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1、常用培养基配方目 录：01糖发酵管02 ONPG培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)09 马尿酸钠培养基10营养明胶11苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15 尿素琼脂16 氰化钾(KCN)培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液23明胶磷酸盐缓冲液24 乳酸-苯酚溶液25 肉浸液肉汤26肉浸液琼脂2
2、7牛肉(或牛心)消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35 EC肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP)37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41 GN增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS)44 DHL琼脂45 HE琼脂46 SS琼脂47 WS琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半
3、固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE培养基57 Honda氏产毒肉汤58 Elek氏培养基(毒素测定用)59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O) 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mL
4、pH7.4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌15min.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管. 注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于361培养,一般观察23d.迟缓反应需观察1430d.02 ONPG培养基成分:邻硝基酚-D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(O-Nitrophenyl-D-galactopyran
5、oside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于361培养13h和24h观察结果.如果-半乳糖苷酶产生,则于13h变黄色,如无此酶则24h不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正p
6、H,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于361培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121高压灭菌15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于361培养25d,哈夫尼亚菌则应在2225培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶
7、于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于361培养24d.哈夫尼亚菌则应在2225培养.加入6%-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在361下培养4h再进行观察.05克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解,分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在361培养
8、7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121高压灭菌15min. 试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于361培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基成分:氯化钠 5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g葡萄糖 2g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.
9、8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于361培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,
10、易造成假阳性的结果.08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)成分:蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于361培养.09 马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小
11、试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌12120min.试剂:三氯化铁(FeCl36H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成.试验方法:用纯培养物接种,于42培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经1015min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10营养明胶成分:蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mLpH6.87.0制法:加热溶解,校正至pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应
12、为6.87.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在2225培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果. 11苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解后分装试管,121高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在361培养4h或1824h.滴加10%三氯化铁溶液23滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨 5g酵母浸膏 3g葡萄糖 1g
13、蒸馏水 1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mLL-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115高压灭菌10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于361培养1824h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 13蛋白胨水(靛基质
14、试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在361培养12d,必要时可培养45d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115高压灭菌15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于361培养12d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定
