阿司匹林含量测定方法综述

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1、阿司匹林原料和制剂在体内及体外含量测定方法蓝星宇 药学 1101 31104026摘要 阿司匹林,又名：2-(乙酰氧基)苯甲酸或乙酰水杨酸，是一种历史悠久， 应用最早，最广和最普通的解热阵痛药。 诞生于 1899 年 3 月 6 日。用于治感 冒、发热、头痛、牙痛、关节痛、风湿病，还能抑制血小板聚集，用于预防和治 疗缺血性、心绞痛、心肺梗塞、脑血栓形成，也可提高植物的出芽率，应用于血 管形成术及旁路移植术也有效。中国药典(2010 版)中阿司匹林原料药及其制 剂的含量测定采用酸、碱滴定法，而近几十年来，随着色谱技术、光谱技术、电 泳技术等的飞快发展，阿司匹林的含量测定方法有了突破与发展。该文主

2、要分析 阿司匹林原料及以阿司匹林为主药的多种制剂在体内和体外的含量测定方法关键词 阿司匹林 含量测定 制剂正文1. 阿司匹林原料药在体内含量测定方法反相高效液相色谱法 色谱条件:填充剂十八烷基硅烷键合硅胶(5um)；色谱柱4.6mmX 150mm；流动相甲醇-水-正丁醇-磷酸(300:200:10:0.05)；检测波长237nm；柱温：室温。 对照品溶液制备：精密称取阿司匹林对照品适量，加甲醇溶解并制成浓度分别为 0.5mg/ml 样品处理：取血清样品0.1ml，置于1.5ml具塞离心管中，加入50ul高氯酸(30%)， 再加不同浓度的阿司匹林及内标溶液适量，使浓度均为10ug/ml.涡旋振荡

3、2min， 于 10000r/min 离心 5min。 测定方法：取上清液20“进样，用峰面积计算浓度CX。计算公式：CX=( CRX AX) /AR（Cr为对照品溶液的浓度（ug/ml）； AX和Ar分别为样品溶液与对照品溶液 中阿司匹林的峰面积）2. 阿司匹林原料药在体外含量测定方法1）直接滴定法直接滴定法即将阿司匹林溶于中性乙醇、甲醇或丙酮中，以酚酞、酚红或酚 硫酞为指示剂，用氢氧化钠滴定液直接滴定。 阿司匹林含量测定的反应原理：COON aCOOHOCOC 出* NaOH 测定方法:取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示剂显中性）20ml溶解 后，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化

4、钠滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml氢氧化钠滴 定液（0.1mol/L）相当于 18.02mg 的 C9H8O4o 计算公式：NaOH 滴定度 T=0.1 X 180.16X(1/1)=18.02 (mg/ml)F=M （实际）N（规定）含量（） = （VXTXF） /WX100%（V为滴定液体积（ml）； T为氢氧化钠的滴定度,W为供试品称样量（g）；F为滴定液浓度校正因子（F=滴定液实际浓度/滴定液规定浓度）2）水解后剩余量滴定法利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解的特性，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯键水解后，再用硫酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠滴定液。反应原理:亠 2Na

5、OHA-CHaCOONa 测定方法：取本品1.5g，精密称定，加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L) 50.0ml,混合， 缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并 将滴定结果用空白试验校正。 计算公式：从上述反应式可知：阿司匹林与硫酸的摩尔比为1:1硫酸的 T=0.25X(l/l)X180.16=45.04(mg/ml)含量() =(V0-V)XFXT)/WX100%(Vo为空白试验消耗硫酸滴定液的体积(ml)； V为样品测定时消耗硫酸滴 定液的体积(ml)； W为阿司匹林样品的称取量(g)； F为硫酸的浓度校正因数; T 为硫酸溶液的滴定度)3. 阿

6、司匹林制剂药在体内含量测定方法高效液相色谱法 高效液相色谱法可用于小剂量阿司匹林制剂的体内研究。 色谱条件：色谱柱Inertsil C18(250mm X4. 6mm， 5um)；流动相甲醇 一2. 5%醋酸(45： 55, v/v)；柱温 35C ；流速 1. 2 ml/min；检测波长 237nm。 溶液的配制：水杨酸标准储备液：精密称取厄贝沙坦标准品10. 00mg，置100mL容量瓶中， 用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即为100 g/ml的水杨酸标准储备液，并用甲醇稀 释成不同浓度的系列溶液。 标准曲线的建立：分别精密吸取适量水杨酸溶液，加入空白血浆，配制成浓度为0.3、0.5、 l、2

7、、4、6、8ug/ml的血浆样品，精密移取血浆样品0. 5ml于10 ml离心管内， 加入100ul磷酸，混匀。加入2. 5 ml乙醚，涡旋提取3min，4000r/min离心10 min， 取上清液2. 0ml，37C水浴中氮气流吹干。残留物用100ul流动相溶解，取20ul 进样分析。以样品峰面积(y)对血药浓度(c)作线性回归，得回归方程Y=78038c-18518.r=0.9996。血浆样品的处理：精密移取血浆0. 5ml于10 ml离心管内，加入100ul磷酸，混匀。加入2. 5 ml乙醚，涡旋提取3min, 4000r/min离心10 min,取上清液2. 0ml, 37C水浴中氮

8、气流吹干。残留物用100 ul流动相溶解。 测定方法：取20ul进样，将血浆样品的峰面积Y代入标准曲线方程，计算样品浓度C。4. 阿司匹林制剂药在体外含量测定方法1）两步滴定法因阿司匹林片剂中除存在其水解产物水杨酸及醋酸外，在制剂工艺中添加了 抑制阿司匹林水解的稳定剂酒石酸或枸橼酸，因而采用此法。两步滴定法系指测定过程分两步进行：第一步中和制剂中的酸性水解产物和 酸性稳定剂（同时中和阿司匹林的游离羧基），以消除其干扰；第二步水解与滴 定，即水解后剩余量滴定法。 阿司匹林片含量测定的原理：中和：NsOH*COONa-h2o水解与滴定:COONaCOONa+ CH,COONa2 NaOH + H?

9、SQ Na2SO4+ 2 H2O 测定方法：中和：取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量（约相当于阿司 匹林0.3g），置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示剂显中性）20ml，振摇使阿 司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/ml）至溶液显 粉红色。此时中和了供试品中存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐。水解与滴定：在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化钠滴定液（O.lmol/ml） 40ml，置水浴上加热15分钟并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液 （0.05mol/m 1）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 计算公式：从上述反应式可知：阿司匹林与硫酸的摩尔

10、比为 2： 1硫酸的 T=0.05X（2/1）X 180.16=18.02 （mg/ml）标示量%=（V0-V）XFXTXW（平均）/ （WX标示量）X100%（Vo为空白试验消耗硫酸滴定液的体积（ml）； V为样品测定时消耗硫酸滴 定液的体积（ml）； F为硫酸滴定液的浓度校正因数；T为硫酸的滴定度（mg/ml）； W为供试品片粉的取样量（g）； W （平均）为供试品的平均片重（g）；标示量为 片剂的规格（mg/片）2）柱分配色谱-紫外分光光度法采用柱色谱分离法消除阿司匹林胶囊和栓剂中辅料及降解产物的干扰。以阿 司匹林胶囊柱分配色谱-紫外分光光度法为例： 色谱柱的制备：于玻璃柱（20cm X

11、 2.5cm）下端塞入少量玻璃棉，装入硅藻 土 3g和新制碳酸氢钠（1 12）2m1的混合填充剂。 对照溶液的制备：取阿司匹林对照品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中， 加冰醋酸0.5ml，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，混匀。精密量取5ml，置100ml 量瓶中，用冰醋酸三氯甲烷（1 100）稀释至刻度，混匀。制成每1ml中约50ug 的溶液。 供试品的制备：取胶囊20粒，尽可能完全倾出内容物，精密称定，研细, 混匀；取细粉适量（相当于阿司匹林50mg），精密称定，置50ml量瓶中，加盐酸 甲醇溶液（150） 1ml，加三氯甲烷稀释至刻度，混匀。精密量取5ml,移至色 谱柱填充剂上，用三氯甲

12、烷 5ml、25ml 相继洗涤，弃去洗液，用冰醋酸三氯甲 烷溶液（150） 10ml洗涤后，再用冰醋酸三氯甲烷溶液（1 100） 85ml洗脱， 收集洗脱于100ml量瓶中，并用冰醋酸三氯甲烷溶液（1 100）稀释至刻度，混 匀。 测定法：用1cm吸收池，以三氯甲烷为空白，立即于最大吸收波长280nm 处测定对照溶液和供试溶液的吸光度。 计算公式：阿司匹林（mg） =CrX（Ax/Ar）（Cr为阿司匹林对照溶液浓度（ug/ml）； Ax和Ar分别为供试溶液和对照溶 液的吸光度）3）离子抑制-反相高效液相色谱法典型芳酸类非甾体抗炎药物制剂大多采用离子抑制-反相高效液相色谱法测 定，用外标法计算含

13、量。以阿司匹林栓的含量测定为例，方法如下： 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈 -四氢咲喃-冰醋酸-水（20： 5： 5： 70）为流动相；检测波长为276nm。理论板数 按阿司匹林峰计算不低于3000，阿司匹林峰与水杨酸峰的分离度应符合要求。 测定方法：取本品5粒，精密称定，置小烧杯中，在4050C水浴上微温 熔融，在不断搅拌下冷却至室温，精密称取适量（约相当于阿司匹林0.1g）,置 50ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却1小时， 取出，迅速滤过，取续滤液作为供试品贮备液。精密量取供试品贮备液5ml,置 100ml量瓶中，用1%冰醋

14、酸的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ul，注入 液相色谱仪，记录色谱图；另取阿司匹林对照品，精密称定，加1%冰醋酸的甲 醇溶液振摇使溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，同法测定，按外 标法以峰面积计算，即得。 计算公式：标示量= （ CrX（Ax/Ar） XDXW（平均）/（WX标示量）X 100%（Cr为对照品溶液浓度（mg/ml）； Ax和Ar分别为供试品溶液和对照品溶 液的峰面积；D为稀释体积（ml，D=50X 100/5=1000）； W为栓剂熔融物取样量 （g）; W（平均）为栓剂平均粒重（g）；标示量为栓剂规格（mg/支） 4）可见分光光度法以阿司匹林肠溶片为例

15、原理： 阿司匹林肠溶片的主要成分为乙酰水杨酸，分子中酯基在碱性溶液中可与羟 胺反应生成羟肟酸;后者在酸性条件下与三氯化铁形成酒红色的羟肟酸铁，最大 吸收波长为520nm,在一定浓度范围内，吸光度呈线性关系，可测出阿司匹林药 片中乙酰水杨酸的含量。 标准溶液系列和样品溶液的配制：分别取0.5g L-1乙酰水杨酸标准溶液O.OOmL（空白溶液），0.50mL, l.OOmL, 1.50mL, 2.00mL和阿司匹林样品溶液l.OOmL置于25mL容量瓶中，分别加入 7%盐酸羟胺乙醇液1.00ml, 2molL-lNaOHl.OOm 1，放置3分钟，再分别加入 4mo1L-1HC1和10%FeC13各1.00mL，加水至刻度，摇匀。 标准曲线的绘制：标准溶液系列和样品溶液放置10分钟后，用空白溶液作对照，在520nm处 测定吸光度。以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标作图，绘制出标准曲线。 样品的测定： 通过测定样品的吸光度，从标准曲线上，找出阿司匹林样品稀释溶液的浓度C （g/L）,计算公式：原阿司匹林样品溶液的浓度=CX25（C为阿司匹林样品稀释溶液的浓度（g/L）； 25为稀释倍数）5）差示分光光度法