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1、二甲苯对小鼠肾组织损伤的研究摘 要本试验以小鼠为试验动物，通过腹腔注射二甲苯染毒建立试验模型，测定小鼠肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛(MDA)含量，以及制作组织切片进行病理学观察，从而分析评价二甲苯对小鼠的损伤程度。将小鼠随机分为、组，组为对照组（注射生理盐水），其他三组分别用不同浓度的二甲苯（用药剂量分别为0.125 ml/kg、0.25 ml/kg、0.5 ml/kg）经腹腔注射小鼠染毒15天，15天后处死、剖解小鼠，观察肾组织的大体变化并制作肾组织切片。使用SOD、MDA试剂盒测定不同试验组小鼠的肾组织匀浆中SOD的活力和MDA的含量。结果显示，组染毒小鼠的SOD活力较其他
2、三组下降极显著（P0.01），而MDA的含量则增加极显著（P0.01）；组和组的差异不显著，但相较于对照组差异显著（P0.05）。病理学变化：组肾组织肾近曲小管细胞之间边界模糊不清，但病变不是很明显；组肾组织肾近曲小管细胞之间边界模糊不清，细胞排列紊乱，脱落到管腔中，相对于组病变较明显；组见皮质区部分近端肾小管上皮细胞刷状缘脱落，有部分出现肾小球破裂、出血，部分近髓处小管上皮细胞肿胀，伴有空泡变性。关键词：二甲苯，肾组织，超氧化物歧化酶，丙二醛，组织切片XYLENE ON RENAL INJURY IN MICEABSTRACTIn this experiment, mice as exper
3、imental animals exposed by intraperitoneal injection of xylene to build a test model, kidney tissue of mice, superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) content, and the production of tissue in the disease Science observation, analysis and evaluation of xylene to injury in mice. Th
4、e mice were randomly divided into , , , group, group was the control group (normal saline), the other three groups were treated with different concentrations of xylene (drug dose of 0.125 ml/kg、0.25 ml/kg、0.5 ml/kg) via intraperitoneal injection in mice exposed to 15 days, 15 days after the death, d
5、issection mice, the general changes in renal tissue and production of renal biopsy. Use of SOD, MDA reagent kits of different experimental groups of mice, the kidney, SOD activity and MDA content. The results showed that, group of mice exposed to SOD activity than the other three groups decreased si
6、gnificantly（P0.01）, while MDA content increased significantly（P0.01）; and group was not significant, but compared with the control group were significantly different（P0.05）. Pathological changes: group of kidney proximal tubule cells in the border between the blurred, but the disease is not very cle
7、ar; group of kidney proximal tubule cells blurred the boundary between the cells arranged in disorder, falling into the lumen in group lesions were compared with the more obvious; group see the cortex part of the proximal tubular epithelial cell brush border loss, some glomeruli appeared broken, ble
8、eding, some of the pulp Department tubular cell swelling, accompanied by air denaturation bubble. KEY WORDS：Xylene, Kidney tissue, Superoxide dismutase, Malondialdehyde, Histological biopsy目 录1 前言11.1二甲苯的致病作用11.2肾脏的结构和功能11.3国内外有关二甲苯的研究21.4 SOD和MDA的测定意义31.5 本试验研究的目的及意义42 材料与方法42.1 试验材料42.1.1 试验动物42.1
9、.2 试验试剂42.1.4 试验器材52.2 试验方法52.2.1 试验分组52.2.2 临床观察62.3 检测指标与检测方法52.3.1 SOD活力的测定62.3.2 MDA含量的测定72.3.3组织中蛋白含量的测定72.4 石蜡切片的制作72.4.1切片的制备82.4.2切片脱蜡82.4.3 染色82.4.4 脱水、透明、封固92.4.5镜检观察83 结果83.1二甲苯染毒小鼠肾脏组织的大体观察83.2 二甲苯对小鼠肾脏组织中SOD活力的影响93.3 二甲苯对小鼠肾脏组织中MDA含量的影响93.4二甲苯染毒小鼠的肾脏组织的切片观察104 讨论与分析104.1 二甲苯对小鼠肾脏组织中SOD活
10、力的影响104.2 二甲苯对小鼠肾脏组织中MDA含量的影响114.3 二甲苯染毒小鼠肾脏组织学影响115 结论12参考文献14致 谢16外文资料译文171 前言 1.1 二甲苯的致病作用 苯在工业上应用已有100多年的历史, 自1987年首例苯白血病报道以后, 有关苯毒性的研究一直倍受关注, 取得了很多重大进展。1982年国际癌症研究机构（IARC）将苯列为人类致癌物，1993年世界卫生组织（WHO）认为苯既是工业毒物又是重要的环境污染物。而苯类中的二甲苯在我们日常生活中又被广泛的应用。二甲苯无色，有芳香气味，具有挥发性，主要用作建筑材料、装饰材料及人造板家具的溶剂和粘合剂，工业用途广泛，具有
11、广泛的生物学毒性。主要危害是影响中枢神经系统，并伴有头痛、头晕和恶心，影响造血机能，可引起血液系统的疾病，是白血病诱病因子，它被世界卫生组织确认为有毒致癌物质。由于二甲苯属芳香族易挥发性液体，为有机溶剂，具有高度的亲脂性，人一时不易警觉其毒性，可经呼吸道、皮肤和消化道吸收。而人在短时间内吸入高浓度的二甲苯时，可出现经呼吸道、消化道及皮肤吸收作用，轻者有头晕、头痛、恶心、胸闷、乏力和意识模糊，严重者可致昏迷以致呼吸循环衰竭而死亡。如果长期接触一定浓度的二甲苯会引起慢性中毒，可出现头痛、失眠、精神萎靡和记忆力减退等神经衰弱症状。二甲苯经呼吸道、消化道及皮肤吸收并迅速进入血液，分布到富含脂肪的组织中
12、，以脑、肾上腺、骨髓和肝脏内最高; 其大部分在体内迅速氧化为苯甲酸或甲基苯甲酸，与甘氨酸反应生成马尿酸或甲基马尿酸后，大部分与葡萄糖醛酸及硫酸结合随尿排出。二甲苯属脂溶性物质，引起组织细胞的脂质过氧化，病变导致细胞组织的破坏，可引起肾小管细胞大量变性坏死，肾近曲小管上皮细胞出现明显的病理改变。1.2 肾脏的结构和功能1.2.1肾脏的主要结构肾脏内部的结构，可分为肾实质和肾盂两部分。肾的基本组成和功能单位，称为肾单位。每个肾单位有肾小体和肾小管组成。肾小体内有一个毛细血管团，称为肾小球。肾小球外层有肾小囊包裹。肾小囊分为两层，两层之间有囊腔与肾小管的管腔相通。肾小管有近曲小管、细段和远曲小管组成
13、3。（如下图1，图2）1.2.2肾脏的主要功能生成尿液，维持水的平衡 肾小球就像筛网一样，当血液流经肾小球时，体积大的成分，如红细胞、白细胞、血小板、蛋白质等不能通过筛网，故不能从肾小球滤出，仍留在血管内；而体积小的成分，如水分、钠、氯、尿素、糖等，能通过筛网，经肾小球滤出，流进肾小管内，这些液体叫作“原尿”。当原尿流经肾小管途中，肾小管有重吸收功能，99%水分被吸收回到体内，营养成分几乎也被全部重新吸收；此时，只剩下机体的代谢废物和很少的水分，就形成了尿液（称为“终尿”）。排出机体的代谢产物和有毒物质 机体进行新陈代谢的同时，会产生一些代谢废物，如尿素、尿酸、肌酐等，肾脏通过肾小球滤过和肾小
14、管分泌，把这些废物从尿液排出体外，从而维持正常的生理活动。急慢性肾功能不全时，肾小球滤过功能减退，则会发生代谢废物在体内蓄积，扰乱机体正常的生理功能。调节电解质和酸碱平衡 肾脏通过肾小球的滤过，肾小管的重吸收及分泌功能，排出体内多余的水分，调节电解质和酸碱平衡，维持内环境的稳定。分泌肾素、血管紧张素、前列腺素等血管活性物质 在血压的调节中发挥重要作用。慢性肾病时，上述血管活性物质可出现失调，引起血压升高。分泌促红细胞生成素 促进骨髓造血，生成红细胞；肾功能不全时，促红细胞生成素合成减少，就会引起贫血。将活性维生素D前体转化为活性维生素D 调节体内的钙磷代谢，维持骨骼的正常结构与功能，而且还参与
15、免疫功能的调节。肾功能不全时，就会引起活性维生素D不足。此外，肾脏也是多种内分泌物质的降解与灭活的场所，从而参与激素代谢的调节。如胰岛素、甲状旁腺激素、胰高血糖素、生长激素、降钙素等许多激素，均在肾近端小管细胞降解和清除。当肾功能不全时，这些激素的生物半衰期明显延长，导致体内蓄积，并可引起代谢紊乱3,7。1.3 国内外有关二甲苯的研究目前，国内外对有关二甲苯的研究报道很少。王取南，魏凌珍12等（2000年）报道，混苯（主要含苯、二甲苯）可导致大鼠肝细胞合成蛋白质能力下降，主要含苯的混苯还可增加肝实质细胞的通透性，使肾脏组织AST、ALT及LDH等酶活性升高；混苯可升高大鼠体内脂质过氧化水平，表现为肾脏组织MDA含量增加，同时降低肾脏组织抗氧化酶SOD和GSH2Px活力，脂质过氧化反应水平的升高和肾脏组织抗氧化酶活力的降低与混苯肝毒作用有关。同时, 以二甲苯为主的混苯还可导致试验大鼠的肾功能障碍，表现为肾脏组织BUN含量升高。蒋灵芝，熊平4等（2007年）报道，日常生活和工作中，皮肤长期接触二甲苯，可以导致皮肤的增生性病理改变，容易诱发皮肤癌和肝细胞脂肪变。体细胞癌变的机制复杂，但外环境的不良因素刺激是其发病机制不可忽略的重要环节。人类日益增多的脂肪肝、肝硬化
