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1、分子医医学实验验学实验指导导供口腔、护护理、药药学各专专业用 （第第一版）佛山科学学技术学学院医学学院编20088年6月编 写写 说说 明明分子医医学实验验学是一门集集生物化化学、免免疫学、生生物化学学技术和和分子生生物学基基本实验验、科研研探索和和医学应应用于一一体的全全新的综综合性实实验课程程。其实实验技术术反映现现代生物物医学发发展趋势势。分分子医学学实验是基础医学实验教学的重要组成部分，是医学各本科专业的专业基础必修课。课程内容包括分子医学基本实验技术、基础实验及综合和设计性实验等部分。课程的主要目的一是强化基础知识教育，突出基本技能训练，是使学生能掌握分子医学的经典理论和基本实验，二
2、是培养学生综合性素质，开发学生的科研潜能和创新思维。开设分子医学实验学的目的在于：1、验证和巩固理论知识，加深对理论知识的全面理解，加强记忆。2、通过实验，掌握分子医学实验学的基本操作技术，掌握层析法,电泳法,分光光度法和生物大分子制备等常用的实验方法的基本原理，熟悉分子医学实验的一般知识。3、培养学生观察、比较、思考及分析问题和解决问题的能力，使学生具备一定的动手操作能力、创新能力培养学生科学、严谨、认真工作态度及理论联系实际、实事求是的工作作风。本实验指指导111个实验验项目涵涵盖了分分子医学学实验学学中沉淀淀、离心心、层析析、电泳泳、分光光光度测测定等分分子医学学实验的的基本方方法，可可
3、依实验验所需时时间作合合理组合合实验，根根据实验验条件和和教学安安排适时时开课。实 验 室 规规 则1实验验前必须须预习实实验指导导和相关关理论知知识，明明确实验验目的、原原理、预预期的实实验结果果、操作作关键步步骤及注注意事项项，计划划安排实实验工作作时间。2 穿白大衣衣准时进进入实验验室，保保持实验验室整洁洁安静，不不得谈笑笑和大声说话话，不准准做与实实验无关关的事情情。3实验验时应持持“三严”作风态度严严谨、思思维严密密、操作作严格。实实验中认认真、仔仔细观察察实验过过程中的的实验现现象和结结果，及及时如实实的做好好原始记记录。实实验失败败须重做做。根据据实验结结果进行行科学分分析，写写
4、好实验验报告，交交指导教教师批阅阅。4注意意安全，不不得擅自自离开。使使用易燃燃、易爆爆、有毒毒试剂和和材料进进行实验验时，应应严格遵遵守操作作规程，防防止火灾灾、中毒毒、污染染、触电电等事故故发生，一一旦发生生，果断断处理并并立即报报告教师师5 爱护公物物，防止止损坏，若若有损坏坏及时报报告原因因并登记记。公用用仪器就原处处使用，了了解使用用方法及及遵守操操作规程程，使用用后必须须在仪器器登记本本上登记记并签名名。公用用试剂就就近量取取、用毕毕随时放放回原处处。要节节约水、电电、煤气气及试剂剂药品6实验验结束，洗洗净器材材，清整整实验室室，打扫扫卫生，检检查门、窗窗、水、电电和煤气气的安全全
5、。目 录录实验一 实验验室基本本知识和和技术 （5） 实验二 蛋白白质浓度度测定（双双缩脲法法） （21）实验三 醋酸纤纤维薄膜膜电泳分分离血清清蛋白质质 （233）附：电泳泳技术 （27）实验四血血浆清蛋白白的分离离纯化与与鉴定（35）附：层析析技术 （337）实验五 胰岛岛素及肾肾上腺素素对血糖糖浓度的的影响 （45）实验六 脱氧氧核糖核核酸（DDNA）的的提取及及成分鉴鉴定（48）实验七质质粒DNNA提取取与纯化化 （511）实验八DDNA重重组质粒粒的设计计与构建建 （554）实验九凝凝集试验验 （61）实验十 肝功功能组合合实验 （665）附1：血血清丙氨氨酸氨基基转移酶酶（ALLT
6、）测测定附2：酶酶联免疫疫吸附试试验（EELISSA）实验十一一 免免疫血清清的制备备 （711）实验一 实验验室基本本知识和和技术 （Thee baasicc knnowlledgge aand teechnnoloogy of labb）【目的和和要求】1 掌握各种种基本的的生化技技术、常常用仪器器的分类类、使用用及注意意事项2 熟悉生化化实验室室规则3清点点洗刷实实验用具具。【实验内内容】1 实验室规规则2 生物化学学实验各各种基本本技术3 722型型分光光光度计的的使用4 实验记录录和实验验报告【仪器、设设备】1.烧杯杯2.试管管3.刻度度吸量管管4.离心心管5.滴管管6.搅棒棒7.枪
7、式式移液器器及其配配适吸头头8.混匀匀器9.恒温温水浴箱箱10.离离心机117722型型分光光光度计，7721型型分光光光度计第一部分分 基本本知识与与操作一、常用用的玻璃璃仪器（一） 分类：常常用的玻玻璃仪器器分类有有量器和和容器，“量器”主要包括：量筒、量杯、容量瓶、吸管管等。“容器”主要有有烧瓶、烧烧杯、试试管、试试剂瓶、离离心管等等。量器器有量入入式和量量出式两两种形式式。“量入式式”用“”、“”、“”表示，定定量标记记由下往往上递增增，测量量注入量量器中的的液体；“量出式式”用“TD”、“A”表示；定量标标记由上上而下递递增；测测量从量量器中倾倾出的液液体。（二）玻玻璃仪器器的洗涤涤
8、、干燥燥1、洗涤涤液：洗洁精精，肥皂皂水，洗洗衣粉。玻璃仪仪器专用用洗涤液液：主要要成份为为中性稀稀氯氧化化剂，上上海日化化研究所所出品2、洗涤涤的要求求与步骤骤：要求：洁洁净的玻玻璃器皿皿表面应应不挂任任何水滴滴。步骤： 不净净的器皿皿洗衣粉或或肥皂水水刷洗自来水冲冲净达到要求求？ 是 浸入洗洗液(数数小时至至过夜) 自来来水冲净净 蒸馏水水涮洗223次(其目的的是去除除自来水水中的杂杂质，故故应少量量多次，全全面充分分)烤干或晾晾干、备备用注意：对使用过过的仪器器应养成成及时清清洗的习习惯，特特别是血血液分析析时用以以吸取血血液样本本的吸管，用用过后应应当立即即用水将将所沾的的血液冲冲去，
9、否否则放置置过久，血血液干燥燥硬结，就就很不容容易清除除。 新购置置的玻仪仪：合成成洗涤剂剂洗刷0.2mool/LL盐酸浸浸泡（去去除游离离碱）小时自来水水冲洗冲洗次次。一般容容器：如如试管、烧烧杯、三三角烧瓶瓶等。流流水冲洗洗合成成洗涤剂剂洗刷自来来 水多次冲冲洗冲冲洗。容量分分析仪器器：如吸吸管、容容量瓶、量量筒、滴滴定管等等。使用用后立即即浸泡水水中。 自来水多次次冲洗沥干干铬酸酸洗液浸浸泡数小小时自来水水多次冲冲洗冲冲洗次次。（不不能刷洗洗）比色杯杯：用毕毕立即用用反反复冲洗洗。洗不不净时，用用盐酸冲冲洗，再再用自来来水冲洗洗和蒸馏水水冲洗。避避免用碱碱液或强强氧化剂剂清洗，切切忌用试
10、试管刷或或粗糙纸纸试擦3、玻璃璃仪器的的干燥 一般般的玻璃璃仪器均均可洗净净后倒置置架上，让让其水分分蒸发自自然干燥燥，如需需迅速干干燥者应应按仪器器的不同同类型按按下述不不同方法法处理： 试管、离离心管、烧烧杯、烧烧瓶等普普通玻璃璃器皿可可置烤箱箱中10001055烘烤少量仪仪器如需需急用也也可在电电炉上或或酒精灯灯上烘烤烤。烘烤烤时应将将器皿时时时转动动，务使使受热缓缓慢且均均匀，并并将管口口(或杯杯口)倾倾斜向下下，以便便水蒸气气冷凝成成水滴，顺顺口流出出，不致致使水滴滴接触烘烘热了的的器壁而而使仪器器爆裂。使用电电吹风干干燥一般般玻璃仪仪器也很很便利常常用。下列玻玻璃仪器器应避免免烘烤
11、：各种计量量玻仪：不可烘烘烤，自自然干燥燥（容易易造成器器壁变形形而致容容量不准准）。常常用定量量吸管很很难自然然干燥，可可在至烘箱烤烤干。厚壁玻仪仪（研钵钵、量筒筒比色杯杯：等）及及结构复复查的玻玻仪：易易在烘烤烤时发生生破裂，不不可烘烤烤，自然然干燥。（自然干干燥适应应于不急急于使用用和各种种计量玻玻仪；烘烘烤干燥燥除结构构复杂、厚厚壁及计计量玻仪仪外，均均可。温温度在，刻度度吸管温温度应小小于。）二、 常规操作作技术及及注意（一）移移液操作作 用用于移液液操作的的有奥氏氏吸管、移移液管、刻刻度吸管管三种吸吸量管及及枪式移移液器。三 种种 吸吸 量量 管管 比比 较较 奥氏氏吸管 移液管管 刻度度吸管 特点点 管中有有一球形形膨起 管管中有棱棱形膨出出 直筒状状 只只有一个个刻度 只有一一个刻度度 有多个个刻度 准确确度 最最高 次之之 再再次之 应用用 适用于于吸取标标准液 吸吸取标准准液 生化实实验中广广泛使用用 或或粘稠性性血标本本 管尖尖液 吹吹 不不吹 吹（完完全流出出式） 停留115秒 不吹吹（不完完全流出出式） 流速速 愈慢愈愈好 慢流出出
