琼脂糖凝胶电泳的特点

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1、琼脂糖凝胶电泳的特点琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高 于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨 架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷， 因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。 在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB)，在紫 外光下可以检出10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶 中带负电荷的DNA向阳极迁移。琼脂糖凝胶有如下特点：(1) DNA的分

2、子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用 对数值成反比，分子越大迁移得越慢。(2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子，其迁移速度在不同 浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度 (t)成线性关系。(3) 电压 低电压时，线状 DNA 片段迁移速率与所加电压成正比。 但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的 幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要 使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。(4) 电泳温度 DNA 在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温 度影响不明显，不同大小的DNA片

3、段其相对迁移速率在4弋与30弋 之间不发生明显改变，但浓度低于 0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱， 最好在4弋条件下电泳。(5) 嵌入染料 荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的 DNA， 染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性 更强,还会使线状迁移率降低15%。(6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移 率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几 乎不移动，在高离子强度的缓冲液中(如误加10x电泳缓冲液)，则电导 很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。琼脂糖凝胶电泳也常用于分离、鉴定核酸，如DNA鉴定，DNA 限制性内切核酸酶图谱制作等。由于这种方法操作方便，设备简单， 需样品量少，分辨能力高，已成为基因工程研究中常用实验方法之一。 琼脂糖凝胶电泳试剂盒一套包含琼脂糖预制胶10块、高压快速电泳液 15mL、DNA loading buffer6x 200pL、剪刀及使用手册，有8孔6*6、 6孔6*6、13孔6*12、18孔6*12等多种规格。