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1、附1真菌(1-3)-/-D葡聚糖检测标准操作规程1. 目的规范真菌(1-3)-p-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。2. 原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-p-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的 酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。利用(1-3)- p-D葡聚糖标准品建立。-D-葡聚糖生物效 应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- p-D葡聚糖含量。3. 试剂真菌(1-3) -p-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。试剂盒包装规格：20人份/盒。试剂盒组成：P-G试剂冻干粉状，0.25 ml /支，10支P-G试剂复溶液无色
2、液体，0.3 ml /支，10支样品稀释瓶无色液体，0.9 ml /支，20支复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20C以下冷 冻保存，一周内使用。不能反复冻融试剂溶液。4. 检测设备：LKM动态试管检测仪。5. 实验用具：250 Rl无热原吸头、20-200叫移液器、75C试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、 无热原真空采血管(肝素抗凝剂)。6. 标本采集及送检要求6.1 标本采集要求6.1.1 采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无p葡聚糖采血管；6.1.2 常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。6.2 标本的送检和保存要求
3、标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。若当日不能及时检测的标本应将离心后的血 浆转移至无P葡聚糖的容器内-20C以下冷冻保存，一周内使用。7. 实验操作7.1 在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哗的一声，试管仪温度 达到37C，待用；7.2 取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血12 ml，以400 g离心10分钟；7.3 取富含血小板的血浆100 Rl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75C试 管恒温仪中加热10分钟；7.4 加热10分钟后，将样品稀释瓶从75C试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀 释的样品供试溶液；7
4、.5 取p-G试剂1支，开启；7.6 取p-G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入 p-G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试剂溶液备用；7.7 打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮， 使检测软件进入待采集状态；7.8 取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100叫加入反应试管中，然后 加入50叫试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；7.9 加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试 管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37C反应75分钟，在反应结束前填写试验相关 的信息；7.10反应
5、完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的(1-3)书-G葡聚糖测量值， 进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。8. 假阳性因素8.1 (1-3)-p-D葡聚糖污染。使用非试剂厂家提供的采血管、反应试管、吸头等容易受(1-3)-p-D葡 聚糖污染；8.2 某些纤维素透析膜污染，如血液透析、腹膜透析等；8.3 G试验前注射过香菇多糖、脂肪乳等药物；8.4 手术后使用纱布。9. 假阴性因素9.1 不敏感菌：某些真菌如接合菌(毛霉菌、根霉菌)细胞壁没有(1-3)书-D葡聚糖成分；隐球 菌细胞壁外有荚膜致使(1-3) -P-D葡聚糖释放不出，这些真菌
6、G试验不能检测。有临床症状， 但G试验阴性时，临床医生可考虑这两种真菌感染的可能。9.2 定植菌：研究显示，定植真菌不引起患者血液的(1-3)书-D葡聚糖升高，即使是严重定植。 因此G试验阴性可以区分真菌定植或侵袭性感染。10. 结果分析表1结果分析表检测结果结果分析d100.5pg/ml阴性结果；如患者出现宿主因素72小时再次检测。100.5d151.5pg/ml阳性结果；6-24小时内复查确认。存在宿主因素建 议用药治疗。11. 反应曲线分析表2反应分析曲线正常的真菌阳性曲线异常的真菌阳性曲线rzi-正常的真菌阳OWI异常的真菌阳性曲线“ -性曲线走势呈走势呈“S”形，曲线前 X反“S ”
7、形，曲线段突然下降，曲线后段fr一终点的RT值较趋平，曲线终点的RT低。值较高。Fb-|_卜.胃jq.*|*ir|i*mf.1、异常的真菌阳性曲线一般是临床用药产生的干扰，建议排除干扰后重新检测；2、对达限时间短（700s），测量值高（6000pg/m 1）的阳性结果，应做反应曲线分析；3、为对患者负责，建议对检测阳性结果都做反应曲线分析。12. 注意事项12.1预热采集 在进行试验之前，LKM动态试管检测仪一定要提前预热30分钟左右，使其达到工 作温度37C后，打开检测软件连接试管仪，在加样反应前点击“开始”按钮，使软件进入待 采集状态。12.2取样与保存 可检测的样本：血液、尿液、腹水等；
8、采集要求：采样过程要求无菌操作， 无热原真空采血管采血；保存：样品采集后应在半小时内离心，若4小时内不用，可分离出 血浆置-20C以下冰箱中进行冷冻保存30天。12.3样本预处理及加样反应 采有血液的无热原真空采血管应以400g离心10分钟；取已分离 的血浆上清液的中部；75C加热应为时间10分钟，加热完毕后冷却至室温；插管要一 次性插到底，插入后不能再触碰；每个样本的平行两管必须插入仪器的连续两孔；可在 插入管反应后再填写相关的试验信息，但一定要在试验结束前填写，否则数据将不保存。13. 临床意义13.1 G试验可以早期、快速诊断侵袭性真菌病（IFD），可用于真菌感染早期筛查；13.2适用于念珠菌，曲霉，肺抱子菌，镰刀菌，地霉，组织胞浆菌，毛抱子菌等侵袭性感染检测， 不适用于检测隐球菌和接合菌感染；13.3与GM试验（半乳甘露聚糖检测）联合可区分曲霉菌或其他真菌感染；13.4高危患者建议每周检测2-3次。参考文献1.真菌（1-3）-p-D葡聚糖检测试剂盒说明书。（此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容，供参 考，感谢您的配合和支持）
