《BIOMED PCR反应体系在BNHL分子病理诊断中的应用研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《BIOMED PCR反应体系在BNHL分子病理诊断中的应用研究（68页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、优秀毕业论文沁 声，次驴硕 士 学 位 论 文缩 略 语B 一A L LB 一ce ll ac u te ly m P ho e ytic le uk e 而 aB 一N H LB 一c e ll n o n 一H o d g k in ly m P h o m ap 一Z m日一Z m ie ro g lo b u linC D Re o m P le m e n tar ity d e term in in g reg io nd iv e r sity g e n e se g m e n tD A B3 一3 一d ia 们n in o b e n z id in eD L B C L
2、d i而 se la r g e B 一e e ll ly m P h o m aE D 尸D 气e th y le n e d ia m in e t et ra ac e tie a c idF FRLf o llie u la r ly m P h o m af ra n le 、vo r kGCg e r m in a l e e n te rHlgLHH o d g k in ly m P h o m ai们n 们n u n o g lo b u lin h e a v y e h a inIg Lim m u n o g lo b u lin lig h t e h a inIg
3、V Hi们n 们n u n o g lo b u lin h c av y e h a ln v a ri a b le g e n eIH C im m un o h istoe h e m is仰 jo in in g g e n e seg m e 爪 k a p P aK d ekaP Pa de letin g eleme nila n 、b d a精品参考文献资料加 介 次掌硕 士 学 位 论 文L C Ale uk o e yte e o 们n 们no n an g e nM A ll -M Z Le x tra n o d a l m a r g in a l z o n e
4、B 一e e ll ly m P h o m a o f M A L T ty P eN H Ln o n 一H o d g k in ly ln P h o m a1，A G EP o ly a c r y la m id e g e lP B SP h o sP h a te 一b u f fe r ed sa lin eP C RP o ly m e ra s e e h a in r ea c tio nP o st一G CP o st g e rm in a l e e n te rR A Gr ee o m b in a tio n a c tiv a tin g g e n eR
5、 S Sr ee o m b in a tio n s ig n a l se q u e n c eS BS o u t he m b lo tS D Sso d iu m d o d e e y l s u lf at eS H Mso m a tie h y p e r m u t at io nT B Etr is一b o ra te E D I A e le e tro P h o r es is b u f fe rT C RT e e ll re e e P t o rT E M E Dte tr即叽e th y le th y le n e d ia m in eT - N H
6、 LT - e e ll n o n 一H o d g k in ly m P h o m a v a ri a b le g e n e se g m e n t沁 介 次掌硕 十 学 位 论 文B1 0 M E D 一2 P C R 反 应 体 系 在 B 一N H L 分 子 病 理 诊 断 中 的应 用 研 究 浙 江 大 学 医 学 院病 理 学 与 病 理 生 理 学06 级 硕 士 研 究 生刘 红 蕊导师周 韧教 授摘 要 背 景 和 目的非 霍 奇 金 淋 巴瘤 (N H Ls ) 在 所 有 的 淋 巴造 血 系 统 恶 性 疾 病 中 占 50% 。N H Ls 是 淋
7、巴增 生 恶 性 病 变 中 的 一 组 异 质 性 病 变 ，其 诊 断 和 分 类 都 是 很 复 杂 的 。N H Ls 来 源 于 B 细 胞 和 T 细 胞 发 育 不 同 发 育 阶 段 的 细 胞 的 异 常 增 生 。大 约 90 一95 % 的 淋 巴 系 统 恶 性 疾 病 是 B 细 胞 来 源 。B 细 胞 的 发 育 主 要 发 生 在 次 级 淋 巴器 官 的 淋 巴滤 泡 。 淋 巴 系 统 增 生 疾 病 一 般 是 通 过 组 织 形 态 学 、细 胞 形 态 学 、 免 疫 组 化 和 流 式 细 胞 免 疫 表 型 来 诊 断 的 。 虽 然 大 多 数
8、病 例 可 以做 出 诊 断 ，但 是 偶 然 也 有 反 应 性 增 生 病 变 和 淋 巴瘤 难 以 区 分 。在 这 些 病 例 中 ，Ig/T C R 分 子 克 隆 研 究 可 能 是 有 用 的 方 法 。长 期 以来 ，S B 分 析 是 分 子 克 隆 分 析 研 究 的金 标 准 。 尽 管 S B 分 析 的 可 靠 性 比 较 高 ，但 它 逐 渐 被 P C R 技 术 所 取 代 ，因 为 它 有 几 个 固 有 的 缺 陷 : S B 分 析 是 费 时 的 ， 有 技 术 上 的 要 求 ，需 要 10 一Z oug 高 质 量 的 D N A ，只 有 5一10
9、 % 的 有 限 的 敏 感 性 。P C R 技 术 的 最 主 要 的 优 点 是 其 快 速 ，只 需 少 量 的 D N A ，并 且 可 以使 用 较 差质 量 的 D N A ， 相 对 高 的 敏 感 性 ( 1一5% )，对 于 一 些 类 型 的 重 排 ，其 敏 感 性 甚 至 小 于 1% 。并 且 P C R 技 术 可 以使 用 小 的 活 检 组 织 (例 如 : 细 针 活 组 织 检 查 获 得 的 组 织 )，可 以使 用 福 尔 马 林 固 定 ，石 蜡 包 埋 组 织 样 本 。 而 这 些 组 织 的 D N A的 质 量 通 常 是 很 差 的 ， 部
10、 分D N A 已经 降 解 成 小 的 片 段 。而 且 ，如 果 需 要 的 话 ，归 档 的 组 织 也 可 以 用 于 P C R 分 析 。在 成 熟 的 B 一N H L 中 ，P C R 鉴 定 Ig和 T C R 基 因 重 排 是 最 重 要 的 诊 断 工 具 。 但 是 ， P C R 方 案 中 引 物 设 计 没 有 标 准 化 导 致 的 假 阴性 和 假 阳 性 ，阻 止 了其 在 先 前 的 克 隆 研 究 中 得 到 的 数 据 的 可 比 性 。 为 了 解 决 这 个 问 题 ， 制 定 一 套 可 靠 并 且 简 易 的 用 于 可研 究 资助 基 金
11、: 省 科 技 厅 项 目( 00 1n 0 425 ); 浙 江 省 自然 科 学 基 金 ( Y2052，2 ); 浙 江 省 医 药 卫 生科 学研 究 基金 ( 2O 肠 A 0 8 4 ) .沁 介 次掌硕 士 学 位 论 文疑 的 淋 巴增 生 疾 病 常 规 克 隆 诊 断 的P C R 方 案 ， 欧 洲 7 国47 个 机 构 参 与 了BI O M E D 一2co nc erte d A ctio n ，发 展 了 一 套 用 于 淋 巴增 生 疾 病 诊 断 的 多 重 P C R 方 案 ，来 检 测 淋 巴造 血 系 统 恶 性 病 变 中 的 Ig和 TC R 的
12、 克 隆 性 重 排 和 染 色 体 转 位 : t ( 11 ; 14) 和 t ( 14 ; 18 ) 。 共 设 计 了 107 条 引 物 ，放 在 18 个 多 重 P C R 管 中 : 三 管 V H 刁 H ，两 管 D H - IH ，两 管 Ig k 即 p a (Ig K )，一 管 19 lam bd a (19 入)，三 管 T C R beta (T C R 日)，两 管 T e R g别rnm a (T C R 丫)，一 管 T C R de lta (T C R 6 )，三 管 B C L I一IG H 和 一 管 B C L Z一IG H 。新 鲜 /冰 冻
13、组 织 被 认 为 是 最 理 想 的 用 于 P C R 克 隆 分 析 的 D N A 样 本 。但 是 ， 对于 诊 断 实 验 室 和 一 些 研 究 机 构 ，不 可 能 总 能 得 到 新 鲜 /冰 冻 组 织 ， 而 石 蜡 包 埋 组 织组 成 了 大 部 分 的 样 本 来 源 。 从 石 蜡 中 抽 取 的 D N A的 质 量 通 常 是 很 差 的 ， 所 以 在B IO M E D 一2 P C R 方 案 在 被 广 泛 的 用 于 诊 断 实 验 室 之 前 ，需 要 对 P C R 方 案 做 出调 整 。 对 于 克 隆 性 重 排 阳 性 的 病 例 ，通
14、过 TA 克 隆 测 序 可 以观 察 其 Igv H 基 因 的 突 变情 况 ， 而 检 测 Igv H 基 因 的 突 变 状 况 是 追 踪 肿 瘤 发 展 阶 段 的 一 个 有 用 的 方 法 。我 们 研 究 的 目的 是 应 用 BI O M E D 一2 P C R 方 案 来 检 测 福 尔 马 林 固 定 ， 石 蜡 包 埋 组 织 的 B 一N H L ，并 来 检 测 Bl o M E D 一2 P C R 方 案 的 有 效 性 。通 过 克 隆 测 序 研 究 Ig v H 基 因 的 突 变 情 况 。 在 淋 巴瘤 的 随 访 过 程 中 ，通 过 P C R 产 物 的 长 度 和 序 列 的 变 化 来 监 测 微 小 残 留 病 变 和 疾 病 的 发 展 。材 料 与 方 法1 材 料( 1) N H L 标 本 : 收 集 19 97 一20 08 年 我 校 医 学 院 附 属 医 院 及 省 内 其 它 医 院 的 B 一 H L 标 本 75 例 ，全 部 标 本 经 中性 福 尔 马 林 固 定 、 常 规 石 蜡 包 埋 、4- 5林m 连 续 切 片 ， 除 常 规 H E 染 色 外 ， 采 用 L C A (Z B 11，D A K
