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1、 ABSTRACTObjective To study the effects of integrin and endogeneous gangliosides on 2 1invasion and migration of SK-N-SH neuroblastomaNB cells and to explore the relationship of endogeneous gangliosides and integrin in the invasion and 2 1migration. of the SK-N-SH cells Methods NB SK-N-SH cell line
2、was cultured in the modified eagles medium.with or without the presence of 10 mD-threo-1-phenyl-2-decaolamino-3-morphinoline-1-pro panol, D-PDMP , an inhibitor of glucosylceramide synthase. Inclined test and polycarbonate filters incorporated in modified Transwell chambers were used to investigate e
3、ffects of monoclonal antibodies to integrin ,integrin and repletion of 2 1 GD2, the major endogeneous gangliosides on the migration and invasion of the SK-N-SH cells respectively.The cells were stained with Gimsa dye and counted under 200 multipled microscope., calculated the blocking ratios of inva
4、sion and migration Results The migration of the SK-N-SH cells was significantly blocked by anti- or 2anti- monoclonal antibodies compared with the control cells without the 1monoclonal antibodies 987,the numbers of cells were 5111 and 549 respectively P0.01.The blocking ratio of migration was 48.0%
5、and 44.9% respectively;meanwhile,the invasion of the SK-N-SH cells was remarkably blocked by anti- (254)or anti- (19 4)monoclonal antibodies compared with the 2 1control 42 5 as wellP0.01.The blocking ratio of invasion:40.5% and 54.8% respectively. After depletion of the cell gangliosides by D-PDMP,
6、 both the migration 5512 and invasion(348)of the cells decreased significantly compared to the control10912, 525P0.01. Ganglioside GD2 was able to recover the capabilities of the migration10110 and invasion454 of the SK-N-SH cells exposed toD- PDMP, but, these capabilities were blocked by anti- and
7、anti- 2 1II Conclusions Our results suggested that both integrin and endogenous 2 1 gangliosides of neuroblastoma cell promote in the invasion and migration of neuroblastoma cells in vitro. Endogenous tumor Gls may play an important role in the metastasis of neuroblastoma by regulating function of i
8、ntegrin 2 1.Key words Neuroblastoma; Integrin ; Gangliosides ;Invasion ; Migration 2 1III目 录中文摘要() 英文摘要() 目录() 1 前言 (1) 1.1 NB的发病特点及临床治疗现状 (1) 1.2 整合素与肿瘤的发生开展 (2) 1.3 Gls与肿瘤发生开展 (3) 1.4 课题的研究意义 (4) 2材料与方法(5) 2.1 实验材料(Materials) (5) 2.2 实验方法(Methods) (7) 3实验结果(Results) (13) 3.1 整合素 对SK-N-SH细胞迁移侵袭的影响
9、(13) 2 13.2 Gls 对 SK-N-SH细胞迁移侵袭的影响 (15) 3.3 Gls与整合素 在SK-N-SH细胞迁移侵袭中的关系(17) 2 14 讨论(Discussions)(21) 5 结论(26) 参考文献(references) (28) 附录 (32) 英文缩略词表(39) 在学期间发表论文清单(40) 致谢 (41)IV暨南大学硕士学位论文 1. 前 言1.1 NB的发病特点及治疗现状 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见的颅外神经系统恶性肿瘤,年发病率大约 1/10 万,其发病率仅次于白血病和中枢神经系统肿瘤。约 80%神经母细胞瘤患者 5岁
10、以下发病,顶峰年龄 35 岁,局部病例有家族史,提示可能与遗传因素有关。NB 起源于神经胚胎细胞,可发生于中枢或周围神经,以周围神经多见,发生部位主要见于肾上腺髓质或腹部交感神经节。 NB有以下几个临床特点: (1)临床表现呈多样性,给早期临床诊断带来一定的困难,往往容易误诊; (2)肿瘤极易早期发生转移,约 70%儿童患者在就诊时已发生转移,错过早发现,早治疗的时机;(3)病情进展迅速,疗效不佳,且易复发。目前针对 NB 治疗多采用手术联合大剂量细胞毒性药物化疗以及放疗综合治疗方案,而且放疗、化疗等治疗手段存在不同程度的副作用;但无论采用何种治疗疗效均不理想,统计显示神经母细胞瘤患儿 5 年
11、生存率尚缺乏 10%。NB 细胞发病早期转移及治疗后微小病灶转移复发亦一直是困扰医务工作者的一大难题。因此有必要深入探究影响神经母细胞瘤发生、侵袭转移的因素及其作用机制,应用针对肿瘤发生开展机制中某一特异位点的药物,有效地阻断肿瘤的生长、侵袭、转移过程,从而改善 NB患儿预后,提高其长期生存率。 许多研究提示:肿瘤的侵袭和转移是个多种因素、多个步骤、多阶段的瀑布过程,是癌细胞侵犯和破坏周围正常组织,进入循环系统,迁移到特定组织器官并开展为继发性癌灶的过程。肿瘤细胞侵袭转移的第一步就是肿瘤细胞间粘附因子的缺失所致个体细胞从原发肿瘤脱落游离,第二步细胞本身产生多种分解酶,可分解细胞外基质和基底膜,
12、肿瘤细胞侵入循环系统,第三步是循环肿瘤细胞与脉管内皮细胞及细胞外基质细胞的粘附,这些1-3都是肿瘤转移过程中的关键步骤 。事实上肿瘤转移过程无不包含粘附和解离两方面,细胞的粘附、脱粘附和迁移、侵袭是转移的必要过程。肿瘤细胞的转移过程如下列图所示: 1暨南大学硕士学位论文 细胞侵袭迁移过程示意图 细胞与细胞外基质的粘附是通过受体来实现的,其中以整合素受体占主要比例。整合素作为细胞外表受体扮演细胞信号传导的角色,将接受的信号在细胞内外传递。由于各种肿瘤细胞外表整合素种类不同,而各类整合素在肿瘤生长的各个阶段受外界调节因素不同,表达种类和表达水平也不同,使肿瘤细胞与细胞外基质的粘附处于一种动态的可调
13、节的状态,这对肿瘤细胞的生长和转移有相辅相成的作用。诸多研究说明,不正常表达的整合素在肿瘤的转移过程中具有重要的作用。 1.2 整合素与肿瘤的发生开展 整合素是一类细胞膜外表糖蛋白受体家族分子, 是由 和 亚基通过非共价键连接构成的二聚体分子。目前发现脊椎动物受体家族包括至少 17 个亚单位和 9 个亚单位, 共同4组成超过 25 种不同的整合素 ,其功能为介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)之间的相互粘附,双向传导细胞内外与细胞外基质之间分子信号,在多种病理过程中发挥重要作用,如淋巴细胞向炎症部位的聚集及肿瘤细胞的浸润等;5调节细胞的增殖、分化、粘附、迁移、侵袭及调亡等过程 ,在肿瘤进展过程中发挥重要作用。 整合素的不正常表达影响肿瘤恶性转化、粘附和转移。恶性转化的肿瘤细胞往往表现在整合素表达质和量的改变,这种改变影响由整合素介导的信号途径所涉及的调节功能,2暨南大学硕士学位论文 从而改变肿瘤细胞与相应底物的粘附反响,特异信号的传递或诱导基因表达,直接或间接6调控肿瘤细胞分化、增殖、凋亡、粘附、侵袭、转移 。肿瘤发生开展过程中,有些整合素的出现提示细胞为恶性化增殖,并调节肿瘤细胞侵袭、转移的过程。星形胶质瘤细胞与正常细胞星形胶质细胞相比,前者除 和 的表达水平提高,还有新表达的 、 、 和3
