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1、1. 检验目的指导脑脊液（CSF常规测定2. 方法原理2.1 脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆 中各种物质的 选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不 同。其中最易通过血脑屏障 的是氯、钠、镁离子及乙醇；其次为清蛋白、葡萄糖、钙离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐；纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、 胆固醇则极 难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎 症、肿瘤、外伤、水肿和 阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过对脑脊液理学 检查，显微镜检查、化学和免疫学检查 及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治 疗和预后
2、判断提供依据。2.2脑脊液（CSF常规测定内容包括：颜色性状、有核细胞计数、红细胞计数潘氏试验、细菌 等。2.3潘氏（pan dys）试验：CSF中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。3. 方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特1颜色（COLOR）6中性粒细胞（NE）2透明度（clearity）7淋巴细胞（LY）3凝固性(coagulability)8单核细胞（M04脑脊液有核细胞计数（CSNUCL）9潘氏试验（pandys test）5脑脊液红细胞计数（CSF-RBC）4. 标本类型4.1标本类型：新鲜 CSF4.2标本拒收条件：
3、拒收延迟室温2h、冷藏6h未送达标本。4.3标本保存与稳定性：一般室温1h内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查。5. 要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统51标本容器：BD无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。5.2 试剂9.1.1 试剂组分：生理盐水0.9%Nacl 溶液白细胞稀释液1%冰乙酸（1ml分析纯冰醋酸+蒸馏水至100ml）刘氏快速瑞氏染色液A液：曙红、甲醇B液：亚甲蓝潘氏试剂10%苯酚溶液（纯苯酚10ml+蒸馏水至100ml）522试剂存储和用有效期:试剂名称存储条件有效期开瓶有效期位置生理盐水室温 至温1年1年存货柜/血常规室操作台冰乙酸室温 至温2
4、年1年药品柜1汇酸冷藏1年1年试剂冰箱10%苯酚溶液至温 至温1年1年药品柜刘氏快速瑞氏染色液至温 至温2年6个月药品柜/染色操作台5.3 仪器： OLYMPUS 学显微镜，血细胞计数板6. 校准程序（计量学溯源性）不适用7. 质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施不适用8. 程序步骤8.1 般性状检查：轻轻混匀CSF观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数300/ 卩 l 个时或蛋白增加可产生混浊），并记录。8.2 显微镜检查8.2.1 细胞计数（无凝块标本）（1）清或微混标本：a）混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总数（包括 RBC, NUCL ）。b）用白细胞稀释液
5、作1:1 稀释，计数有核细胞数c）红细胞数=细胞总数-有核细胞数（当白细胞数30个/卩丨时，在白细胞计数池中直接分类至少50个白细胞）（2）混浊及以上标本：外观稀释样本量稀释液/溶解剂粉色/轻度混浊1:2020卩丨380卩丨红色/混浊1:5010卩丨490卩丨带血量极高/极度混浊1:10010卩丨990卩丨a）稀释标本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；b）溶解RBC :于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；c）冲池；计数d）红细胞数二细胞总数-有核细胞数8.2.2 有凝块或粘稠标本：（1 ）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。（2）2000rpmX5min 离心
6、，分离上清液和沉渣。（3）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察 NUCL、 RBC。（4 ）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。823离心获取沉渣和上清液：将完成计数的CSF离心，2000rpmX5min离心,吸出上清液于另一试管，并在试管上编号。824瑞氏染色：当NUCL106/卩丨时进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核细 胞数而定， 血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行分类（分100个NUCL；如见有不能分类细胞或 怀疑有恶性细胞时，应请示上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报 告，如脑膜 白血病或肿瘤细胞等。8.3 潘氏试验8.3.1 试验操作：取小试管一支，加入10
7、%勺石碳酸水溶液约5ml，用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。8.3.2结果判定：阴性：清晰透明。弱阳性（土）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。阳性（+）:灰白色云雾状。（2+）:白色浑浊。 （3+）:白色浓絮状沉淀。（4+）:白色凝块。9. 计算结果原理9.1 颜色红色：常见于穿刺损伤或出血性病变。为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意：（1）离心沉淀后：如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血时间已经超过 4 小时。如上层液体澄清无色，红细胞均沉 管底， 多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出血时
8、也可看 至叽因脑脊液渗透压较血浆高所致。黄色：可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性 脑膜炎、重症如核黄疸等引起。白色或灰白色：多因白细胞增加所致，常见于化脓性脑膜炎。 褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。绿色：可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红 素血症和脓性脑脊液。9.2 透明度：脑脊液混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数超过300X 10/L 时，可出现混浊。蛋白质含量增加或含大量微生物也可产生混浊。9.3 凝固性：结核性脑膜炎静置 12-24小时后，标本表面有纤细的网膜形成。蛛网膜下腔 梗阻时，可 产生黄色胶冻状。9.4 潘氏试验：有脑组
9、织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中 枢神经系统 疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈阳性反应， 如外伤性血液混入脑 脊液中，亦呈阳性反应。9.5 细胞分类：951中枢神经系统病变的CSF,细胞可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有 关。9.5.2 中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时，细胞数可中度增加, 常以淋巴细 胞为主。9.5.3 细菌感染时（化脓性脑脊髓膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。9.5.4 寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。9.5.4 脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。10. 生物参考区间颜色（COLOR
10、）无色透明度（clearity）透明凝固性（coagulability）无凝块潘氏试验（pandystest）阴性OR弱阳性有核细胞计数（CSNUCL）成人（0-8） X106/L中性粒细胞 （NE）成人（0-6%）儿童（0-15） x 106/l新生儿（0-8%）新生儿（0-30）X106/i淋巴细胞（LY）王 1 U6/ 成人（40-80%单核细胞（MO成人（15-45%）新生儿（5-35%）新生儿（50-90%）红细胞计数（CSRBC）0X10/L（正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞，之比约为 7:3，可含极少中性粒细 胞）。11. 警告值、危急值（适用时）12. 检验结果可报告区间13. 对超出可报告范围的结果的处理13.1 如检到细菌时应建议培养确认。 有不能分类细胞，应请示上级主管，并另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞。14. 实验室解释15. 安全防护措施15.1所有样品按具有潜在传染性的标本处理
