸馏水450m L,立即移人沸水浴中， 浸提45 min(每隔10 min摇动一次、。浸提完毕后立即趁热减压 过滤。滤液移入500 ml容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤2- 3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后用蒸馏水稀释至刻度。(2) 测定：用移液管准确吸取试液(4.3.1)20mL移入250mL 容量瓶中，加入10mL0.01N盐酸(3.2)和2mL碱性乙酸铅溶液(3.1), 用水准确稀释至刻度 ,充分混匀 ,静置澄清过滤 ,准确吸取滤液 50mL注入100mL容量瓶中加入0.2m19N硫酸溶液(3.3)，加水稀 释至刻度,混匀,静置澄清过滤。用 10mm 比色杯,在波长
4、274nm 处以试剂空白溶液作参比测定吸光度(A)。(3) 咖啡碱标准曲线的制作：分别吸取 0、5、10、15、20、 25、30mL 咖啡碱工作液 (3.4)于一组 100mL 容量瓶中 ,各加入 4.0mL 盐酸溶液(3.2),用水稀释至刻度,混匀,用 10mm 石英比色杯, 在紫外分光光度仪上选择狭缝0.10.18mm,在波长274nm处，以 试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。将测得的吸光度与对应的 咖啡碱浓度绘制标准曲线。1、掌握咖啡碱的分离分析方法。 2、理解实验特征与一般原 理。五、结果计算1、计算方法和公式：茶叶中咖啡碱含量,以干态质量百分率 表示,按下式计算：咖啡碱() = C L* *-*M m 100式中:C根据试样测得的吸光度(A),从咖啡碱标准曲线上 查得的咖啡碱相应含量,mg/mL;L1 试液总量,mL;M 试样 用量,g;m 试样干物质含量百分率。六、实验报告a使用的方法;b.测定的结果(取小数点后一位);c.本标准 中末规定的或另加的操作;d.试样的名称和产地;e试验日期，操 作人员。
