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1、发酵现象实验报告探究酵母菌在无氧条件下发酵作用产生二氧化碳和酒精。试验仪器及用品：1. 试验仪器：带胶塞和胶管的锥形瓶、小气球、Y形管、大烧杯、 温度计、试管、比色板、小烧杯、玻璃棒。2. 试验用品：白糖100g、一小包干酵母约30g、澄清的 石灰水、酒精、橙色的重铬酸钾溶液。检测酒精的试剂。0.5ml的浓 硫酸溶有0.1g重铬酸钾，体积分数为95%97%，在酸性条件下与酒 精发生化学反应由橙色变为灰绿色试验装置及说明：澄清的石灰水可以检测气体中有二氧化碳，重铬酸钾溶液遇到酒 精由橙色变为灰绿色。试验操作：1. 将100ml） 40笆温水倒入锥形瓶，再用汤匙将一大勺糖及适量干酵母加进来，搅拌匀
2、称后，将锥形瓶放在大烧杯中水浴保温温度|I i 保持在3040笆左右。先让酵母菌进行有氧呼吸，是酵母菌快速|I繁殖，并把葡萄糖分解成二氧化碳和水。）II i2. 观测到酵母菌培育液有气泡产生，塞上橡胶塞这样做既可I以避开气体散失，影响后面试验效果，也为酒精的产生提供保障）。!iIi过一段时间后就可看到干瘪的气球渐渐膨胀起来了。酵母菌的无氧I i 1呼吸）IiI i3. 将夹子打开，挤压气球，使瓶内产生的气体缓缓通过胶管导！I i1 I I 入试管内的澄清石灰水中，石灰水变浑浊了（检测气体中有二氧化碳iI i 原理：二氧化碳遇石灰水，石灰水变浑浊）。II I ii4. 将重铬酸钾试剂分别滴在比色
3、板的凹槽内，并分别标注1号I iI2号作对比）、3号。在3号试剂上滴1滴酒精，在1号试剂上滴1|I I i i滴酵母菌发酵液。发觉1号和3号都由橙色变成了灰绿色。|II 试验创新点及意义：I!通过上述试验，让我们对酵母菌“发酵现象”所需要的原料、IiI条件及产生的物质都有了较直观的感受，比较简单理解课本上阐II述的“酵母菌可以把葡萄糖转化为酒精和二氧化碳”等有关内容，而IiI且印象深刻。使我们养成很好的节省意识。Ii试验现象：iiI1.闻到了发酵后非常的甜酒的芳香气味。i|2.详见【试验操作4】ii|3.澄清的石灰水变浑浊iI|发酵现象试验报告范文2iiI一、试验目的iI1掌控摇床发酵法制备糖
4、化酶的工艺流程及操作方法IiI2了解利用黑曲霉菌菌种发酵时的生长条件及考前须知IIiI3娴熟掌控试验过程中的无菌操作和培育条件的选择Ii二、试验仪器及试剂菌种：黑曲霉I i仪器：锥形瓶500ml）、移液管、恒温水浴锅、秒表、50mL比|I色管、牛皮纸、纱布8层、pH计。II i 药品：三水乙酸钠、冰醋酸、硫代硫酸钠、碘、氢氧化钠、硫II酸、可溶性淀粉、玉米粉、豆饼粉、麸皮!iI i 三、试验原理Ii1摇瓶发酵是试验室常用的通风发酵方法，通过将装有液体发酵I iI i 培育基的摇瓶放在摇床上振荡培育，以满意微生物生长、繁殖及产生I i1 I I 很多代谢产物对氧的需求。它是试验室筛选好气性菌种，
5、以及摸索种IiI i 子培育工艺与发酵工艺的常用方法。ii i葡萄糖淀粉酶EC3.2.1.3系统名为淀粉a-1,4-葡聚糖葡萄I i I iI糖水解酶，俗称糖化酶，是国内产量最大的酶品种。糖化酶对淀粉分I I I i i子的作用是从非还原末端切开a -1,4键，也能切开a -1,3键和a-1,6 |I键，产生葡萄糖。!糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原末端开始，Ii|分解a-1,4-葡萄糖昔键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次II碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液IiI滴定，计算酶活力。I!四、试验步骤iiI 1.培育步骤iiI1.1种子培育基制备
6、及灭菌Iii|将新鲜土豆去皮切块，称取200300 g 土豆块放入500 mL烧杯iI|中，加入肯定量水，在电炉上煮沸至土豆块熟透，用120目纱布过滤，iiI滤渣反复用肯定量水清洗、过滤2次，合并各次滤液且定容至1000 mLiiI即得土豆汁。取肯定体积的土豆汁，在其中加入5%的蔗糖，溶解摇匀Ii| 并调pH至5.5,即得种子培育基。将适量种子培育基倒入锥形瓶250ml，IIiiI用纱布塞塞住管口，并用牛皮纸包扎，置灭菌锅中，于121笆下灭菌III 30min。待灭菌完毕，冷却取出。1.2发酵培育基制备及灭菌II i 1 I 取6只500mL摇瓶，分别按装液量100、200、300mL配制培育
7、|I基玉米粉6%、豆饼粉2%、麸皮1%，加水后略微摇动，使原料潮|I i 湿，浸入水中。用8层纱布包扎瓶口，再加牛皮纸包扎。置灭菌锅中，II于121笆下灭菌30min。|iI i 1.3发酵培育基接种：将已生长好的菌种，在无菌条件下，根| i1据10%的接 量8%-12%接种到发酵培育基上。iiI i1.4发酵培育基发酵：将摇瓶固定在摇床上，培育温度为31笆，| i1 I I 转速为120r/min，培育时间96h。显微镜观测菌丝形态，用试纸测发| iI i 酵液pH，测定酶活力。摇瓶培育时观测各种摇瓶机的结构。|i i2. 糖化酶活力测定1I iI2.1待测酶液的制备：|I I ii精确吸取
8、液体酶1.00mL，先用少量的乙酸缓冲液溶解，并用玻|II 璃棒捣研，将上清液当心倾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量缓冲液，I标准溶液的浓度，mol/L； n为稀释倍数。I i五、 数据分析II比较不同装液量下的菌体形态特征、酶活力，将结果填入下表：II i装液量/mL|I指标IiI i酶活力Ii 1phiI ii i菌体特征 100 420u/mL 4.2 200 510u/mL 4.1 300 570u/mL 3.8 i 1I i 涌现球状的白色的菌丝团，瓶壁上涌现黑丝的孢子和菌丝IiI i六、结论Ii i1. 不同的装液量对酶活力的影响是随着装液量的增加呈现上升1I iI 的趋势，但是酶活
9、力改变不大，并且酶活力不高，与其他组数据相比II Ii i 接种量跟酶活力关iI!最末全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度估量酶活力在I i|100250u/mL范围内，摇匀。通过4层纱布过滤，滤液供测定用。II2.2酶活力测定：I i|于甲、乙两支50mL比色管中，分别加入可溶性淀粉溶液25mLI|及缓冲液5mL，摇匀后，于40笆恒温水浴中预热5min。在甲管样品ii|中加入待测酶液2mL，立即摇匀，在此温度下精确反应30min，立即各 iI加入氢氧化钠溶液0.2mL，摇匀，将两管取出快速冷却，并于乙管空 ii|白中补加待测酶液2mL。吸取上述反应液与空白液各5mL，分别置于iI I碘量瓶中
10、，精确加入碘溶液10mL，再加氢氧化钠溶液15mL，摇匀塞紧，ii|于暗处反应15min。取出，加硫酸溶液2mL，马上用硫代硫酸钠标准液iI滴定，直至蓝色刚好消逝为其终点。Ii|2.3酶活力计算：I I i|样品酶活力u/g或u/mL=579.9X(A-B)cXn式中：A与B分II|别为空白、样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；c为硫代硫酸钠I I iI第*.共页.2. 菌体特征在锥形瓶的瓶壁上涌现白色的菌丝，在培育基中也|苯甲酸钠、EDTA钠、氯化钠三、试验原理酵母菌是兼性厌氧型真菌，喜爱含糖的环境，有氧时将葡萄糖 分解成CO和水，无氧时将葡萄糖分解成酒精和二氧化碳，同时都释放 出能量生
11、物传感器由生物识别元件和信号转换器组成，能够选择性地 对样品中的待测物发出相应，通过生物识别系统和电化学或其他传感 器把待测物质的浓度转为电信号，依据电信号的大小定量测出待测物 质的浓度。生物传感器是应用生物活性材料如酶、蛋白质、DNA、抗 体、抗原、生物膜等与物理或化学换能器有机结合的一门交叉学科， 是进展生物技术必不可少的一种先进的检测方法与监控方法，也是物 质在分子水平的快速、微量分析方法四、试验步骤1.种子培育基YEPD，g/L：称取酵母膏10g、胰蛋白胨20g、涌现了丝球3. 菌种新陈代谢的旺盛二氧化碳的释放增加，使pH值渐渐下降， 最终使培育基的pH下降至3.8左右。发酵现象试验报
12、告范文3一、试验目的1. 测定并绘制生长曲线、底物消耗曲线和产物形成曲线2. 了解发酵过程中葡萄糖的利用、菌体生长和产物生成的相互关系3. 初步学会菌体生长、底物消耗和产物生成有关发酵参数的求解二、试验仪器及试剂菌种：酿酒酵母仪器：锥形瓶250ml、移液管、pH计、生物传感仪、分析天 平药品：酵母膏、胰蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、第_5 .页.共.6.页.|葡萄糖20g，加蒸馏水溶解，调整pH 5.0左右，并定容至1000ml。Ii|2.发酵培育基g/L：称取酵母膏10g，胰蛋白胨20g，葡萄糖I|100g加蒸馏水溶解，调整pH至5.0左右，定容至1000ml，分装10个Ii| 锥
13、形瓶250ml封口 121笆，30min灭菌。I|3.种子培育：将活化好的种子培育液，用移液管移去10ml接种ii| 于灭菌YEPD液体培育基中，于30笆、120 r/min全温摇瓶柜中培育i|24 h左右，观测种子液的色泽、气味与形态等基本状况。ii|4.发酵方法：将培育好的种子液按8-12%的接种比例，接种于发iI|酵培育基中，置于30笆、120 r/min全温摇瓶柜中培育96 h。iiI5.过程取样：发酵培育基接种发酵后，每隔8小时取样，移取ii 45ml菌液至离心试管中3800r/min离心，上清液取出分析，菌泥放置iiI烘箱烘干，分析菌体生物量、残余葡萄糖浓度与酒精生成量，并以此为IIii基础数据计算参数干重DCW，另一份稀释成肯定的浓度于630 nm下测定吸光值OD |Ii1I 值，得到标准曲线为DCW=3.87XODR=0.996。再以相同方法测|I得样品的OD值，按标准曲线计算出菌体干重。iI i 7.还原糖的测定与乙醇的测定：运用生物传感仪测定糖类和酒|I精的含量!iI i五、数据分析I6.生物量的测定：取等量的两份发酵液，一份由烘干法测得菌体
