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1、磁珠法尿液基因组DNA提取试剂盒MagBeads Urine DNA Extraction Kit【目 录号】UDE-5010、UDE-5030、UDE-5100【运输条件】225C；【保存条件】磁珠分散液28C，蛋白酶K -20C，其它组分室温;试剂盒组成】Kit Component试剂盒组成 Magnetic Beads 磁珠悬浮液 UDE Buffer ML 裂解液 Wash Buffer 1 清洗液1UDE-5010(100T)7.5mL40mL60mLUDE-5030(300T)UDE-5100(1000T)22.5mL75mL120mL400mL180mL600mL Protein
2、ase K蛋白酶K Elute Buffer洗脱液2mL6mL20mL10mL30mL100mL【注意事项】1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；2. 蛋白酶K长期不使用，请置于-20C保存，融化后4C保存，并尽快使用；3. 尿液样本应避免反复冻融，否则会导致核酸提取得量降低；4. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并按照操作指南建议操作。【产品简介】本试剂盒适用于从新鲜或冷冻尿液样本中提取基因组DNA，在裂解液（UDE Buffer ML）环境中，基因组DNA特异性的结合于磁珠表面，经过清洗和洗脱等步骤之后，可得 到高纯度的基因组DNA产物，O
3、D260/280的比值在1.71.9之间，OD260/230的比值大于1.8,完整性好，整个操作过程简单、快速且高效。所得产物可直接用作PCR模板、杂交 等下游分子生物学实验。本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪使用，实现自动化、咼通 量操作。【试剂盒说明】样本类型样本量DNA提取范围浓缩尿液1mL015pg自备仪器、耗材和试剂】手动版涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、EP管（2.0mL）、磁力架（适用于EP管）、无水乙 醇、异丙醇、磷酸缓冲盐溶液（pH值7.4 ）。仪器自动版涡旋混合仪、水浴锅或金属浴、核酸提取仪、96孔方孔圆底板、EP管（2.0mL）、无 水乙醇、异丙醇，磷酸缓
4、冲盐溶液（pH值7.4）。【手动版操作步骤】1尿样前处理1）取10.015.0mL原尿，室温、5000rpm离心10min,吸弃上清液至剩余约1mL液体；2）将上述样本转移至2.0mL EP管中，室温、10000rpm离心2min,吸弃上清液；3）向EP管中加入500L PBS溶液，颠倒混匀3次，室温、10000rpm离心2min,吸 弃上清液。2尿样裂解向EP管中加入400pL裂解液和20pL蛋白酶K,涡旋振荡充分混匀内容物。置于58C环 境中裂解35mi n，每隔5mi n颠倒混匀一次。3核酸与磁珠结合向裂解完毕EP管中加入75pL磁珠悬浮液（提前摇匀）和400pL异丙醇，涡旋振荡 10m
5、in。4磁性分离将EP管置于磁力架上静置约20s至磁珠吸附完全，如EP管内盖有残留磁珠，可保持EP 管在磁力架上，上下颠倒23次，磁珠可完全被磁力架吸附。保持EP管于磁力架上，吸弃 上清液，期间避免接触磁珠。5清洗1向EP管中加入600pL清洗液1,将EP管从磁力架上取下，剧烈震摇或吹打使磁珠充分 分散，涡旋震荡2mi n，磁性分离（参照步骤4操作）。注：若磁珠出现团聚现象，为NA含量多引起，不影响核酸提取效果。6清洗2使用600pL 80%乙醇，参照步骤5操作2次。 7干燥除醇将清洗完毕并除尽上清液后的EP管置于磁力架上，连同磁力架一起放入45C真空干燥 箱中，干燥约10mi n至无明显乙醇
6、味。注：若无真空干燥箱，也可将P管置于通风橱通风或电风扇直吹约0min，具体时间以除醇完全为 原则。8洗脱取出EP管，加入100pL洗脱液，移液枪吹打使磁珠与洗脱液充分混匀，将EP管于58C 环境中洗脱10mi n，每隔3mi n涡旋振荡30s，确保磁珠与核酸洗脱完全。9核酸转移将EP管置于磁力架上静置20s至磁珠吸附完全，用移液枪将洗脱液转移至另一干净EP 管中，提取步骤完毕，此时可以弃去磁珠。【仪器自动版操作步骤】以下操作步骤以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提 取工作。1准备 96孔板参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂：样品位1、72、83、94、
7、105、116、12试剂磁珠悬浮液：75pL80%乙醇：200pL异丙醇400pL清洗液1600pL80%乙醇600pL80%乙醇600pL洗脱液100pL注：1）吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀2）为提高效率建议使用排7枪进行操作。2尿样前处理1）取10.015.0mL原尿，室温、5000rpm离心10min,吸弃上清液至剩余约1mL液体;2）将上述样本转移至2.0mL EP管中，室温、10000rpm离心2min,吸弃上清液；3）向EP管中加入500pL PBS溶液，颠倒混匀3次，室温、10000rpm离心2min,吸 弃上清液。3尿样裂解向EP管中加入400pL裂解液和20pL蛋白酶K,涡旋
8、振荡充分混匀内容物。58C加热裂 解35mi n,每隔5mi n颠倒混匀一次。裂解完毕，室温放置5mi n,然后室温、12000rp m离 心1mi n,待用。4上机提取将步骤3离心完毕裂解液全部转移至96孔板第2/8列孔位中；将96孔板置于核酸提取仪中，插入磁棒套；打开仪器操作软件，调用“尿液DNA提取程序”，并运行程序。“尿液DNA提取程序”参数设置如下，如仪器上程序参数与说明书不一致，请以说明书为准：步骤编号孔位运行类型振荡时间 （秒）分离时间（秒）挥发时间 （秒）振荡幅度振荡强度一组温度（C）二组温度（C）三组温度（C）四组温度（C）11磁珠转移1503强000022DNA结合120004强000032DNA结合480204中000043清洗1240505强000054清洗2180505强000065清洗312053005强000076DNA洗脱3602002中6060606083弃磁珠10005强00005核酸转移程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程 完毕,此时可弃去96孔板。（1702修订版）* 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。版权声明： 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南所有权利。版本： V201702.221
