瑞氏染色

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1、瑞氏染色瑞氏染色是目前最常用而又最简单的染色方法。1原理：瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美篮混合经化学作用后，变成中性之 伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。2 试剂配制： 1、瑞氏试剂 瑞氏染料（粉）1克，加不含醋酮之甲醇600毫升溶解过滤后即成。混合方式可将瑞氏染料置于研钵内，加适量甲醇混合研磨，使染料溶解，将已溶解的液体倒入清洁玻瓶，再放入甲醇继续溶解剩下染料，直至染料及甲醇均用完为止，然后过滤，以深色中

2、性之玻璃瓶储备待用。亦可将1克染料一次加入600毫升甲醇中，盛深色玻璃瓶内，塞好瓶口，置于温暖而黑暗之处或37度温箱内，每日振荡5min，连续7天以上，然后过滤储备用。染液宜久置后使用，通常存放愈久，染色效果愈好。2、缓冲液 由1%的磷酸氢二钠和1%的磷酸二氢钾各30毫升加蒸馏水1000毫升配成，或以上两药各1克加2500毫升左右蒸馏水制成。以石蕊试纸检验、调整酸碱度，使PH在6.5-7之间即可。缓冲液亦可永新鲜蒸馏水或煮沸后密闭保存的蒸馏水。如蒸馏水与空气过多接触，则可因吸收空气中之二氧化碳而使PH值变低，影响染色，故不宜使用。3、染色步骤1 将已编号之涂片水平置于染色板或者染色架上，涂片两

3、端各划一道蜡笔线，主要防止染液外溢。2 滴加瑞氏染色液。 其多少依标本所占面积大小而定，一般为4-8滴，至染液将标本完全盖住为止。染液不宜过少，否则，甲醛挥发后，易产生沉淀；不可过多，以免因过盛而流失，影响染色。3 1-2分钟后，滴入缓冲液（染液与缓冲液的比例约为1：1.5，冬季1：1，夏季1：2）。以气囊向玻璃片上轻轻打气，使染液和缓冲液混合均匀，一般不宜口吹起，以免呼出二氧化碳改变缓冲液酸碱度而影响染色。4 自缓冲液滴入10-15分钟后，用自来水冲洗。冲洗时应将玻片持平，以流水滴入使染液及缓冲液自玻片边缘溢出，染料沉淀即随水浮去。冲洗时，切忌水力过大，以免将标本并染液同时冲走；冲洗前切不可

4、先将染液倾去，否则沉淀将附于标本上不能除去，染色时间与染液的性质、酸碱度、气温等关系甚大，因此应灵活掌握。最好先冲洗一张，于低倍镜下初步检查，如细胞核浆分明，颗粒清楚，表示染色满意，此时，始可将其余涂片全部冲洗。如染色过浅，则需延长染色时间。5 冲洗、待干、镜检 。如天冷或空气湿度大，可用吸水纸吸水加快干燥速度。但切忌用力重压或擦拭，以免将标本中的细胞成分擦去或破坏。4优缺点 其主要优点是染色方法简单、省时、易于推广，且染色较清晰，特别是胞浆及其中颗粒受染良好。根据我们的体会，在细胞学检查中，除个别情况外，瑞氏染色基本上可以解决绝大部分常见病的诊断问题。其不足之处是核染质及核膜的结构往往不如巴

5、氏染色清楚。5 染色不佳的原因及纠正方法1 染色过深 A 表现 镜下细胞变小，核与浆均呈深蓝或蓝黑色、结构不清，红细胞呈碱性色。B 原因 染色时间过长；染液过多或缓冲液过少；染液或缓冲液偏碱；夏季染色过程中甲醇挥发。 C 纠正 用甲醇脱色后重复染色。亦可用甲醇或瑞氏染液脱色数秒后冲洗，再行镜检，脱色时间根据具体情况决定。2 染色过浅 A表现 胞浆、浆内颗粒及核均不着色或着色过浅，红细胞亦不着色。B 原因 染色时间过短；染色液过少或缓冲液过多；染液或缓冲液偏酸C 纠正 按原染色步骤重复染色。3 染色偏碱 较常见A 表现 红细胞呈蓝色或绿色，细胞核、细胞浆及颗粒染色深，结构不清。酸性颗粒亦蓝染，淋

6、巴细胞呈灰色。B 原因 基本与染色过深之原理相同，玻璃片偏碱、冲洗时间不足亦为可能之原因。C 纠正 如染色过碱，可于其中加1%醋酸少许，或将涂片浸于95%酒精数秒中，然后冲洗。4 染色偏酸 较少见 A 表现 镜下一片红色，胞核及嗜碱性颗粒亦红染或不着色。B 原因 染料放置过久或与空气接触后甲醛氧化而成甲酸；玻片或缓冲液偏酸。C 纠正 新旧染液混合使用，借以调整其PH值，或于染液中加1%碳酸钠适量。5 沉渣过多；主要表现为涂片是那个大量颗粒状深染之渣滓。A 原因 染液与缓冲液混合不均；冲洗前已将染液、缓冲液倾去；染色液未过滤；或天热干燥时，染液中甲醇挥发。B 纠正 加甲醇使沉淀颗粒溶解，再行复染。