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1、根据老师上课总结回顾内容，便于期末复习1化学酶工程初级酶工程酶化学修饰、酶固定化、模拟酶、印迹酶、抗体酶制备2生物酶工程高级酶工程酶基因克隆、异源表达、酶基因点突变和定向进化、制备融合酶3酶催化的特点：极高的催化效率、高度专一，性（结构专一性（绝对专一和相对专一）立体异构专一性）、活性的可调节性、活性的不稳定性4抑制剂inhibitor竞争性抑制剂可逆性抑制剂reversible不可逆性抑制剂irreversible分离纯化separationandpurification激活剂activator5酶催化反应速度指酶反应的初速度酶活力的测定可用终止反应法或连续反应法Km,米氏常数，是酶反应速度
2、达到最大反应速度一半时的底物浓度mol/L其值越小，底物与酶亲和力越高6操纵子由调节基因启动子操纵基因结构基因组成乳糖操纵子学说酶的诱导，色氨酸操纵子学说酶的阻遏7产酶微生物种类细菌放线菌酵母菌霉菌8产酶菌种的要求酶产量高；适应性强，容易培养和管理；菌株遗传性稳定；酶生产成本低；酶产品易分离纯化，最好是分泌型的胞外酶；菌株安全可靠；基因工程菌株必须符合安全性要求9酶的发酵方法液体深层发酵（较多采用）固体发酵提高产酶措施添加诱导物，降低阻遏物浓度，添加表面活性剂，添加产酶促进剂10酶生物合成的四个模式延续合成型：发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞开始生长就有酶的产生，直至细胞生长进入平
3、衡期后，酶还可以继续生成一段时间。酶生产中最理想的合成模式同步合成型：提高对应的mRNA的稳定性，如降低发酵温度。中期合成型：要在提高mRNA稳定性以及解除阻遏两方面努力。最差滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢物阻遏，使酶的合成提早开始。11酶的提取extraction方法盐溶液提取法：酸溶液提取法：碱溶液提取法：有机溶剂提取法：12影响酶提取的主要因素温度：温度不宜过高，防止酶失活pH:提取时PH应远离酶的等电点以增加酶的溶解度搅拌：以温和搅拌为宜污染：尽可能防止微生物对酶的破坏提取液体积：其用量一般为含酶原料体积的3至5倍，少量多次13密度梯度离心densitygradientcentr
4、ifugation:样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的组分得以分离的一种区带分离方法。欲分离的物质并未真正达到其密度位置等密度梯度离心isodensitygradientcentrifugation:基于密度梯度离心的原理，根据颗粒的密度不同而进行分离一种区带分离方法。（当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内时，在离心力作用下，不同浮力密度的物质颗粒或向下沉降，或向上漂浮，一直移动到与它们各自浮力密度恰好相等的位置（等密度点），形成区带，又称为平衡等密度离心。）样品密度必须小于介质的最大密度14蛋白质沉淀分离的屏障溶剂化层和同种电荷萃取extraction利用溶
5、质在互不相溶的两相之间分配系数的不同而使溶质得到纯化或浓缩的方法。15 双水相：在两种或两种以上物质的水溶液在一定浓度下混合形成的具有清晰界面平衡共存的两个液相双水相萃取Aqueoustwophaseextraction用两种不相溶的亲水性高分子聚合物水溶液，如聚乙二醇和葡聚糖进行萃取。因形成的两相均有很高的含水量，故称“双水相”系统。反胶束：表面活性剂在非极性有机溶剂中形成的极性头向内非极性尾朝外含有水分子内核的纳米级且热力学稳定的聚合体反胶束萃取Reversedmicellarextraction指表面活性剂（由亲水的极性基团和疏水的非极性基团两部分组成）分散在连续有机溶剂中自发形成的稳定
6、的纳米级的聚集体自水相中萃取目标分子。16 凝胶层析gelchromatography:又称分子筛层析、凝胶过滤或分子排阻层析，以各种多孔凝胶为固定相，利用溶液中各组分的分子量不同而进行分离的技术。17 吸附层析adsorptionchromatography：利用吸附剂对不同物质的吸附力不同，而使混合液中的各组分分离的方法。18 离子交换层析ionexchangechromatography亲和层析affinitychromatography利用生物分子与配基之间所具有的专一?而又可逆的亲和力使生物分子分离纯化的技术。19 层析聚焦：依据蛋白质等电点差异及离子交换行为的原理发展的层析分离方法
7、。可以从pH梯度溶液的形成、蛋白质的行为和聚焦效应三方面来阐明。20 高效液相色谱highefficiencyliquidchromatography双向电泳two-dimensionalelectrophoresis:是等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pl分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。21 等电聚焦电泳isoelectricfocusingelectrophoresis:在电泳系统中加入两性电解质载体，通以直流电后,载体两性电解质即在电场中形成一个由阳极到阴极连续增高的pH梯度当蛋白质、酶或多肽进
8、入这个体系时，不同的蛋白质即移动到（聚焦于）与其等电点相当的pH位置上，从而使不同等电点的蛋白质得以分离。22 评价固定化酶的指标酶的结合效率=加入的总酶活-未结合的酶活力）/加入的总酶活力酶的活力回收率=固定化酶的总活力/用于固定化的总酶活力细胞的固定化以吸附法包埋法居多23 酶化学修饰：凡通过化学基团的引入或除去，而使酶蛋白共价结构发生改变，称为蛋白的化学修饰。氨基的修饰聚乙二醇的修饰修饰酶的性质稳定性提高抗原性降低体内半衰期延长最适pH改变酶动力学性质的改变（Km增大）模拟酶mimicenzyme环糊精冠醍杯芳炷24 抗体酶abzyme一种具有催化活性的抗体分子制备方法：诱导法拷贝法引入
9、法化学诱变法分子印迹法基因工程法印迹酶Imprintedenzymes25 DNA文库DNALibrarycDNA文库cDNALibrary（体外重（体外重酶基因克隆的步骤目的酶基因的获取、克隆载体的选择、目的酶基因与载体连接形成重组载体组）、重组载体导入受体细胞并培养、重组子的筛选与鉴定33融合酶Fusionenzyme来自不同酶分子中的结构单元或是整个酶分子进行组合或交换，以产生具有所需性质的优化酶杂合体。34酶活力：又称酶活性，指酶催化某一化学反应的能力，用酶催化反应速率表示35生物酶工程：是指在基因水平上，对酶蛋白分子进行修饰、改造，改进酶蛋白的催化特性或酶蛋白的蛋白质特性等。36酶分
10、子的定向进化：是指在分子水平上，人为地创造特殊的进化条件，模拟自然进化机制，对酶基因进行改造，并进行定向选择，筛选出所需酶蛋白的过程。37按催化反应类型分，将酶分成6个大类，它们分别是氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂合、异构酶、合成酶；38酶固定化方法有吸附法、交联法、包埋法、共价结合法；39酶蛋白化学修饰的方法包括酶分子侧链基团修饰(氨基的化学修饰)、酶分子表面化学修饰(聚乙二醇对酶的修饰)40核酶的主要类型剪切型核酶：这类核酶主要催化自身或异体RNA的切割，相当于核酸内切酶的作用。自我剪切型：锤头核酶、发夹核酶、6型肝炎病毒核酶异体剪切型：蛋白质一RNA复合酶(RNaseP)催化tRNA前体
11、成熟过程剪接型核酶：这类核酶主要催化mRNA前体的修饰加工，切除内含子，并完成片段的拼接；主要包括I型内含子和II型内含子。I催化自我剪接需鸟昔(或5鸟昔酸)和Mg2+参与。II不需要鸟昔或鸟昔酸参与，但仍需Mg2+,41自我剪接Self-splicing自我剪切self-cleavage42脱氧核酶(deoxyribozyme)是利用体外分子进化技术合成的一？种具有催化功能的单链DNA分子，具有高效的催化活性和结构识别能力。核酶ribozyme43酶反应器enzymereactor按结构划分：搅拌罐式反应器(StirredTankReactor,STR)填充床式反应器(PackedColum
12、nReactor,PCR)流化床式反应器(FluidizedBedReactor,FBR)鼓泡式反应器(BubbleColumnReactor,BCR)膜式反应器(MembraneReactor,MR)喷射式反应器(JetReactor,JR)按操作方式分分批式反应(Batch)连续式反应(Continuous)流加分批式反应(FeedingBatch)混合形式连续搅拌罐式反应器(ContinuousStirredTankReactor,CSTR)分批搅拌罐式反应器(BatchStirredTankReactor,BSTR)反应器类型反应器类型特点件容易调节控制？费度大，可以提高的化反应的速度
13、,在工A生产中普港使用？均匀，传质和球g比较#不易堵W对站度较大反应波也可进反应器类型鼓泡式反宜器的结构倚尊，操作睿易.勇切力小黔效果好，传麟传蔑效适合于有气盼与的疝“清洗比较困难嗔射心藏晚赫汽，与庞物KI&A,八进伍温鼬催的航44酶比活力specificactivity:在特定条件下，单位质量蛋白质或RNA拥有的酶活力单位数，是酶纯度的一指标45离子交换剂ionexchanger:离子交换剂是借酯化、氧化或醍化等化学反应，在琼脂糖、纤维素或凝胶分子上某些极性基团，通过极性基团的静电吸附作用，对极性大分子进行分离46酶蛋白基因定向进化的方法有：易错PCR方法;DNA改组方法;基因家族之间的同源
14、重组方法;47细胞破碎的方法机械破碎法；物理破碎法；化学破碎法；酶促破碎法酶分子定向进化的酶工程意义48提高酶分子的催化活力；改善酶蛋白的稳定性；改善酶蛋白的底物专一性；通过酶蛋白分子对应用环境的适应能力。49酶非水相nonaqueousphase催化的几种类型有机介质中的酶催化超临界介质中的酶催化气相介质中的酶催化离子液介质中的酶催化50反胶束体系reversemicellesystem51酶促反应的有机介质体系：与水互溶的有机溶剂和水单相体系水与有机溶剂形成的两相体系非极性有机溶剂酶悬浮体系非极性有机溶剂PEG修饰酶单相体系反胶束体系有机溶剂极性对酶活性的影响在logP2的极性溶剂中，酶易失活，不宜作非水介质中酶促反应的介质。在2logP4的非极性有机溶剂中具有较高的酶活力酶在有机溶剂中活性降低稳定性升高有机介质中酶稳定性的变化：热稳定性提高储存稳定性提高抗变性剂稳定性提高52 酶的底物专一性改变：酶对底物的相对专一性立体异构选择性区域选择性前手性选择性在有机溶剂体系中，酶活性中心构象刚性的增强会导致一些酶所催化的底物的范围缩小
